Выделение продуцента альфа-специфичной циклодекстринглюканотрансферазы из природных источников и разработка технологии ферментного препарата на его основе

Выделение продуцента альфа-специфичной циклодекстринглюканотрансферазы из природных источников и разработка технологии ферментного препарата на его основе

Автор: Строева, Светлана Сергеевна

Шифр специальности: 05.18.10

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2006

Место защиты: Москва

Количество страниц: 262 с. ил.

Артикул: 3307476

Автор: Строева, Светлана Сергеевна

Стоимость: 250 руб.

Выделение продуцента альфа-специфичной циклодекстринглюканотрансферазы из природных источников и разработка технологии ферментного препарата на его основе  Выделение продуцента альфа-специфичной циклодекстринглюканотрансферазы из природных источников и разработка технологии ферментного препарата на его основе 

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Циклодекстрины строение и свойства.
1.1.1. Строение циклодекстринов
1.1.2. Свойства циклодекстринов
1.2. Циклодскстринглкжанотрансферазы.
1.2.1. Строение ЦГТазы
1.2.2. Реакции, катализируемые циклодекстринглюканотрансферазой
1.3. Циклодекстриногенные бактерии продуценты циклодекстринглюканотрансфераз.
1.3.1. ii
1.3.2. i i
1.3.3. Алкалофильные бациллы.
1.3.4. Продуценты циклодекстринглюканотрансферазы, развивающиеся при нормальных значениях
1.3.5. Термотолерантные циклодекстриногены.
1.3.6. Продуценты циклодекстринглюканотрансфераз, не относящиеся к порядку i i.
1.4. Выбор продуктивного штамма для процессов получения ЦГТазы
1.5. Условия культивирования микроорганизмов продуцентов циклодекстринглюканотрансфераз
1.6. Идентификация микроорганизмов.
1.7. Получение циклодекстринов.
1.8. Перспективы практического использования циклодекстринов.
1.8.1. Пищевая промышленность
1.8.2. Биотехнология и химия.
1.8.3. Косметическая промышленность
1.8.4. Сельское хозяйство
1.8.5. Медицина
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1.1. Микроорганизмы
2.1.2. Образцы почвы для скрининга.
2.1.3. Скрининг ЦГТактивных микроорганизмов из природных мест обитания и из коллекции культур МГУПП
2.1.4. Питательные среды.
2.1.5. Методы исследования бактерий
2.1.6. Подбор оптимальной для хранения культуры питательной среды
2.1.7. Выращивание культур микроорганизмов в условиях глубинной ферментации
2.1.8. Метод аддитивнорешетчатого математического описания объекта
2.1.9. Определение содержания сухих веществ
2.1 Определение величины растворов
2.1 Определение восстанавливающих сахаров
2.1 Определение белка
2.1 Способы выделения циклодскстринглюканотрансферазы из культуральной жидкости i . IАМБ.
2.1 Получение лиофилизированных ферментных препаратов
2.1 Определение содержания влаги в препарате.
2.1 Методы определения ферментативных активностей
2. Определение азьфаЦГТазной активности штаммов продуцентов,
выращенных на тестсредах
2Количественный метод определения активности альфаЦГТ
2 Измерение активности бетаЦГТазы фенолфталеиновым методом
2 Метод определения внутриклеточной активности альфаЦГТазы
2 Метод определения декстриназной крахмалоразжижающей активности ЦГТаз
2.1 Определение циклодекстринов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ВЭЖХ
2.1 Метод определения термостабильности альфаЦГТазы
i i 1АМБ
2.1 Метод определения рНстабилыюсти альфаЦГТазы
i i 1АМБ
2.1 Стимулятор роста микроорганизмов полифенольной природы
Гипоксен.
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ
2.2.1. Скрининг ЦГТактивных микроорганизмов из природных мест обитания и из коллекции культур МГУПП
2.2.2. Исследование фенотипических признаков и идентификация штамма продуцента i i 1АМБ.
2.2.2.1. Морфологические особенности клеток i i 1 АМБ
2.2.2.2. Культуральные признаки штамма i i 1 АМБ
2.2.2.3. Физиологобиохимические признаки продуцента.
2.2.2.4. Устойчивость продуцента i i 1АМБ к факторам внешней среды.
2.2.2.5. Филогенетические особенности культуры
2.2.2.6. Подбор оптимальной для хранения культуры ii 1АМБ питательной среды
2.2.3. Выбор предпочтительного варианта питательной среды для получения альфаЦГТазы ii 1АМБ с помощью метода многокритериального выбора
2.2.4. Изучение динамики биосинтеза альфаЦГТазы в процессе культивирования ii 1АМБ на среде с растворимым крахмалом.
2.2.5. Оптимизация состава питательной среды с растворимым крахмалом
2.2.6. Исследование влияния физических методов обработки крахмала на биосинтез ЦГТазы ii 1АМБ
2.2.6.1. Исследование влияния обработки крахмала ультразвуком на биосинтез ЦГТазы ii АМБ
2.2.6.2. Исследование влияния обработки крахмала микроволновым излучением на биосинтез ЦГТазы ii АМБ
2.2.6.3. Исследование влияния обработки крахмала рентгеновскими лучами на биосинтез ЦГТазы ii АМБ.
2.2.7.Влияние источников фосфора на биосинтез ЦГТазы ii АМБ
2.2.8. Оптимизация состава питательной среды для биосинтеза ЦГТазы ii 1АМБ методом аддитивнорешетчатого математического описания объекта.
2.2.9. Изучение влияния исходной ферментационной среды на биосинтез альфаЦГТазы бактериями ii АМБ.
2.2 Разработка способов получения посевного материала ii АМБ
2.2 Изучение влияния микроэлементов и стимулятора роста Гипоксена на накопление и активность альфаЦГТазы ii АМБ
2 Влияние микроэлементов на биосинтез альфаЦГТаз ii АМБ
2 Влияния стимулятора роста Гипоксена на биосинтез альфаЦГТаз ii АМБ
2.2 Изучение динамики биосинтеза фермента альфаЦГТазы бактериями ii 1АМБ на оптимизированной по составу питательной среде
