Антигенные свойства возбудителей чумы крупного рогатого скота и плотоядных, диагностика и специфическая профилактика инфекций

Антигенные свойства возбудителей чумы крупного рогатого скота и плотоядных, диагностика и специфическая профилактика инфекций

Автор: Никитин, Евгений Борисович

Шифр специальности: 16.00.03

Научная степень: Докторская

Год защиты: 1999

Место защиты: Семипалатинск

Количество страниц: 359 с. ил.

Артикул: 269905

Автор: Никитин, Евгений Борисович

Стоимость: 250 руб.

Антигенные свойства возбудителей чумы крупного рогатого скота и плотоядных, диагностика и специфическая профилактика инфекций  Антигенные свойства возбудителей чумы крупного рогатого скота и плотоядных, диагностика и специфическая профилактика инфекций 

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Краткая характеристика представителей рода
iivi
1.2. Краткая характеристика чумы крупного рогатого скота
1.3. Лабораторные методы диагностики чумы крупного
рогатого скота
1.4. Краткая характеристика чумы плотоядных
1.5. Лабораторные методы диагностики чумы плотоядных
1.6. Методы экспрессной диагностики вирусных инфекций
1.7. Средства и методы профилактики чумы плотоядных
1.8. Заключен ие по обзору л итературы
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Вирусы и вируссодержащие материалы
2.2. Животные
2.3. Культуры клеток и питательные среды
2.4. Антисыворотки
2.5. Реактивы и препараты
2.6. Растворы химических веществ
2.7. Отбор и подг отовка проб испытуемого материала
2.8. Выделение гаммаглобулинов
2.9. Определение концентрации белка в препарата
иммуноглобулинов и ФИТЦконъюгатов
2Методы серологических исследований
2. .Культивирование вирусов
2Методы консервирования препаратов
2. .Статистическая обработка результатов исследований
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. АНАЛИЗ СЛУЧАЕВ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЖИВОТНЫХ
ЧУМОЙ КРС В СНГ И ЧУМОЙ ПЛОТОЯДНЫХ в
КАЗАХСТАНЕ
3.2. ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННОЙ СТРУКТУРЫ ПОЛЕВЫХ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА ЧУМЫ КРС
3.3. РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СРЕДСТВ И МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ЧУМЫ КРС
3.3.1. Получение иммунных сывороток при чуме КРС и определение их серологической активности
3.3.2. Выделение иммуноглобулиновой фракции из иммунных сывороток и определение ее серологической активности
3.3.3. Отработка условий постановки
микромодификаций РСК для диагностики чумы крупного рогатого скота
3.3.4. Отработка условий приготовления диагностикумов и постановки ОАсистемы для диагностики чумы КРС
3.3.4.1. Получение антигельных иммуносорбентов на основе СЫВгактивированной сефарозы 4В
3.3.4.2. Определение варианта постановки ПАсистемы и получение специфических ФИТЦиммуноглобулинов
3.3.4.3. Отработка оптимальных условий постановки ОАсистемы
3.3.4.4. Постановка ОАсисгемы на основе эритроцитарного иммуносорбента
3.3.5. Отработка условий приготовления диагностикумов и постановки реакции агглютинации микродисперсии для обнаружения вирусспецифического антигена в органах и тканях больных и павших от чумы КРС сельскохозяйственных животных
3.3.5Л. Выбор носителя и получение на его основе антительного иммуносорбента
3.3.5.2. Определение оптимальных условий постановки РАМ и изучение ее специфичности
3.3.6. Изучение диагностической ценности
микромодификаций РСК, ОАсистемы и РАМ при обнаружении антигенов вируса чумы КРС
3.3.7. Отработка условий приготовления диагностикума и постановки реакции агглютинации латекса для обнаружения вирусспецифических антител в сыворотках крови переболевших
и вакцинированных против чумы КРС сельскохозяйственных животных
3.3.7.1. Получение специфического антигена вакцинного штамма К вируса чумы КРС и определение его серологической активности
3.3.7.2. Выбор типа латекса и получение на его основе антигенного иммуносорбента
3.3.7.3. Определение оптимальных условий постановки реакции агглютинации латекса и оценка ее специфичности
3.3.7.4. Изучение диагностической ценности
микромодификаций РСК и реакции агглютинации латекса для обнаружения антител против вируса чумы КРС
3.3.8. Использование разработанных методов
диагностики чумы КРС при естественных вспышках заболевания
3.3.9. Совершенствование схемы лабораторной
диагностики чумы крупного рогатого скота
3.4. ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННОЙ СТРУКТУРЫ ПОЛЕВЫХ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ
3.5. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ
СРЕДСТВ И МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ И ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ КРС ПРИ ЧУМЕ ПЛОТОЯДНЫХ
