Совершенствование гибридомной технологии и создание моноклональных антител для систем иммуноанализа

• Автор: Самойлович, Марина Платоновна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 238 с. : ил.

Введение. Получение иммунных лимфоцитов. Подготовка к слиянию клеток. Гибридизация слияние клеток. Скрининг выявление Iибридовпродуцентов антител. Клонирование гибридомиродуцентов антител. Массовое культивирование и пассирование гибридом на мышах. Иммуноанализ на основе моноклональных антител. Глава 2. Глава 3. Развитие приемов гибридомной технологии. Исследование свойств и испытание штамма миеломы. Выбор линии мышейдоноров иммунных лимфоцитов. Приемы наработки моноклональных антител. Глава 4. Изучение свойств моноклональных антител против флуоресцеина. Глава 5. РС вируса человека. РС вируса. Обсуждение. Глава 6. Антигенные свойства человека. Обсуждение. Глава 7. Изучение элитопной специфичности моноклональных антител. Обсуждение. Благодарности. ГАТ среде в условиях массовой культуры, с последующей криоконсервацией и рассевом после размораживания сразу в условия клонирования 9. Посевная концентрация клеток после слияния является фактором, определяющим успех получения гибридов. Уменьшение расчетной численности сплсноцитов, засеянных в одну лунку луночного планшета, ниже 5 приводит к снижению общею выхода гибридов и доли среди них гибридомпродуцентов.


Высокая зависимость пролиферации клеток от экзогенных ростовых факторов может служить причиной нестабильности роста как плазмацитом в культуре, так и получаемых на их основе клеточных гибридов. Скрининг выявление гибридовпродуцентов антител Методы тестирования продуктов секреции гибридомных клеток выбираю г в первую очередь исходя из природы антигена. Принципиально различаются методы выявления антител против гаитенов или белков, против растворимых молекул или молекул, встроенных в клеточные мембраны. Независимо от природы антигена все меюды тестирования должны отвечать ряду требований. Вопервых, они должны обладать высокой чувствительностью, чтобы обеспечить выявление целевого продукта на самых ранних этапах роста гибридов, когда численность клеточной популяции исчисляеюя десятками сотней клеток. Вовторых, они должны позволять одновременно исследовать большое количество от нескольких сотен до тысяч образцов. Наконец, при выборе системы скрининга нужно учитывать возможные способы применения получаемых МкАт. Наиболее широкое распространение получили методы иммуноанали а, основанные на использовании ферментных или флуоресцентных меток. Радиоиммунные тесты все более вытесняются неизотопными методами. Антитела против растворимых молекул выявляют с помощью разнообразных вариантов твердофазною ИФА. Твердой фазой служит поверхность полистироловых или поливинилхлоридных планшеюв. Определенные преимущества дает использование в качестве твердой файл нитроцеллюлозы, обладающей крайне высокой сорбционной емкостью в отношении широкого спектра соединений. Иммуноанализ на нитроцеллюлозе получил название ШЛБРОГ .