Теоретическое и экспериментальное обоснование применения генетического маркирования возбудителей инфекционных болезней животных в молекулярной эпизоотологии

Теоретическое и экспериментальное обоснование применения генетического маркирования возбудителей инфекционных болезней животных в молекулярной эпизоотологии

Автор: Семенихин, Владимир Иванович

Шифр специальности: 16.00.03

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2007

Место защиты: Новосибирск

Количество страниц: 417 с. ил.

Артикул: 4262458

Автор: Семенихин, Владимир Иванович

Стоимость: 250 руб.

Теоретическое и экспериментальное обоснование применения генетического маркирования возбудителей инфекционных болезней животных в молекулярной эпизоотологии  Теоретическое и экспериментальное обоснование применения генетического маркирования возбудителей инфекционных болезней животных в молекулярной эпизоотологии 

ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ЕЕ Современная концепция использования в генетических исследованиях ДНКмаркеров типы маркеров и области их применения
1.2. Анализ современной ситуации по болезням свиней и крупного Рогатого скота, вызываемых мРНК и ДНК микроорганизмами
1.2.1. Классическая чума свиней и Вирусная диарея КРС
1.2.2. i
1.2.2.1. Характеристика возбудителя некробактериоза
1.2.2.2. Морфология i
1.2.2.4. Культуральные и биохимические свойства
1.2.2.4. Патогенные свойства i
1.2.2.5. Диагностика некробактериоза
1.2.2.5.1. Биологический метод
1.2.2.5.2. Серологический метод
1.2.2.5.3. ДНКтехнологии при изучении полиморфизма культур i
1.2.2.5.4. Белковый полиморфизм культур i
1.2.3. Ми ко плаз м ы
1.2.3.1. Краткая характеристика микоплазм
1.3. ДПКмаркеры в генетических исследованиях на основе ПЦР мономорфные и полиморфные ДНКмаркеры
1.3.1 Мономорфные ДНКмаркеры на основе ПЦР
1.3.2. Обратная транскрипция полимеразная цепная реакция ОТПЦР
1.3.3. Гнездовая ПЦР
1.3.4. Мультипраймерная мультиплексная ПЦР
1.3.5. Д1 Iмаркеры на основе ПЦР с праймерами, имеющие множественную локализацию в геноме
1.3.6. Технология подготовки и проведения полимеразной цепной реакции
1.3.6.1. Выделение ДНК
1.3.6.2. Подбор праймеров
1.3.6.3. Полимеразная цепная реакция.
1.3.6.4. Параметры температу рных циклов
1.6. Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЙ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.1. Разработка тестсистемы для маркирования экспрессирующихся последовательностей мРНК генов вируса классической чумы свиней и вируса вирусной диареи крупного рогатого скота
2.1.2. Разработка тестсистемы для маркирования нуклеотидных последовательностей i .
2.1.3. Изучение полиморфизма ДНК культур i и ДНК культур .
2.1.4. Электрофорез продуктов ПЦР
2.1.5. Биологическая проба с культурами i
2.1.6. Полиморфизм олигомеров культур i
2.2. РЕЗУЛЬТА ТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. мРНК и ДНКмаркеры в генетических исследованиях типы маркеров, их свойства и области применения
2.Л. Мономорфные ДКмаркеры
. Полиморфные маркеры, основанные на тестировании однонуклеотидных замен
. ДНКмаркеры на основе ПЦР с праймерами, имеющих множественную локализацию в геноме
. Заключение по разделу
2.2.2. МОНОМОРФНЫЕ МАРКЕРЫ
2.2.2.1. маркеры x
2.2.2.1.1. маркирование с помощью ОТПЦР вируса классической чумы свиней
2.2.2.1.1.1. Выделение мРНК вируса классической чумы свиней
2.2.2.1.1.2. Выбор праймеров для маркирования мРНК вируса КЧС
2.2.2.1.1.3. Конструирование ОТПЦР для мономорфного маркирования вируса классической чумы свиней. Компоненты ОТПЦР
2.2.2.1.1.4. Результаты исследований клинического материала
2.2.2.1.2. маркирование с помощью ОТПЦР вируса вирусной диареи крупного рогатого скота
