Активационный апоптоз субпопуляций Т-лимфоцитов при ишемической болезни сердца

• Автор: Юдин, Александр Александрович
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : 18 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Активация Тлимфоцитов пролиферация и апоптоз
1.2. Апоптоз Тлимфоцитов механизмы развития и проявления
1.3. Активационный апоптоз Тлимфоцитов
1.4. Роль иммунных механизмов в развитии атеросклероза и ишемической болезни сердца
1.5. Малые действующие дозы как общебиологическая закономерность
1.6. Действие на иммунную систему малых доз ионизирующего облучения
1.7. Клиникоэпидемиологическая характеристика облученных малыми дозами
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Клиническая характеристика больных
2.2. Клинические лабораторные методы исследования
2.3. Инструментальные методы исследования
2.4. Реактивы
2.5. Получение крови и сыворотки
2.6. Проверка жизнеспособности клеток
2.7. Оценка содержания лимфоцитов
2.8. Выделение мононуклеариых клеток методом одноступенчатого градиента плотности фиколлурографина
2.9. Культивация лимфоцитов в течение часов
2 Культивация лимфоцитов в течение часов
2 Моноклональные антитела и проточная лазерная цитометрия
2 Определение субпопуляций лимфоцитов
2 Оценка апоптоза лимфоцитов
2 Определение количественною содержания Срсактивного белка, антител к двусииральной ДНК, антител к фосфолипидам I, I, антител к кардиолигшну I в сыворотке крови
2 Статистическая обработка данных и дополнительные параметры оценки экспериментальных значений апоптоза
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1. Результаты клинического обследовании больных
3.1.1. Клиникофункциональная характеристика больных атеросклерозом магистральных артерий
3.1.2. Клиникофункциональная характеристика больных ишемической болезнью сердца
3.2. Результаты иммунологического обследования больных
3.2.1. Распределение основных субпопуляций Тлимфоцитов у обследованных больных
3.2.2. Распределение С5клеток РаБэксирессия у обследованных больных
3.2.3. Изучение спонтанного и индуцированного ФГЛ аноптоза, его неравномерность среди субпопуляций лимфоцитов у обследованных больных
3.2.4. Изучение концентрации СР1 и уровня антител к кардиолипину у обследованных больных
3.2.5. Изучение показателей активационного апоптоза субпопуляций Т лимфоцитов иод влиянием терапии статинами и рблокаторами
Глава 4. Обсуждение результатов
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы


Помимо этого, CD8+ Т-лимфоциты секретируют ряд цитокинов, среди которых наибольшее значение имеет IFN-y. Из двух разновидностей Т-хелперов, ТЫ-лимфоциты регулируют стимуляцию Т-клеточного иммунитета, ТЬ2-лимфоциты - гуморального иммунного отвела. Т-хелперы, пройдя антиген-зависимую дифференцировку, вырабатывают различные цитокины, костимулируют В-лимфоциты через систему контактных межклеточных взаимодействий и секреции ростовых факторов для В-клеток. Вместе с тем участвуют в стимуляции Т-киллеров в результате секреции IL-2. Активация лимфоцитов начинается с взаимодействия TCR-CD3 с комплексом МНС и Т-эпитопа, либо под влиянием митогенов, которые относятся к суперантигенам. Трансдукция сигнала и активация генома лимфоцитов сопровождается комплексом морфологических и биохимических изменений в лимфоцитах []. Помимо активации TCR, важными являются дополнительные сигналы, которые исходят от антигенпрезентирующих клеток при непосредственном межклеточном контакте. Среди основных взаимодействий, имеет значение взаимодействие С8(Т-лимфоцит) -CD/CD(AnK) []. In vitro, действие ко-стимуляторов моделируется с помощью митогенов. Для активации- Т-лнмфоцитов используют растительные лектины — фитогемаглютинин (ФГА), конконавалин А, комбинация форбол-миристил-ацетата (ФМА) и ионофоров Са“+. Также для индукции активации Т-лимфоцитов используются МонАТ к CD3 и другим компонентам рецепторного комплекса. При активации запускается цепь внутриклеточных каскадных реакций, при которых на поверхности клеток появляются в различные сроки молекулы -активационные антигены. Первой после действия стимулятора появляется молекула CD, которая представляет собой лектиноподобный белок - димер, состоящий из молекул и кДа. РНК для этой молекулы экспрессируется уже через мин после начала активации, при этом на поверхности клеток молекула CD появляется через 2-3 часа с максимальной экспрессией через часа. Стимуляция CD МонАТ способствует пролиферации лимфоцитов (в присутствии ФМА). Экспрессия CD широко представлена при NK-лимфоцитозе и назальной NK-лимфоме [,9]. Изменение конформации TCR и корецепторов приводит к фосфорилированию тирозинкиназ: pf>n и pLck. Они вызывают фосфорилирование цитоплазматической части TCR и связанных с ним белков. При этом происходит активация тирозинкииазы ZAP-, которая активирует ряд адаптивных белков и протеиикиназ, формирующих отдельные активационные каскады: например, MAP-каскад. Са2+, мобилизуемые из депо или привлекаемые из внеклеточной среды. Конечным результатом трансдукции сигнала становится формирование транскрипционных факторов, ответственных за включение генов активации, в частности, гены IL-2 и его рецептора. Для активации Т-клеток наиболее важны трансфекционные факторы NF-AT и АР-1 [5]. Завершением каскада активирующего сигнала является экспрессия генов, в том числе ростовых факторов и их рецепторов. Отмечается усиление син тетических процессов в клетке, увеличение ее ядра, изменение структуры хроматина. Клетка увеличивается в объеме — бласттрансформация. В дальнейшем наступает дивергенция: в присутствии ростовых факторов клетка пролиферирует (вступает в митоз), при их отсутствии вступает в апоптоз [, ]. После активации Т-лимфоцита и вступления сто в фазу Gi клеточного цикла происходит пролиферация клеток под воздействием ростовых факторов. Вступление клетки в митоз контролируется циклинами, которые связаны с киназами серинтреониноного типа (cdc, cdk). Для вступления в цикл наиболее важен циклин D и зависимые от него негокиназы cdk4 и cdk6, а для дальнейшего продвижения по циклу и вступления в пролиферацию — действующие последовательно циклины Е, А и В и зависимые от них киназы [, ]. Апоптоз - активная форма гибели клетки, являющаяся результатом реализации ее генетической программы или ответом на внешние сигналы и требующая затрат энергии или синтеза молекул de novo []. Несмотря на то, что понятие и сам термин «апоптоз» (от греческого - опадание листьев) и его подробное описание появилось только в году, множество примеров программированной клеточной гибели было известно под другими названиями [9].