Характеристика гемолизинов Bacillus anthracis

Характеристика гемолизинов Bacillus anthracis

Автор: Арасланова, Вера Алексеевна

Шифр специальности: 16.00.03

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2009

Место защиты: Покров

Количество страниц: 148 с. ил.

Артикул: 4571217

Автор: Арасланова, Вера Алексеевна

Стоимость: 250 руб.

Характеристика гемолизинов Bacillus anthracis  Характеристика гемолизинов Bacillus anthracis 

1. ВВЕДЕНИЕ.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Возбудитель сибирской язвы и факторы его патогенности.
2.2. Общие сведения о бактериальных токсинах.
2.2.1. Роль гемолизинов в патогенезе и их биологическое действие
2.2.2. Природа и физикохимические свойства гемолизинов.
2.2.3. Механизм действия бактериальных токсинов на клетку.
2.2.4. Стимуляторы и ингибиторы гемолитической активности
2.2.5. Методы изучения гемолитической активности патогенных микроорганизмов.
2.3. Гемолизины микроорганизмов рода i
2.3.1. Гемолизины i .
2.3.2. Гемолизины i i
2.4. Заключение но обзору литературы.
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1.1. Материалы
3.1. 1.1. Штаммы микроорганизмов
ЗАЛА, Питательные среды.
3.1.1.3. Ферменты.
3.1.1.4. Реактивы.
3.1.1.5. Растворы.
3.1.1.6. Сыворотки
3.1.1.7. Лабораторное оборудование
ЗА А. 8. Животные.
3.1.2. Методы.
3.1.2А. Получение спорового материала.
3.1.2.2. Определение концентрации жизнеспособных спор.
3.1.2.3. Получение фильтратов бульонных культур.
3.1.2.4. Определение гемолитической активности
3.1.2.5. Определение лецитиназной активности.
3.1.2.6. Концентрирование экзопродуктов фильтратов бульонных культур.
3.1.2.7. Очистка гемолитически активных экзопродуктов методом хроматограф и и.
3.1.2.8. Выделение бактериальной ДНК.
3.1.2.9. Постановка ПЦР
3.1.2 Молекулярное клонирование фрагментов ДНК.
3.1.2 Экспрессия рекомбинантных белков.
3.1.2 Определение концентрации белка.
3.1.2 Электрофорез в полиакриламидном геле.
3.1.2 Получение специфических сывороток
3.1.2 Определение полипептидиой специфичности методом иммуноблоттинга.
3.1.2 Статистическая обработка результатов.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Изучение условий, влияющих на экспрессию гемолизинов .i.
4.1.1. Подбор питательных сред для получения внеклеточных гемол из иное В. и ас i
4.1.2. Динамика экспрессии гемолитически активных экзопродуктов.
4.1.3. Изучение индуцирующего действия О2 и Сна экспрессию гемолизинов .i.
4.2. Изучение факторов, влияющих на литичсскую активность экзотоксинов сибиреязвенного микроба
4.2.1. Влияние температуры на литическую активность гемолизинов .i.
4.2.2. Определение динамики лизиса эритроцитов.
4.2.3. Влияние холестерина, СаС, ЭДТА,ДТТ на цитолитическую активность экзотоксинов культур .i.
4.2.3.1. Влияние СаС, ЭДТЛ, ДТТна активность сибиреязвенных гемолизинов.
4.2.3.2. Влияние холестерина на активность гемолизинов.
4.2.4 Влияние сывороток крови различных видов животных на гемолитическую активность сибиреязвенного микроба
4.3. Изучение цитотоксической активности сибиреязвсных культуральных фильтратов i vi.
4.4. Концентрирование внеклеточных гемолизинов .i
4.5. Разделение гемолитически активных фракций экзонродуктов .i с использованием метода хроматографии.
4.6. Конструирование и изучение экспрессии рекомбинантных фосфолипазы С и сфингомиелиназы В. i
4.6.1. регулятор продукции гемолизинов .i
4.6.2. Клонирование генов гемолизинов в плазмидных векторах.
4.6.3. Выявление нуклеотидных последовательностей генов i и .i в геноме штамма СТИ
4.6.4. Определение нуклеотидных последовательностей клонированных генов i и .i штамма
4.6.5. Изучение свойств рекомбинантных фосфолипазы С и сфингомиелиназы
4.6.6. Антигенные свойства рекомбинантных сфингомиелиназы и фосфолипазы С
4.6.7. Влияние нормальных сывороток крови на гемолитическую активность рекомбинантных фосфолипазы С и сфингомиелиназы.
4.6.8. Получение иммуноглобулинов.
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЕ
БХ
ВНИИВВиМ
ГЕ
ГРМ
ДНК
ДТТ
ИПТГ
КРС
ЛФ
мкг
мкм
м.м.
МПА
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Агар Хоттингера бульон Хоттингера
Всероссийский научноисследовательский инстит
ветеринарной вирусологии и микробиологии
гемолитическая активность
гемолитическая единица
гидролизат кильки
гидролизат рыбной муки
дальтон
дезоксирибонуклеиновая кислота дрожжепептонная среда дитиотриэтол единицы действия
изопропил РОтиогалактопиранозид
килодальтон
крупный рогатый скот
культуральный фильтрат
летальный фактор
миллиграмм
микрограмм
микролитр
микрометр
миллилитр
молекулярная масса
миллимоль
мясопептонный агар
мясопептонный бульон
НАД ни коти нам ид аденинд и нуклеотид
нг нанограмм
НИИЭМ им. Научноисследовательский институт эпизоотологии и
Н.Ф.Гамалеи микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи
РАМН Российской академии медицинских наук
НИПЧИ научноисследовательский противочумный институт
ОРС открытая рамка считывания
ОФ фактор отека
ПА протективный антиген
ПБ питательный бульон
ПГК панкреатический гидролизат казеина
ПГРМ панкреатический гидролизат рыбной муки
пкм пикомоль
п.н. пар нуклеотидов
ПСГК перевиваемая культура клеток почки сибирского горного
козерога
ПЦР полимеразная цепная реакция
РНК рибонуклеиновая кислота
СВК среда для выделения и культивирования сибиреязвенного
микроба
СМБ сердечномозговой бульон
СОГАТ среда для определения гемолитической активности и ее типа
т.п.н. тысяч пар нуклеотидов
ТФБ триптозофосфатный бульон
ТХУ трихлоруксусная кислота
ФА фосфолипазная лецитиназная активность
цАМФ циклоадснозинмонофосфат
ЭДТА эти лен диамин тстраацетат
ампициллин
консервирующий и дефибринирующий раствор Алсивера
а, 3Н1у Сар СЫР
ся
вБТ
1
ьв