2.2.2.1.2.1. Выделение мРНК вируса ВД КРС
2.2.2.1.2.2. Выбор праймеров
2.2.2.1.2.3. Конструирование ОТПЦР для мономорфного маркирования вируса вирусной диареи крупного рогатого скота. Компоненты ОТПЦР
2.2.2.1.3. маркеры i
2.2.2.1.3.1. Выделение геномной ДНК i
2.2.2.1.3.1.2. Проверка чистоты выделенной ДНК
2.2.2.1.3.2. Конструирование и выявление . крупного рогатого скота гибридизацией с нерадиоактивными ДНКзондами
2.2.2.1.3.3. Конструирование полимеразной цепной реакции для выявления i
2.2.2.1.3.3.1. Схема разработки гнездовой П1 Р. Выбор праймеров
2.2.2.1.3.3.2. Компоненты ПЦР
2.2.2.1.3.3.3. Оптимизация режимов постановки ПЦР
2.2.2.1.3.3.3. Идентификации культуры Чик с помощью ПДРФПЦР анализа
2.2.2.1.3.3.5. Специфичность и чувствительность гнездовой ПЦР при выявления i
2.2.2.1.3.3.6. Результаты исследований клинического материала
2.2.2.1.3.3.7. Совмещенная гнездовая полимеразная цепная реакция для выявления патогенных i
2.2.2.1.3.3.8. Генетическая характеристика штаммов i с помощью маркирования
2.2.2.1.3.3.8.1. Конструирование мультипраймерной ПЦР для генотипирования . .
2.2.2.1.3.3.8.2. Генотипированис штаммов i с помощью мультиплексной ПЦР
2.2.2.1.3.3.8.3. Генетическая характеристика культур и i . . Секвенированиеи депонирование
2.2.3. Полиморфные ДНКмаркеры.
2.2.3.1. Исследование геномного и белкового полиморфизма культур некробактериоза с помощью маркирующих методов ПДРФП1, ПЦР и ПААГ
7
. Тестирование однонуклеотидных замен культур i .
2.2.3.3. Исследование геномного полиморфизма культур возбудителя некробактериоза крупного рогатого скота в ПЦР
2.2.3.3.1. Выбор произвольных праймеров и режим ПЦР
2.2.3.3.2. Маркирование ДНК . с помощью ГП
2.2 Исследование белкового полиморфизма культур i крупного рогатого скота
2.2.3.5. ДНКмаркирование культур на основе ПЦР с праймерами, имеющими множественную локализацию в геноме
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. ЛИТЕРАТУРА
7. ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
КЧС классическая чума свиней
ВД КРС вирусная диарея крупного рогатого скота
ОТПЦР обратная транскрипция полимеразная цепная реакция
мРНК матричная РНК
н.п. нуклеотиндная пара
маркирование x маркирование экспрессирующих последовательностей
маркирование i маркирование фраг ментов последовательности
маркирование однонуклеотидных замен ПЦР полимеразная цепная реакция
ПДРФПЦР полиморфизм длин рестрикционных фрагментов ДНК амплифицированных специфическими праймерами
Мультипраймерная ПЦР мультиплексная Т Р
ГЩР полиморфизм фрагментов ДНК, амплифицированных с ироизвал ьн ы м и п рай мерам и
СТАВ цетилтриметил аммония бромид
НИИ ККМ научноисследовательский институт Коллекции культур микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ Вектор
ФГУН ГНЦ ВБ Вектор Роспотребнадзора Федеральное
государственное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии
ТУ технические условия
ВГНКИ Всероссийский государственный цент качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов ПААТ полиакриламидный гель РФ Российская Федерация
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Результаты исследований многих авторов говорят о разной биохимической активности микроорганизма А. Г. Ревнивых, , Ф. И. Каган и Я. Р. Коваленко, , Б. В. Маслухин, , Д. Н. Бондарько, , ГГилипенко, , Самоловов, . А.Г. Нитевидные формы строгие анаэробы, короткие формы проявляют способность роста в условиях аэробиоза и растут на обычных питательных средах. Нитевидная форма активна биохимически образует индол, сероводород, разлагает моно ди и полисахариды, многоатомные спирты короткие формы эти свойства утрачивают. По данным многих исследователей М. Вейнберг и Б. Гинзбург, А. Г. Ревнивых, С. Н. Муромцев, , возбудитель ферментирует большинство углеводов, образует индол и сероводород, желатину не разжижает, молоко не свертывает, аммиак не образует, не редуцирует нитраты в нитриты. А.