Механизмы образования и антигенсвязывающие свойства бифункциональных моноклональных антител

• Автор: Дмитриев, Александр Дмитриевич
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 176 с. : ил

Получение клоновпродуцентов моноклональных антител. Фракционирование продуктов секреции тетрадомы для
количественно проанализированы популяции антител, синтезируемых квадромой. Также впервые проведен анализ состава квадромных антител с помощью двумерного электрофореза в полиакриламидном геле. Для БИАТ со специфичностью антиЭНДПХ убедительно доказано наличие гомологичного предпочтения в одной из пар и случайную рекомбинацию в другой. Разработанные в настоящей работе оригинальные экспериментальные подходы и теоретические модели расширяют возможности анализа квадромных антител и механизмов, управляющих образованием этих антител в квадромных клетках. Кроме того, анализ аффинности БИАТ, образованных квадромой, показал, что истинная аффинность любого антигенсвязывающего сайта БИАТ нашей панели тождественна истинной аффинности соответствующих антигенсвязывающих сайтов родительских антител. Продемонстрировано отсутствие кооперативного эффекта при связывании БИАТ с антигенами. На панели бифункциональных антител показано, что избыток одного из антигенов не влияет на связывание аффинность БИАТ со вторым антигеном.


Впервые для оценки характера взаимодействия антител с иммобилизованным антигеном использована модель, которая предполагает сравнительный анализ параметров связывания родительских моноклональных антител могут связываться с иммобилизованным антигеном моновалентно и бивалентно и бифункциональных моноклональных антител, несущих тождественный сайт связывания с антигеном могут связываться с иммобилизованным антигеном только моновалентно. Характер взаимодействия антител с
иммобилизованным антигеном проанализирован как классическими методами радиоиммунологическим и твердофазным ИФА, так и с помощью оптического биосенсора ГАбуб. Показано, что оба метода дают идентичные результаты. Сделан вывод о перспективности биосенсорных систем для оценки взаимодействия антигенантитело. Впервые проведен сравнительный анализ эффективности двух типов меченых молекул антител антител, конъюгированных с пероксидазой хрена традиционного конъюгата и бифункциональных антител, несущих тождественный сайт связывания с тестируемым антигеном и пероксидазой хрена БИАТ, как меченые молекулы часто называют конъюгатами нового поколения. Сделан вывод об относительной неэффективности БИАТ, как меченых молекул в твердофазных тестах. Доказано, что наиболее корректной моделью для оценки наличия или отсутствия бивалентного связывания МКА с иммобилизованным антигеном является сравнительный анализ ассоциации родительских МКА и соответствующего АГсвязывающего сайта БИАТ. Сделан вывод об относительной неэффективности БИАТ, как меченых молекул в твердофазных тестах. Полученные результаты могут представлять интерес для возможного использования этого нового класса биомолекул.