2.2 Осаждение ферментов из культуральной жидкости ii АМБ
2.2 Наработка опытных партий препарата альфаЦГТазы различной ii 1АМБ степени очистки.
2.2 Анализ полученных препаратов альфациклодекстринглюканотрансфераз методом ВЭЖХ.
2.2 Исследование физикохимических характеристик препаратов альфаЦГТазы ПХиПОХ
2 Определение оптимума ферментных препаратов альфаЦГТазы.
2 Определение стабильности ферментных препаратов альфаЦГТазы.
2 Определение температурного оптимума ферментных препаратов альфаЦГТазы.
2 Определение термостабильноти препаратов альфаЦГТазы ГХ
ГЛАВА 3. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
3.1. Характеристика конечного продукта производства.
3.2. Изложение технологического процесса производства.
3.2.1. Характеристика сырья и материалов.
3.2.2. Изложение стадий вспомогательных работ ВР и основного технологического процесса ТП
3.3. Расчет материального баланса для получения ферментного препарата ЦГТ ГХ из I м культуральной жидкости
3.4. Контроль производства и управление технологическим процессом
3.5. Переработка и обезвреживание отходов производства
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Соотношение уровней декстрин изирующей гидролитической и циклнзующей активностей в препаратах ЦГТаз, является одним из наиболее важных показателей, влияющих на выход циклических продуктов во время трансформации. Суммарная схема реакции. Последовательная комбинация различных реакционных событий, например, нескольких реакций диспропорционировапия, может привести к синтезу длинных олигосахаридных фрагментов, являющихся материалом для синтеза новых циклических продуктов. В целом же, процесс конверсии крахмала сопровождается, сначала накоплением циклодекстринов, а затем их распадом до сравнительно коротких линейных мальтоолигосахаридов. Обобщенная схема реакционного процесса, катализируемого ЦГТазами весьма сложна, что усугубляется обратимостью большинства протекающих при этом биохимических реакций рисунок 5 3. Рисунок 5. Схема биохимических превращений, катализируемых ЦГТазами. Цшслодекстрипогсннмс бактерии продуценты цпклодекстрннглшканотрансфераз. Большинство из выделенных продуцентов ЦГТаз обитают в почве и принадлежат к широкой группе бактерий порядка i, объединяющего несколько семейств ii, i, i и др, к которым, в свою очередь относятся уже родов данные на конец года 3. Наиболее изучены циклодекстрииогенные микроорганизмы, вида ii до года носили название i , которые принадлежат к семейству ii, входящему в порядок i. Клетки культуры имеют форму палочек, строение клеточной стенки соответствует грамположительному типу, при выращивании на богатых средах, образуются длинные септированиыс нити. При недостатке питания формируют овальные споры, раздувающие спорангий. Положение спор в клетках может быть терминальным спорангии напоминают барабанные палочки, субтерминальным и центральным. В условиях анаэробиоза для . После создания соответствующих условии, бактерии легко выделяются из почв с использованием накопительных культур на основе альфаЦД. Группа . ЦГТазы. Циклодекстриногенная активность является характерной особенностью этого вида. Культивирование . ЦГТазы. Синтез внеклеточного фермента связан с формированием спор, и нарушение этой функции приводит к исчезновению внеклеточной активности. Типичная среда обитания . Развитие культуры в жидкой среде, в отсутствии физического контакта между клетками, при наличии избытка питательных веществ зачастую приводит к нарушению процессов естественной споруляции. Эта проблема решается методами селекции штаммов, с повышенной способностью к формированию спор. Проводят пассажи культуры на благоприятных для споруляции бактерий средах, проводя жесткую термообработку инокулята между пересевами. Вегетативные клетки при температуре выше С гибнут и выживают лишь хорошо спорулирующие варианты. Для . ЦГТазы. Культивирование в ферментерах осуществляют в периодическом режиме, в аэробных условиях на богатых средах, содержащих крахмал, источники аминного азота, а также мел, который предохраняет среду от избыточного закисления ,1. Описано достаточно большое количество культур циклодекстриногенов, отнесенных к В. ЦГТазы, секреция которой может быть и не связана со спорообразованием. Известные штаммы . Режим культивирования периодический, уровень поддерживают, в частности, путем добавления в среду мела. Активность фермента хорошо сохраняется во время операции распылительной сушки ,7,3,1,2. Алкалофильиые бациллы. В большинстве случаев алкалофильиые бациллы являются носителями генов бетаЦГТазы. Разновидности бацилл циклодекстриногенов таксономически весьма гетерогениы и об этом свидетельствует спектр названий, использованных для обозначения штаммовпродуцентов. Описаны и частично охарактеризованы алкалофильиые и алкалотолерантные культуры, обозначенные как . ЦГТаза, . РЦГТаза, , и . Культивирование алкалофильных и алкалотолерантных бацилл осуществляют в ферментерах в условиях активной аэрации, при этом используются щелочные питательные среды разнообразного состава рН9,0,0, содержащие в своем составе карбонат натрия 4,0,7. Продуценты цнклодекстринглюкапотрансфсразы, развивающиеся при нормальных значениях . Среди нормофильных развивающихся при нормальных бацилл с циклодекстриногенной активностью, могут быть упомянуты лишь единичные культуры, идентифицированные авторами в качестве .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.197, запросов: 240