Разработка биотехнологии препаратов кислых протеаз на основе высокоактивного мутантного штамма Aspergillus oryzae 107 для использования в производстве спирта

Разработка биотехнологии препаратов кислых протеаз на основе высокоактивного мутантного штамма Aspergillus oryzae 107 для использования в производстве спирта

Автор: Морозова, Кира Анатольевна

Шифр специальности: 05.18.07

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2006

Место защиты: Москва

Количество страниц: 227 с. ил.

Артикул: 3043121

Автор: Морозова, Кира Анатольевна

Стоимость: 250 руб.

Разработка биотехнологии препаратов кислых протеаз на основе высокоактивного мутантного штамма Aspergillus oryzae 107 для использования в производстве спирта  Разработка биотехнологии препаратов кислых протеаз на основе высокоактивного мутантного штамма Aspergillus oryzae 107 для использования в производстве спирта 

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Протеолитические ферменты микроорганизмов.
1.1.1. Классификация протеаз.
1.1.2. Продуценты протеолитичееких фермента
1.1.3. Физикохимические свойства протеолитичееких ферментов.
1.1.4. Регуляция синтеза протеолитичееких фермой юв
1.1.5. Применение протеолитичееких ферментов.
1.2. Ксиланолитические ферменты микроорганизмов
1.2.1. Классификация ксиланаз.
1.2.2. Продуценты ксиланолитических ферментов
1.2.3. Физикохимические свойства ксиланолитических ферментов
I 2.4. Регуляция синтеза ксиланолитических ферментов.
1.2.5.1 рименение ксиланолитических ферментов
2. ЭКСПКРИМЫ ЛГАЛЬНАЯ ЧАС IЬ
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1.1. Объекты исследований.
2.1.2. Условия хранения посевного материала.
2.1.3. Условия культивирования
2.1.3.1. Пршотовление вегетативного посевного материала.
2.1.3.2. Культивирование микроорганизмов
2.1.3.3. Влияние возраст посевного материала
2.1.3.4. Влияние начального значения питательной среды
2.1.3.5. Влияние аэрации питательной среды
2.1.4. Получение концентрированных фермешных препараюв.
2.1.5. Метод проведения мутагенеза
2.1.6. Селекция активного варианта продуцента комплекса кислых и слабокислых протеаз.
2.1.7. Изучение культуральных признаков продуцента
2.1.8. Методы определения активностей ферментов.
2.1.8.1. Определение общей прогеолигической активности
по модифицированному методу А неона.
2.1.8.2. Определение активностей индивидуальных протеолитичееких ферментов.
2.1.8.3. Определение амилолитической активности
2.1.8.4. Определение ксиланолитической активное ж
2.1.8.5. Определение целлюлазной активности
2.1.8.6. Определение глюканазной активности
2.1.8.7. Определение глюкоамилазной активности.
2.1.8.8. Определение фосфагазной активности
2.1.9. Определение содержания растворимого белка но методу Лоури.
2.1 Определение термостабильности протеолитичееких ферментов.
2.1 Определение стабильности протеолитичееких ферментов.
2.1 Структура теоретических и экспериментальных исследований.
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ.
2.2.1. Селекция и скрининг активных продуцентов комплекса
кислых протеаз и ксиланаз.
2.2.1.1. Сравнительная характеристика продуцентов кислых и слабокислых протеаз при твердофазном и i дубинном кулыивировании. .
2.2.1.2. Селекция акжвнот варианта продуцент комплекса кислых
и слабокислых протеаз.
2.2.1.3. Устойчивость штаммов i при пересевах
и хранении
2.2.2. Исследование состава ферментативного комплекса, синтезируемого микромицеюм i .
2.2.3. Изучение морфологических особенностей ииамма
i .
2.2.4. Влияние спорового и вегета швног о посевного материала на
биосин 1сз протеазы штаммом i .
2.2.5. Проведение мутагенеза и селекционных работ по получению штаммасуперпродуцента кислой и слабокислой протеаз
2.2.5.1. Подбор питательных сред для тестирования мутантных вариантов
микромицета i .
2.2.5.2. Проведение I этапа мутагенеза селекционированною штамма i .
2.2.5.3. Селекция активных вариантов штамма i , полученных методом мутагенеза II этап.
2.2.5.4. Получение активных вариантов микромицета i с применением повторного мутагенеза и методов рассева мутантных вариантов III этап
2.2.6. Кульуральноморфоло ические признаки новою мутантною
штамма i 7 продуцент протеаз и ксиланазы.
2.2.6.1. Характеристика ферментативною комплекса, сишезируемою мутантным штаммом i i
2.2.6.2. Кулыурально.морфологические особенное и мутантного
штамма i i
2.2.7. Разработка метода ведения и хранения в активном состоянии высокоактивного штамма i 7 суперпродуцента кислых и слабокислых протеаз.
2.2.7.1. Приюювление посевного материала
.1.2. Получение исходной кулыуры на косяках.
.1.3. Способ приготовления посевного маериала
2.2.7.4. Контроль микробиологической чистоты посевного материала
2.2.1.5. Контроль ферментативной активности посевного материала.
2.2.8. Подбор натуральных питательных сред для культивирования
гриба i 7 продуцента кислой протеазы
2.2.9. Оптимизация состава питательной среды для биосинтеза ксиланазы i 7 методом аддитивнорешетчатою математического описания объекта.
2.2 Регуляция сишеза кислых протеаз условиями кулыивироваиия i 7.
2 Влияние возраста и дозы посевного материала на рост и биосинтетическую активность продуцента.
2 Влияние температуры культивирования на биосинтез кислых
протеаз и ксиланаз i 7.
2 Влияние начального значения ишагельиой среды при культивировании i 7 на биосинтез кислых протеаз и ксиланаз
