Использование белково-полисахаридного антигена для выявления антител к микобактериям туберкулеза

Использование белково-полисахаридного антигена для выявления антител к микобактериям туберкулеза

Автор: Шимолина, Надежда Олеговна

Шифр специальности: 16.00.03

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2000

Место защиты: Новосибирск

Количество страниц: 142 с.

Артикул: 269057

Автор: Шимолина, Надежда Олеговна

Стоимость: 250 руб.

Использование белково-полисахаридного антигена для выявления антител к микобактериям туберкулеза  Использование белково-полисахаридного антигена для выявления антител к микобактериям туберкулеза 

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Возбудители туберкулеза крупного рогатого скота.
2.2. Механизм иммунного ответа при туберкулезе крупного рогатого скота
2.3. Роль ППД туберкулина для млекопитающих в аллергической
диагностике туберкулеза
2.4. Серологические и другие методы диагностики туберкулеза крупного
рогатого скота
2.5. Место ИФА в системе общепринятых методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота
2.6. Технические варианты проведения ИФА.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4.1. Факторы, влияющие на специфичность и чувствительность непрямого варианта ИФА и их оптимальное сочетание
4.2. Использование белковополисахаридного антигена для выявления антител к микобактериям туберкулеза .
4.2.1. Способы получения различных антигенов для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
4.2.2. Использование белковополисахаридного антигена в непрямом варианте ИФА
4.3. Результаты использования белковополисахаридного антигена
в ИФА и других серологических тестах.
4.3.1. Испытание непрямого варианта ИФА.
4.3.2. Испытание комбинированного иммуиопреципитационного теста.
4.4. Результаты сравнения бактериологического исследования с показателями ИФА.
5. АНАЛИЗ И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. ВЫВОДЫ
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Из инфекционных болезней крупного рогатого скота туберкулез наносит наиболее значительный экономический ущерб за счет снижения продуктивности животных, ухудшения качества продукции, преждевременной выбраковки больного поголовья и высоких зарат на противотуберкулезные мероприятия.
Проблема профилактики и ликвидации туберкулеза актуальна для многих регионов России и, несмотря на осуществляемые ветеринарносанитарные мероприятия ежегодная заболеваемость крупного рогатого скота туберкулезом составляет около 2 от имеющегося поголовья В.М. Авилов, В.Ф. Пылинин, .
Одной из особенностей туберкулеза является преобладание латентных форм бактерионосительства. Клинические признаки болезни у крупного рогатого скота проявляются при длительном течении инфекции и при неблагоприятных условиях содержания.
Для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в нашей стране используется аллергический способ выявления сенсибилизированных микобактериями туберкулеза организма животных при внутрикожном введении туберкулина. Недостатком этого способа является выявление значительного количества животных, неспецифически реагирующих на внутрикожное введение туберкулина изза сенсибилизирования сапрофитными формами микробактерий. При этом для постановки диагноза , особенно в благополучных по туберкулезу хозяйствах, необходимо проведение бактериологических и патморфологичсских исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических наблюдений. При послеубойном осмотре реагировавшего на туберкулин крупного рогатого скота не всегда удается установить туберкулезные изменения во внутренних органах и тканях животного А.И. Кузин, . Бактериологические исследования на туберкулез проводятся в срок до 3х месяцев, а в некоторых случаях до 6 месяцев. Кроме того, выявление инфекционного агента
при туберкулезе может быть осложнено наличием ультрамелких и Лформ микобактерий И.Г. Мальков, .
Из серологических методов диагностики туберкулеза животных делались попытки апробации в ветеринарной практике реакции связывания комплемента с антигенами СибНИВИ и УкрНИВИ Э.Д. Лакман, Ю.Я. Кассич, .
Однако, эта реакция изза невысокой чувствительности является ориентировочной и для массовых исследований не нашла применения, хотя некоторые исследователи использовали ес для уточнения диагноза и отбора животных для диагностического убоя с последующим бактериологическим исследованием биоматсриала животных А.Х. Найманов и др., .
В связи с этим создание высокочувствительных экспрессметодов выявления инфицированных микобактериями туберкулеза животных до сих пор продолжает оставаться актуальной проблемой и является одним из важнейших направлений научных исследований по туберкулезу.