3.6. РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ
СПЕЦИФИЧЕСКИХ СРЕДСТВ И МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ
3.6.1. Изучение условий культивирования вакцинных штаммов вируса чумы плотоядных
3.6.2. Отработка условий приготовления комплексного культурального антигена вируса чумы плотоядных и определение его активности и специфичности.
3.6.3. Получение иммунных сывороток при чуме плотоядных, определение их серологической активности и выделение иммуноглобулиновой фракции
3.6.4. Использование полученных диагностических препаратов при чуме плотоядных для разработки методов специфической лабораторной диагностики этой инфекции 7
3.6.5. Применение разработанных средств и методов
диагностики чумы плотоядных при вспышках заболевания в различных регионах Республики Казахстан
3.6.6. Совершенствование схемы лабораторной
диагностики чумы плотоядных
3.7. РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ И МЕТОДОВ ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ
3.7.1. Выбор вакцинного штамма вируса чумы плотоядных, обладающего наибольшей степенью иммуногенности и ареактогенностью
3.7.2. Конструирование вакцины против чумы
плотоядных
3.7.3. Определение свойств полученного вакцинного
препарата
3.7.4. Получение контрольного эпизоотического штамма
вируса чумы плотоядных для контроля иммуногенных свойств вакцины
3.7.5. Определение зависимости напряженности
иммунитета после применения вакцины против чумы плотоядных от уровня вируснейтрализующих антител в сыворотках крови иммунизированных животных
3.7.6. Определение условий применения вакцины против
чумы плотоядных, сроков наступления и продолжительности иммунитета
3.7.7. Комиссионные испытания вакцины против чумы плотоядных и организация ее промышленного производства
3.8. СРАВНЕНИЕ АНТИГЕННОЙ СТРУКТУРЫ
НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА
IIVI
4. ОБСУЖДЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ 9
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АБН Алеутская болезнь норок АЕМ Атомные единицы массы АН Антиген нормальный АС Антиген специфический БОЕ Бляшкообразующие единицы ВД Вирусная диарея крупного рогатого скота V Перевиваемая культура клеток почки африканской зеленой мартышки
ВИЭФ Метод встречного иммуноэлектрофореза ГУ В МСХ РК Главное управление ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан
система i i Твердофазовый метод флуоресцирующих антител ДНК Дезоксирибонуклеиновая кислота ЕД Единица действия
I Твердофазовый метод иммуноферментного анализа
I ИД Инфекционная доза
ЗКГ Злокачественная катаральная горячка
I Иммуноглобулин класса
I Иммуноглобулин класса М
ИРТ Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота
ИФА Иммуноферментный анализ
ИЭМ Иммуноэлекгронная микроскопия
КББ Карбонатби карбонатный буфер
КРС Крупный рогатый скот
КС Комплеменгфиксирующие антиген или антитела КФ Культура клеток фибробластов куриных эмбрионов КЧС Классическая чума свиней Десятичный логарифм
Перевиваемая культура клеток почки теленка
Перевиваемая культура клеток почки собаки
МПА Мясопептонный агар
МПБ Мясопептонный бульон
МППБ Мясопептонный печеночный бульон
МФА Метод флуоресцирующих антител МЭБ Международное эпизоотическое бюро
НИСХИ НЦ БТ РК Научноисследовательский сельскохозяйственный институт Национального центра по биотехнологии Республики Казахстан
ПГ3 Парагрипп3 крупного рогатого скота ПО Перевиваемая линия клеток почки овцы ПТ Перевиваемая культура клеток почки теленка ПЭГ Полиэтиленгликоль
НМФА Непрямой метод флуоресцирующих антител
РАЛ Реакция агглютинации латекса
РАМ Реакция агглютинации микродисперсии
РДП Реакция диффузионной преципитации в агаровом геле
РДСК Реакция длительного связывания комплемента
РИА Радиоиммунный анализ
Реакция нейтрализации
РНГА Реакция непрямой гемагглютинации
РПГА Реакция пассивной гемагглютинации
РНК Рибонуклеиновая кислота
РСинфскция Респираторносинцитиальная инфекция крупного
рогатого скота
РСК Реакция связывания комплемента
РТАЛ Реакция торможения агглютинации латекса
РТГА Реакция торможения гемагглютинации
РФД Резорциноформальдегидная микродисперсия
РЭК Развивающиеся эмбрионы кур
СНГ Союз Независимых Государств
СПЭВ Перевиваемая линия клеток почки эмбриона свиньи
ТЦД Тканевая цитопатическая доза
ФБР Фосфатнонатриевый буфер
ФБС Фосфатнобуферный солевой раствор
ФИТЦ Флуоресцеина изотиацианат
ХАО Хорионаллантоисная оболочка
ЦПД Цитопатическое действие
Чума КРС, ЧКРС Чума крупного рогатого скота
Чума МЖЖ, ЧМЖЖ Чума мелких жвачных животных
ЭИД Эмбриональная инфицирующая доза
ЭЛ Эфемерная лихорадка крупного рогатого скота
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


