Применение siRNA для подавления репродукции респираторного синцитиального вируса, одного из этиологических агентов вирус-индуцированной бронхиальной астмы

• Автор: Акимов, Виталий Сергеевич
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 113 с. : 16 ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ. ВВЕДЕНИЕ. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Л. РСВ и вирусиндуцированная бронхиальная астма. Л. 1. Респираторные вирусные инфекции и бронхиальная астма. Л . Противовирусный иммунитет у человека. Л . Л . Л . Л . Связь РСВинфекции с бронхиальной астмой. История открытия. Механизм интерференции РНК. РНК. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Культуральный штамм вируса и клеточная линия. Экспериментальные животные. Основные реактивы, использованные в работе. Методы. Трансфекция клеток МА4 i и заражение респираторносинцитиальным вирусом. Контроль трансфекции i. Экспериментальная модель инфекции РСВ на мышах. Титрование вируса в смывах из легких мышей. Статистический анализ. ГЛАВА 3. Дизайн i против мРНК белка Р РСВ. При попадании в клетку двухцепочечной РНК она разрезается РПКаза1 IIподобным ферментом, который называется i, на короткие двухцепочечные РНК длиной пары нуклеотидов i от англ. Эти i включаются в состав сложного эффекторного белкового комплекса I ii ii x, обнаруживающего и разрушающую мРНКмишень, соответствующую данной i 6.


Цель работы разработка подхода, основанного на использовании механизма интерференции РНК, для подавления репликации РСВ основного этиологического фактора возникновения бронхиолита у детей, а также причинозначимого фактора, предраспологающего к развитию бронхообструктивного синдрома и бронхиальной астмы, и одной из основных причин вирусиндуцированных обострений бронхиальной астмы у детей и взрослых. Проанализировать геном РСВ. Произвести дизайн i против мРНК кандидатиого белкамишени РСВ. Оценить антивирусную активность i против мРНК белкамишени РСВ i vi в культуре клеток. Оценить антивирусную активность i против мРНК белкамишени РСВ i viv на мышах. Выявить наиболее эффективные i против мРНК белкамишени РСВ. Научная новизна. Впервые в Российской Федерации экспериментально изучена возможность использования средств на основе i против вирусов на клеточной модели и на экспериментальных животных. Проведен дизайн i против мРНК белка Р РСВ, спроектированы 6 уникальных экспериментальных образцов i, получивших рабочие названия i, i, i, i, i и i 1, нацеленных к различным участкам мРНК белка Р РСВ в пределах открытой рамки считывания. Па модели инфекции в культуре клеток МЛ 4 проведена оценка противовирусного действия 6 экспериментальных образцов и препарата смеси этих образцов, названного iix, при помощи микроскопического наблюдения за состоянием монослоя клегок, методом титрования вируса и определением количества вирусной РНК в культуральной жидкости методом ПЦР в реальном времени по сравнению с нсспецифической i к мРНК белка V4 риновируса серотипа. Подобранные специфические i эффективно подавляют репродукцию РСВ в культуре клеток. Получена экспериментальная модель инфекции на мышах .