Р
РП
Яформа
БРН
ТАЕ

способность штаммами синтезировать различные тины гемолизинов
способность штамммов синтезировать капсульный полипептид
цитотоксический некротизирующий фактор углекисный газ
способность штаммов сорбировать конго красный из среды
дезоксинуклеозидтрифосфат
глутатионБтрансфераза
гемолитическая активность
иммуноглобулин
канамицин
среда ЛурияБертана
доза, вызывающая гибель зараженных животных киназы митогенактивируемых прогеинкиназ кислород
фосфотидилхолинспецифическая фосфолипаза водородноионный показатель среды фосфатазная активность возбудителя изоэлектрическая точка фосфолипаза
протеолитическая активность возбудителя матовые шероховатые колонии додецилсульфат натрия сфингомиелиназа цифатносолевой буфер фисацетатный буфер фисборатный буфер
1. ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность


Публикации. Основные результаты исследований изложены в 8 научных работах, в том числе 1 статья в журнале, рекомендуемом ВАК РФ. Личный вклад соискателя. Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно. В выполнении работы по отдельным этапам оказывали практическую и консультативную помощь, заведующий лабораторией Бактериологии ГНУ ВНИИВВиМ, к. И.Ю. Егорова и заведующий отделом Бактериальных инфекций НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, д. Белый Ю. Положения, выносимые на защиту. Исследованные гемолизины сибиреязвенного микроба по механизму ферментативного действия относятся к фосфолипазам. Нормальные сыворотки крови животных обладают блокирующей активностью в отношении проявления 3гсмолитической активности и не оказывают влияния на агемолитическую активность сибиреязвенного микроба. Сконструированные плазмиды экспрессируют гемолизины В. Игас1ь в функционально активной форме, которые обладают антигенной активностью и вызывают образование специфических антител при иммунизации лабораторных животных. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 6 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов список сокращений, введение, обзор литературы, собственные исследования, материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения, список использованных источников и приложение. Список литературы включает 8 источников из них отечественных и 2 зарубежных. Работа содержит рисунков и 9 таблиц. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Возбудитель сибирской язвы и факторы его патогенности. Возбудитель сибирской язвы высокоинвазивный микроб, который быстро размножается в организме, распространяется лимфо и гематогенно, вызывая терминальную септицемию или специфическую интоксикацию с характерными признаками транссудат в полостях, гемоконцентрация,
аноксия, повышение электрической возбудимости головного мозга. Относится к отряду i, семейству i, роду и подроду i. Встречается в трех формах в вегетативной клетки различной величины капсульные и бескапсульные, в споровой споры, заключенные в хорошо выраженный экзоспориум, и в споровой, когда споры лежат изолированно Колесов С. Патогенность сибиреязвенного микроба большинство авторов связывают с продукцией двух классических факторов трехкомпонентного токсина и полиДглютаминовой капсулы, структурные и регуляторные гены синтеза которых находятся в составе высокомолекулярных плазмид рХ и рХ i Р . Роль капсулы в патогенности заключается в том, что она ингибирует фагоцитоз, повышает активность летального фактора, защищает бациллы от бактерицидного действия внутренней среды макрооргапизма, способствует фиксации бацилл на эукариотических клетках, вызывает резкие нарушения обменных процессов в клетках макрооргапизма, быструю их деградацию и гибель. Сибиреязвенный экзотоксин, второй из факторов агрессии, состоит из трех белковых субъединиц, которые по характеру действия на лабораторных животных получили названия протективный антиген ПА, фактор II, летальный ЛФ, фактор III и отечный ОФ, фактор I факторы . Каждый из белков в отдельности не вызывает токсического эффекта, тогда как введение крысам линии Фишер 4 сочетаний ПАЛФ и ПАОФ приводит соответственно к быстрой гибели животных или отеку подкожной клетчатки С. Т. . В структуре сибиреязвенного экзотоксина протективному антигену м. Да, содержащему транслокационный домен, принадлежит центральная ассоциативнорецепторная роль. После связывания ПА с высокоафинными поверхностными рецепторами эукариотических клеток он подвергается иротеолитическому расщеплению с помощью фурина. Под воздействием нротеазы клеткимишени образуется концевой фрагмент ПА м. Да и карбоксильноконцевой фрагмент ПА м. Да. При этом происходит разблокирование сайта связывания с ЛФ или ОФ . Вследствие формирования ионопроводящих каналов под воздействием протеолитически активированной формы ПА повышается проницаемость клеточных мембран.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.212, запросов: 108