Х. Лайшев и Н. С. Семенов указывали, что большинство культур обладает способностью гемолизировать эритроциты, что свидетельствует о наличии у них гемотоксина. На питательных средах микроб не образует сероводорода, индола, и лишь отдельные культуры образуют небольшое количество аммиака. Данные о том, что культуры не продуцируют сероводород, получены также Б. В. Маслухиным с соавт. На основании неоднородности штаммов по сахаролитическим свойствам авторы относили их к различным биохимическим типам. А.А. Пилипенко, А. М. Силков и др. Г., . М. М. А. А. Самоловов в , исследуя культуры возбудителя некробактериоза, пришели к выводу, что они не ферментируют углеводы. Поэтому одни и ге же культуры могут проявлять разную биохимическую активность в связи с изменением условий культивирования. Патогенность это качественная характеристика вида, определяемая его генотипом, это потенциальная способность возбудителя вызывать инфекционный процесс. Факторы патогенности связаны со структурными элементами микробной клетки, ее метаболизмом. Они позволяют патогенному микроорганизму не только проникнуть и сохраниться, но и размножиться, распространиться в тканях и органах животного, активно воздействовать на его функции. Степень патогенности, индивидуальная особенность каждого варианта и штамма микроорганизмов называется вирулентностью. Это качественная характеристика штамма микроорганизмов, характеристика его патогенности для животных определенного вида в определенных неменяющихся условиях. Вирулентность какоголибо штамма данного патогенного вида измеряют двумя факторами токсигенностью способность продуцировать токсинывещества, повреждающие ткани и инвазивиостыо способность проникать в ткани организма, размножаться в них и распространяться. Инвазивность и токсигенность имеют собственный генетический контроль в клетке бактерии. Вирулентность у большинства патогенных бактерий определяется многими генами, которые составляют две основные группы. Эти гены, как правило, можно обнаружить у родственных патогенных и непатогенных бактерий. К другой группе относятся гены, которые кодируют уникальные признаки, характерные для патогенных бактерий. Эти признаки не содержатся в геномах непатогенмых представителей того же вида и рода Е. А. i, . Среди ученых пионеров, исследовавших . Гак А. Г. Ревнивых отмечал, что бактерия на жидкой питательной среде образует экзотоксин. Но в последующих исследованиях других авторов Ф. И. Каган, Я. Р. Коваленко, эта точка зрения не подтвердилась. А.К. Краснобаев указывал, что связь между активностью гиапуронидазы и степенью патогенности отсутствует. Однако в работах других исследователей Н. Х. Глебов, А. Х. Лайшев, Семенов, , В. Г., было отмечено, что патогенность микробов связана с их способностью образовывать гиалуронидазу. По результатам экспериментов Я. Р. Коваленко установил, что культуры . А согласно исследованиям В. А. Балабанова , . I. , i, , . Сидорчука с соавт. Н.М. Колычева, В. Г. Ошепкова i образует ряд сильных эндотоксинов гемолизин, цитоплазматический эндотоксин, лейкотоксин и ферментов лецитиназа, гиалуронидаза, обладающих гемолитическими, летальными и некротическими свойствами, угнетающих иммунную систему организма. Свойства лейкотоксина трех биотипов . А, ЛВ и В изучались разными авторами М. М. i, .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.267, запросов: 108