Высокочувствительный непрямой вариант иммуноферментного анализа ИФА для серологической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота апробирован отечественными и зарубежными исследователями Е.В. Маслов и др., , однако широкого применения в ветеринарной практике еще не нашел.
Возможность выявления иммуноферментным методом малых количеств антигена в исследуемом материале, а также специфических антител в сыворотке крови представляет большой интерес при использовании ИФА для диагностики туберкулеза Т.Р. Якупов, .
Для получения достоверных результатов с помощью высокочувствительных методов исследования необходимо использование высокоспецифичных реагентов, основными из которых в ИФА являются антиген и коньюгат антивидовых антител.
Цель и задачи исследований.
Целыо данной работы являлась разработка нового способа диагностики туберкулеза крупного рогатого скота на основе ИФЛ и моноклональных антител. Исходя из этой цели для выполнения ставились задачи
1 Разработать методику изготовления специфических антигенов из микобактерий бычьего вида, вакцинного штамма БЦЖ и атипичных.
2 Дать сравнительную оценку чувствительности и специфичности различных вариантов ИФЛ с полученными микобактериальными антигенами, а также с бактериологическим методом, включающим биопробу на морских свинках.
3 Определить оптимальные условия для проведения ИФА с полученными реагентами, а также возможность понижения интенсивности фоновых реакций.
4 Определить место экспрессметода диагностики туберкулеза с использованием ИФА в системе противотуберкулезных мероприятий.
Научная новизна.
Получен комплексный белковополисахаридный антиген из М.Ьоуз, обладающий высокой активностью в ИФА с контрольной положительной сывороткой. Непрямой вариант ИФА с указанным антигеном апробирован при исследовании сыворотки крови из неблагополучных по туберкулезу хозяйств Новосибирской области.
Разработан и апробирован новый комбинированный иммунопреципитационный тест на основе ИФА.
Показана высокая специфичность и информативность ИФА сыворотки крови крупного рогатого скота при выяснении эпизоотической ситуации хозяйств по туберкулезу.
Практическое значение работы.
Разработана методика изготовления специфических антигенов из микобактерий туберкулеза бычьего вида и вакцинного штамма БЦЖ. Белковополисахаридный антиген из вакцинного штамма БЦЖ дает минимальные фоновые реакции в непрямом варианте ИФА.
Непрямой твердофазный вариант ИФА, как один из методов прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота, показал удовлетворительные результаты при предварительных исследованиях сыворотки крови из неблагополучных по ту беркулезу крупного рогатого скота хозяйств. Экспрессметод серологической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в ИФА может быть использован для оценки эпизоотической ситуации в благополучных по этой инфекции хозяйствах, где отмечены случаи реагирования животных на ППД туберкулин для млекопитающих
Апробация работы.
Основные положения работы доложены и обсуждены на Научнопрактической конференции Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири г.Новосибирск, научнопрактической конференции Актуальные вопросы ветеринарии г.Новосибирск, на международной научнопрактической конференции Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы г.Гродно, на научнопрактической конференции Молодые ученые времени. Проблемы Сибирской аграрной науки Новосибирск, на П Межвузовской научнопрактической конференции День земли г.Бийск, на научной конференции, посвященной летию Алтайской НИВС г.Барнаул, на заседании подсекции инфекционной патологии ИЭВСиДВ Новосибирск, , межлаборагорном заседании ИЭВСиДВ .
Публикация результатов исследований.
По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.
Внедрение результатов исследований.
Результаты работы рассмотрены на подсекции инфекционной патологии ИЭВСиДВ и рекомендованы для производственной проверки с целью отбора реагирующих на туберкулин животных для диагностического убоя и последующего бактериологического исследования биоматериала животных в благополучных по туберкулезу хозяйствах .
На защиту выносится
1 Режим изготовления белковополисахаридного антигена из вакцинного штамма микобактерии БЦЖ и его использование для выявления антител к микобактериям туберкулеза в серологических реакциях РИД, ИФА.
2 Усовершенствование техники выполнения непрямого варианта иммуноферментного анализа с разработанным нами антигеном для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
3 Результаты сравнения ИФА и бактериологического исследования, включающего биопробу на морских свинках, при постановке диагноза на туберкулез.
Струюура и объем диссертации.
Материалы диссертации изложены на 1 странице машинописного текста и состоят из следующих разделов введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, заключение, выводы, практические предложения, литература и приложение.
Список литературы


