Исследование молекулярных механизмов RAL-опосредованной стимуляции метастазирования

• Автор: Рыбко, Вера Александровна
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 125 с. : ил.

Список сокращений.
Введение.
Малые ГТФазы и .
Механизмы активации белков i
у Г ЦП И 4. 1 к. 1 О

Экзоцист .

Белки На и злокачественная трансформация клеток
Белки Ка1 и пролиферация клеток
Белки Иа1 и апоптоз
Белки Иа1 и подвижность клеток.
Белки Иа1 и изменения экспрессии генов.
Влияние белков Иа1 на различные аспекты опухолевой прогрессии
Материалы и Методы
Клеточные линии.
Выделение нуклеиновых кислот
. Выделение плазмидной ДНК.
Выделение фрагментов ДНК для клонирования из агарозных гелей .
I
Аналитический электрофорез ДНК в агарозных гелях
Молекулярное клонирование.
Получение компетентных клеток . i
Трансформация компетентных клеток .i.
Обработка ДНК рестрицирующими эндонуклеазами
Реакция лигирования
Полимеразная цепная реакция ГЩР.
Трансфекция.
Инфицирование клеток Анализ белков .
Приготовление клеточных лизатов.
Всстсрнблот гибридизация.
Приготовление образцов для определения ферментативной активности протеаз
Анализ желатинозной активности.
Анализ активности иРА
Клеточные эксперименты.
Анализ динамики роста клеток с использованием МТТ
Анализ зарастания раны клеточными линиями i vi i
Тест на образование колоний в условиях разреженной популяции.
Тест на образование колоний в полужидкой среде.
Тест на движение по градиенту концентраций факторов роста
Тест на инвазию i vi
Определение спонтанной метастатической активности и туморогенности
Статистическая обработка результатов
Растворы, реагенты и среды
Результаты
Получение клеточных линий, экспрессирующих различные варианты и i .
Исследование характеристик клеточных линий
Исследование динамики роста полученных культур i vi






















Исследование миграционной способности полученных клеточных линий
i .
Тесг на колонисобразование в условиях разреженной популяции.
Тест на колонисобразование в неприкрепленных условиях.
Тест на подвижность по градиенту концентрации ростовых факторов i vi.
Тест на инвазию i vi.
Анализ экспрессии и активности белков, ассоциированных с канценрогенезом.
Анализ уровня секреции матриксных металлонротеаз ММР
Анализ уровня секреции урокиназаподобного активатора плазминогена иРА
Анализ уровня экспрессии v1
Анализ уровня экспрессии гена
Анализ уровня экспрессии i.
Анализ влияния белков на активацию сигнальных каскадов
Исследование туморогенности и спонтанной метастатической активности полученных
клеточных линий
Анализ туморогенности.
Анализ спонтанной метастатической активности СМА
Обсуждение.
Выводы
Список использованной литературы


Анализ экспрессии и активности белков, ассоциированных с канценрогенезом. Анализ уровня экспрессии i. Анализ туморогенности. Обсуждение. Малые ГТФазы также называемые малыми белками это небольшие молекулы, способные связываться с ГТФ и гидролизовать его до ГДФ. Существует большое количество различных семейств малых ГТФаз, наиболее известными из которых являются белки . В геноме человека закодировано более 0 различных членов семейства , но и наиболее близки к , i и самым известным белкам этой группы. Белки играют огромную роль в канцерогенезе. Также считается доказанной способность онкогенных форм трансформировать определенные типы клеток i vi. Мутантный активный аллель может приводить к гиперплазии и дисплазии уже через несколько дней после индукции его экспрессии v . Активация белков происходит при связывании с определенными индукторами через адапторные белки такие, как 2, с которыми также связываются и активаторы обмена гуаниловых нуклеотидов i i x . ГТФсвязанное состояние. Подавление активности малых ГТФаз происходит при гидролизе ГТФ до ГДФ и осуществляется с помощью белков, обладающих активиостью ivi i. В ГТФсвязанном состоянии белки могут активировать большое количество эффекторов. Наиболее известными являются I3 Ii3i, чьи функции в клетке связаны с регуляцией баланса выживанияапоптоза, а также сигнальный каскад, регулирующий клеточное деление. Стимуляция эффекторов приводит к значительному изменению профиля экспрессии генов, связанных с пролиферацией, регуляцией апоптоза и дифференцировки клеток.