Молекулярно-генетическая диагностика и мониторинг терапии хронического миелоидного лейкоза

• Автор: Вельченко, Мария Владимировна
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 122 с. : 27 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Молекулярногенетические механизмы патогенеза
хронического миелоидного лейкоза.
1.2. Молекулярногенетические основы терапии
хронического миелоидного лейкоза ингибиторами тирозинкиназ.
1.3. Молекулярногенетическая диагностика и мониторинг эффективности терапии хронического миелоидного лейкоза ингибиторами тирозинкиназ .
1.4. Молекулярногенетические механизмы резистентности к терапии хронического миелоидного лейкоза
ингибиторами тирозинкиназ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Характеристика пациентов
2.2. Стандартное цитогенетическое исследование клеток костного мозга
2.3. Количественная оценка экспрессии химерного
онкогена ВСЯАВЬ типа р0.
2.4. Определение первичной последовательности гена
ВСЯАВЬ методом прямого ДНК секвенирования.
2.5. Статистическая обработка данных.
Глава 3. Молекулярногенетические исследования
минимальной остаточной болезни у пациентов
с хроническим миелоидным лейкозом
Глава 4. Анализ рефрактерности у пациентов
с хроническим миелоидным лейкозом
Глава 5. Анализ рефрактерности у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом
с мутациями гена ВСЯАВЬ и без мутаций
Глава 6. Анализ мутаций гена ВСЯАВЬ у резистентных к терапии иматинибом пациентов
с хроническим миелоидным лейкозом
Глава 7. Сравнительный анализ определения первичной
последовательности ДНК и кДНК
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Основные положения диссертации доложены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения сердечно-сосудистых и эндокринных заболеваний» (- сентября года, г. Санкт-Петербург), на II ежегодной научно-практической конференции ЮФО «Диагностика и мониторинг эффективности терапии XMJT в ЮФО» ( декабря года, г. Ростов-на-Дону), на XX Интернациональном Конгрессе генетиков (- июля года. Берлин, Германия), на Европейском Конгрессе Генетиков ( мая - 3 июня, год, г. Барселона, Испания), на III ежегодной научно-практической конференции ЮФО «Диагностика и мониторинг эффективности терапии ХМЛ в ЮФО» (- декабря года, г. Кисловодск), на VI Симпозиуме с международным участием «Биологические основы терапии онкологических заболеваний» (- января года, г. Москва). Работа содержит 9 таблиц и рисунков. Глава 1. Хронический миелолейкоз - клональный миелолролифсративный процесс, затрагивающий полипотентные гемопоэтические стволовые клетки. В основе патогенеза заболевания лежит формирование специфической генетической аномалии - транслокации t(9;)(q;ql 1), приводящей к образованию химерного гена BCR-ABL с повышенной тирозинкиназной активностью. Впервые в году J. Rowley было определено, что у всех обследованных больных ХМЛ обнаруживается реципрокная транслокация между хромосомами 9 и - t(9;)(q;ql 1), в результате которой появляется хромосома с укороченным длинным плечом. Эта хромосома была названа филадельфийской (Ph-хромосома). Обнаружение Ph-хромосомы в предшественниках нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, моноцитов, макрофагов, эритробластов, мегакариоцитов, В-лимфоцитов при отсутствии в фибробластах костного мозга и кожи позволило предположить и в последующем доказать, что транслокация t(9;)(q;ql 1) возникает на уровне стволовой гемопоэтической клетки. В норме на длинном плече хромосомы 9 расположен ген ABL (Abelson gene), кодирующий образование белка plA? L. Этот белок является ABL тирозинкиназой и играет важную роль в регуляции нормального клеточного цикла. ABL тирозинкиназа обладает сходством с киназами семейства SRC и состоит из нескольких участков: домен SH 1 (SRC homology 1), домен SH2 (SRC homology 2), домен SH3 (SRC homology 3), ДНК-связывающий домен, обогащенный пролином домен, актин-связывающий домен и другие (Melo J. V., Hughes Т. Р., Apperley J. F., ). Домен SH1 этого белка выполняет функцию тирозинкиназы. Физиологическое действие ABL-тирозинкиназы заключается в связывании с аденозинтрифосфатом (АТФ) и последующем переносе фосфата от АТФ к тирозину соответствующих белков, что определяет процесс внутриклеточного фосфорилирования. Эти механизмы определяют передачу внутри клетки сигналов, необходимых для жизнедеятельности клетки. Соединение ABL тирозинкиназы с АТФ происходит путем встраивания АТФ в строго определенное место молекулы, называемое АТФ связывающим карманом. Домены SH2 и SH3 белка р0 ABL участвуют в обеспечении межклеточной интеграции и восприятии информационных сигналов микроокружения. Это достигается благодаря взаимодействию ABL тирозинкиназы с интегрином и актином (Melo J. V., Hughes Т. Р., Apperley J. F., ). За счет внутримолекулярных связей домен SH3 выполняет функцию естественного блокатора активности тирозинкиназы в нормальных условиях. Его удаление из клетки или перемещение в другую позицию вызывает активацию тирозинкиназы. С SH3 доменом связывается адаптерный белок crkl, который влияет на пролиферацию клеток через активацию SOS/RAS сигнальных путей и подавление апоптоза путем активации Р-киназ. В нормальных клетках ген BCR (the breakpoint cluster region) кодирует образование белка plBCR, и располагается на длинном плече хромосомы. Этот белок содержит ряд важных для патогенеза хронического миелоидного лейкоза участков. В одном из доменов располагается серинтреонинкиназа, активация которой в конечном итоге ведет к активации факторов транскрипции, определяющих пролиферативную активность клетки. При транслокации t(9;)(q;ql 1) часть гена ABL оказывается перемещенной с хромосомы 9 на длинное плечо хромосомы в локус расположения гена BCR. В результате образуется химерный ген BCR-ABL с повышенной тирозинкиназной активностью и играющий ключевую роль в лейкомогенезе.