Матвеев указывает, что туберкулез наблюдали у видов млекопитающих животных и видов птиц. К году список млекопитающих животных, болеющих туберкулезом составил вида Я. А. Благодарный, . Для диагностики туберкулеза человека В. Г. Гутман предложил использовать реакцию замедленной кожной гиперчувствителыюсти при внутрикожном введении вытяжки из бактерий туберкулеза. При последующем совершенствовании способов изготовления туберкулинов, схем их применения, данный метод до настоящего времени является основным для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота В. Г. Гутман, . Ряд исследователей доказали значение туберкулиновой пробы в прижизненной диагностике туберкулеза крупного рогатого скота С. Н. Вышелссский, Н. Ф. Гамалея, В. П. Урбан, А. И. Кузин, Донченко, , А. Ф. Кочмарский, Ю. Я. Кассич,, Н. П. Овдиенко, А. Х. Найманов, , . В ветеринарной практике в диагностических целях используют несколько методов, аллергический, клинический, патологоанатомический, гистологический, бактериологический, биологический, а в последнее время серологический. Кроме этого, учитывают эпизоотологические данные. В аллергической диагностике первоначально широкое применение получили подкожная и
глазная туберкулиновые пробы, в дальнейшем внутрикожная проба С. Н. Нышелесский, П. П. Вишневский, М. К. Юсковец, . Установлено, что вследствие внутримакрофагального паразитирования микобактерии не доступны действию гуморальных факторов иммунитета. Сам туберкулезный процесс , сопровождающийся интоксикацией организма, напряжением всех звеньев системы иммунитет и развитием аутоимунных процессов М. М. Авербах, , является ложным фактором возникновения вторичных иммунодефицитных состояний , также сопровождающихся падением титров циркулирующих антител. Познание иммунологических механизмов, основанных на этиологических и патогенетических принципах взаимодействия микро и макроорганизма, является методической основой совершенствования средств и методов прижизненной диагностики заболевания А. С. Донченко, В. А. Середин и др. Совершенствование средств и методов прижизненной диагностикЕг заболевания с учетом, иммунной системы организма, особенностей биологии возбудителя, будет способствовать более эффективному оздоровлению животноводческих хозяйств от туберкулеза и возможно оно путем применения в комплексе серологических и аллергических методов диагностики. Возбудитель туберкулеза внугримакрофагальный паразит, использующий организм животного как источник питания и место обитания был открыт Р. Кохом и получил название i i. Патогенные и сапрофитные виды микобактерий широко распространены в природе. К патогенным относят . М.i, М. Кроме них, из организма человека и животных, объектов внешней среды выделяют потенциальнопатогенные и непатогенные атипичные микобактерии . У крупного рогатого скота при заражении атипичными микобактериями изменений в органах и тканях практически не обнаруживают , в тоже время сенсибилизированные животные реагируют на туберкулин и могут быть отнесены к больным туберкулезом Федосеев и др. Основным источником возбудителя туберкулеза у крупного рогатого скота являются больные животные этого же вида. Замечено, что на фоне активной противотуберкулезной борьбы отмечается изменение течения туберкулезного процесса в сторону возрастания скрытых форм, не диагностируемых общепринятыми методами. Для выращивания возбудителя туберкулеза применяют плотные, жидкие, синтетические и полусинтетические среды. Более экономичные и удобные в работе плотные яичные среды. В ветпрактике широкое распространение нашли среды ЛевенштейнаЙенсена, Гельберга, Петраньяни, безаспарагиновая среда Финн2, а также среда ФАСТ ВНИИБТЖ. При бактериологическом исследовании рост микобактерий туберкулеза бычьего вида регистрируется через суток в виде сплошных или отдельных непигментированных, мелких колоний белых, кремовых, сероватых. Культуры микобактерий туберкулеза птичьего вида сероватобелые, мелкие, слизистые и растут быстрее на сутки Б. Я. Хайкин, . Оптимальной температурой для выращивания . С, для . С, для .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.172, запросов: 108