Характеристика in vitro стромального микроокружения костного мозга больных апластической анемией

• Автор: Петрова, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 14.00.29
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 с. : ил.

1.1 Актуальность проблемы
1.2 Цель работы
1.3 Основные задачи
1.4 Научная новизна и практическое значение работы.
1.5 Материалы и методы исследования
1.6 Основные положения, выносимые на защиту.
1.7 Содержание работы по главам.
1.8 Благодарности.
Глава 1. Обзор Литературы
1.1 Стволовая кроветворная клетка.
1.2 Стволовая мезенхимная клетка
1.3 Ниша стволовых кроветворных клеток
1.4 Сигнальные пути кроветворной ниши, участвующие в регуляции СКК
,, . сшЬ. 2
1.5 Лпластичсская анемияТ.Ц.4
Глава 2. Материалы к методы
2.1 Получение клеток костного мозга здоровых доноров и больных апластической
анемией.
2.1.1 Подсчет клеток
2.1.2 Получение мезенхимных стромальных клеток человека.
2.2 Дифференцировка МСК человека
2.2.1 Жировая дифференцировка МСК человека
2.2.2 Костная дифференцировка МСК.
2.3 Гистохимическое окрашивание
2.3.1 Окрашивание i
2.3.2 Метод окраски ализариновым красным
2.4 Культивирование колониеобразующих единиц фибробластов человека.
2.5 Получение длительных культур костного мозга человека декстеровского типа.
2.6 Получение сыворотки от больных апластической анемией.
2.7 Выделение РНК га анализируемых клеток
2.1 А Выделение РНК.
2.8 Определение количества и чистоты полученной РНК
2.8.1 Построение первых цепей ДНК на РНК
2.8.2 Метод полимеразной цепной реакции.
2.9 Методы оценки экспрессии генов.
2.9.1 Оценка экспрессии генов с помощью программы
2.9.2 Оценка экспрессии генов при помощи метода модификации Саузернблот
гибридизации.
2.9.2.1 Перенос ПЦР фрагментов на нейлоновые фильтры
2.9.2.2 Создание гибридизационных зондов
2.9.2.3 Гибридизация
2.9.2.4 Анализ фильтров с помощью прибора Фосфоимаджер
2.9.2.5 Оценка результатов, полученных на приборе Фосфоимаджер
2. ПЦР в реальном времени
2. Статистическая обработка данных
Глава 3. Результаты
3.1 Сравнительная характеристика мезенхимных стромальных клеток, полученных
из костного мозга доноров и больных апластической анемией
3.1.1 Рост МСК в культуре.
3.1.2 Дифференцировка МСК в культуре
3.1.2.1 Жировая дифференцировка МСК.
3.1.2.2 Костная дифференцировка МСК.
3.2 Сравнительная характеристика потомков МСК колониеобразующих единиц
фибробластов, полученных га костного мозга больных АА и доноров
1.6 Основные положения, выносимые па защиту.
1. Мезенхимные стромальные клетки больных апластической анемией на первом этапе течения болезни характеризуются увеличенной способностью к росту в культуре но сравнению с донорами.
2. Па этапе длительной иммуносупрессивной терапии способность мезенхимных сгромальных клеток больных апластической анемией к костной и жировой дифференцировкам изменена по сравнению с донорами.
3. Основные характеристики колопиеобразующих единиц фибробластов КОЕФ больных апластической анемией на начальном этане течения болезни отличаются от таковых доноров.
4. У больных апластической анемией, получающих продолжительную иммуносулрессивную терапию возможна нормализация параметров роста КОЕФ.
5. На фоне длительной терапии может происходить активация стромалыюго микроокружения, отражающейся в значимом увеличении экспрессии генов, участвующих в регуляции стволовых кроветворных клеток.
1.7 Содержание работы по главам.
Оглавление
Основные использованные обозначения и сокращения
Введение
Глава 1 Обзор научной литературы
Глава 2 Материалы и методы
Глава 3 Результаты и обсуждение
Глава 4 Заключение
Выводы
Список использованной литературы


У больных апластической анемией, получающих продолжительную иммуносулрессивную терапию возможна нормализация параметров роста КОЕФ. На фоне длительной терапии может происходить активация стромалыюго микроокружения, отражающейся в значимом увеличении экспрессии генов, участвующих в регуляции стволовых кроветворных клеток. Содержание работы по главам. Список использованной литературы. Благодарности. Я выражаю искреннюю благодарность своим научным руководителям заведующей лабораторией Физиологии кроветворения д. Нине Иосифовне Дризе и д. Елене
Алексеевне Михайловой за чуткое руководство, поддержку и постоянную помощь в освоении методик, проведении исследований, интерпретации полученных данных и написании работы к. Шипуновой Ирине Николаевне, к. Свинаревой Дарье Анатольевне, к. Эршлсру Максиму Александровичу за непосредственное участие в работе, и помощь в овладении методами молекулярной биологии Бигильдесву Алексею Евгеньевичу за помощь в подборе праймеров, к. Момотюк Кире Сергеевне за предоставление клеток костного мозга здоровых доноров к. Виноградовой Марии Алексеевне за предоставление клеток костного мозга больных апластической анемией к. Сударикову Андрею Борисовичу и к. Мисюрину Андрею Витальевичу за помощь в освоении методики ПЦР в реальном времени к. Розову Федору Николаевичу, сотруднику института Молекулярной Биологии им. В. А. Энгельгардта, за содействие в проведении анализа экспрессии генов и обсчете радиоактивно меченых фильтров на приборе , а также всем коллегам и сотрудникам лаборатории Физиологии кроветворения за теплую атмосферу, постоянное внимание и поддержку.