МФЛ позволяет поставить быстрый и ранний прижизненный диагноз на чуму у хорьков и собак путем исследования капли крови, полученной надрезанием кончика хвоста или мазков из конъюнктивы или носовых ходов животных . Прямой МФА при диагностике чумы плотоядных путем исследования мазков из конъюнктивы и крови оказался эффективным для дифференциации этого заболевания от парвовирусного энтерита 3. О высокой надежности МФА, как диагностического теста при чуме плотоядных, сообщали и другие исследователи ,4,5,6,7,8. Иммуноферментный анализ. Иммуногистохимический и твердофазный варианты ИФА разработаны и используются для диагностики чумы плотоядных. По данным Г. П.Дыминой с соавт. МФА, заключается в более высокой его специфичности, чувствительности, длительности хранения препаратов, применении обычного светового микроскопа. Антитела, меченые пероксидазой, имеют относительно небольшой молекулярный вес и легко проникают в клеточные структуры. Гистологический вариант ИФА оказался более чувствительным по сравнению с методом обнаружения телецвключений . Антиген вируса чумы обнаруживается в бронхиальных альвеолярных клетках, макрофагах, клетках интерстициальной ткани, эпителиальных клетках бронхиол, лимфоцитах и других органах и тканях больных и павших от чумы животных. Твердофазовый вариант ИФА I в диагностике чумы плотоядных в основном применяется для обнаружения вирусспецифических антител 2,3. По данным авторов, совнадаемость Iтеста и составляет ,1. В I специфические I определяются за неделю до появления положительного результата . Тигры I возрастают в течение 3 недель. I в I обнаруживаются к неделе после заражения. В.Л. Зорин и А. И.Зорина 4 для того, чтобы вакцинация щенков против чумы не совпала с инкубационным периодом заболевания, перед прививкой рекомендуют ставить реакцию иммунодотблотинга
точечнуюИФА, проверяя тем самым, инфицировано животное или нет вирусом чумы. Если реакция положительная, вакцинацию откладывают и проводят специфическое и симптоматическое лечение. Тем самым предотвращается развитие болезни и повышается резистентность организма и его иммунный статус. Реакция нейтрализации. Титры ВНантител после вакцинации, по данным авторов, достигают 3,9 1мл. У новорожденных животных, родившихся от иммунных к чуме плотоядных меток, нейтрализующие антитела определяются до дневного возраста. При исследовании этим методом сывороток крови бродячих собак было установлено, что из них имеют антитела к вирусу чумы. О применении для обнаружения антител к вирусу чумы плотоядных сообщали и другие исследователи ,9,8,7. Другие методы диагностики ЧУМЫ плотоядных. Непременным условием при постановке данной реакции, по данным авторов, является свежий патологический материал. Чувствительность метода составляет . В качестве альтернативного и быстрого метода диагностики чумы плотоядных предложена цепная полимеразная реакция. Полученную вирусную РНК из патологического материала или зараженной культуры клеток амплифицируют с использованием в качестве праймеров последовательностей кДНК ген Б гетерологичного вируса чумы КРС. Проводят ДНКзондирование методом блотгибридизации. Этот метод может установить принадлежность выделенного вируса к роду морбилливирусов 9,0. В литературе имеются также отрывочные сообщения о возможности применения для диагностики чумы плотоядных и метода радиоиммунного анализа . БИБЛИОТЕКА
Ниже мы приводим таблицу возможных сроков получения результатов исследований на чуму плотоядных в зависимости от методов анализа, разработанных до настоящего времени. Из описанного выше видно, что в настоящее время разработан комплекс методов лабораторной диагностики чумы плотоядных. Каждый метод имеет свои достоинства и недостатки, позволяет решать различные диагностические задачи, имеет отличия по чувствительности, специфичности, срокам постановки диагноза. Однако использование их в практических условиях затрудняется отсутствием стандартных диагностических препаратов, необходимостью наличия специальных условий и оборудования. Поэтому разработка активных, специфичных, чувствительных и простых в исполнении средств и методов лабораторной диагностики чумы плотоядных остатся весьма актуальной задачей. ТАБЛИЦА 1.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.270, запросов: 108