2 Влияние интенсивности аэрирования при культивировании i 7 на биосинтез кислых протеаз и ксиланаз.
2.2 Получение концентрированного комплексного препарата кислых
и слабокислых протеаз.
2 Получение комплексного препарата кислых и слабокислых
протеаз методом спиртоосаждения.
2 Получение комплексного препарата кислых и слабокислых пртеаз методом ультрафильтрации
2 Разработка с 1адии отделения биомассы штаммапродуцента и холодной стерилизации культуральной жидкости
2 Исследование процесса концентрирования методом ультрафильтрации
2.2 Изучение фракционного состава и биохимических свойав ферментного препарата кислых протеаз, полученного на основе нового мутантною штамма
А i i v 7.
2 Хромато рафическое разделение ферментных комплексов i 7 на компоненты
2 Определение и гермос забил ыюсти препарата кислых протеаз, полученных на основе мутантного штамма i 7.
2.2 Масштабирование процесса культивирования мутантного штамма i 7 продуцента кислых i
2.2 Разработка ТИ по применению ферментного препарата кислых протеаз в спиртовом производстве
2.2 Заключение.
2.3. ВЫВОДЫ
3. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Так, аспорогенный мутан этого вида ТРМ8 продуцирует термостабильную нейтральную металлозависимую прогеиназу, а штамм термостабильную щелочную прогеиназу, в то же время штамм этого же вида синтезирует кислую и иейральную протеиназу с оптимумом 3,6 и 7,0. В Японии найдены термоалкафильные спороносные бактерии i . С. Среди спороносных бактерий много продуцентов протеиназ, но сравнительно редко встречаются продуценты пептидаз. Так i iii штамм ИМВ4 и штамм 3 синтезируют наряду с сериновой щелочной протеиназой металлозависимую аминопеитидазу и глутамил эндопеитидазу Костылева Е. В., . Известны также гакие продуценты пептидаз как В ii, В i, , i и некоторых других видов, но активность псп i и лаз не очень высокая. Богатейшие комплексы прогеаз с различной iратной специфичностью, действующие в широком диапазоне , обнаружены у актиномицетов. В культуральной жидкости i vi Т найдены три протеиназы, проявляющие максимальную активность при 4,0 7,5 и i i синтезирует пять протеиназ и одну аминопептидазу одиннадцать протеиназ с различной субстратной специфичностью обнаружены у i v I. Интересные данные приводятся в литературе по протеолитическому комплексу три нейтральные протсиназы i 5,1 6,4 и 7,8, металлопрогеиназа, близкая по свойствам к эласгазе две металлозависимые карбоксипептидазы р 6,0 и 6,4 две металлозависимые лейцинаминопепгидазы р 7,2 и 7,7 сериновая, металлозависимая субтилизинлодобная прогеиназа i ,7 две сериновые трипсиноподобные прогеиназы i 4,4 и 4,8 сериновая химотрипсиноподобная протеиназа i 8,7, т. Можно было бы считать, что актиномицегы являются самыми перспективными продуцентами протеаз, но есть очень серьезное ограничение акгиномицеты наряду с протеиназами активно образуют антибиотики, поэтому использовав протеолитические ферменты, полученные с применением актиномицетов, например, в пищевой промышленности или для приготовления кормов для животных нельзя. Еще одним источником протеолитических фермешов являются микроскопические грибы, которые, в отличие от бактерий, образуют не юлько сериновые и метлозависимые прогеиназы, но и карбоксильные протеиназы и комплекс пептидаз. Среди микроскопических грибов можно назвать очень много продуцентов протеаз, например, , i iii, представители рода i . Римарева Л. В., . Грибы рода i как важные промышленные микроорганизмы для производства различных ферментов были внесены в список безопасных культур i , i Т. Культурой гриба как продуцентом протаез в нашей стране стали заниматься с конца х юдов. Был создан первый промышленный штамм 1 продуцент амилазы и протеаз и испытан в производственных условиях ферментных цехов Петровского спиртового комбината и Мичуринского экспериментального завода Римарева Л. В., . В дальнейшим методами селекции и мутагенеза был получен штамм А i 7 продуцент комплекса протеаз сериновая, мсчаллозависимая и нейтральная про1еиназы, амино и карбоксипептидазы использован в промышленности Вышневолоцкий ферменшый завод, Бердский завод биопрепаратов для получения концентрированного ферментного препарата Амилопротооризин Римарава Л. В., Милюкова Т. Б. и др. Для того, чтобы расширить области применения микромицетов ученые всего мира интенсивно изучают состав генома i V . Молекулярными и iическими исследованиями i занимались многие ученые. Аминопептидаза I из Е i имеет большую молекулу Да. Аминопептидаза В iii имеет молекулярную массу 0. Она содержит один 2 на моль и ее активность увеличивается в присутствииСо2 Аминопептидаза из В i представляет собой димер с М. Со2 Е. Сериновые карбоксипептидазы, выделенные из iii , и i . Для активности металлокарбоксипептидаз из и необходимо присутствие ионов цинка и кобальта В. Сериновые протеиназы, как правило, активны в нейтральной и щелочной зоне с оптимумом 7 и . Они имеют широкую субстратную специфичность, включая эстеролитическую и амидазную активности. Их молекулярные массы варьируют между и кДа. Изоэлектрические точки сериновых протеиназ, в основном находятся между 4 и 6 В. Были определены два различных типа субтилизинов субтилизин Карлсберг, синтезируемый В. В. ii.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.210, запросов: 240