Модуляция активности транскрипционных регуляторов p53 и NF-kB в условиях микоплазменной инфекции как фактор, способствующий трансформации эукариотических клеток и опухолевой прогрессии

Модуляция активности транскрипционных регуляторов p53 и NF-kB в условиях микоплазменной инфекции как фактор, способствующий трансформации эукариотических клеток и опухолевой прогрессии

Автор: Логунов, Денис Юрьевич

Шифр специальности: 03.02.03

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2011

Место защиты: Москва

Количество страниц: 221 с. ил.

Артикул: 5086415

Автор: Логунов, Денис Юрьевич

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ.
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
ГЛАВА
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Общая характеристика микоплазм
1.1.1. Классификация, структурная организация и физиология микоплазм.
1.1.2. Адгезия микоплазм на клетки хозяина.
1.1.3. Особенности взаимодействия микоплазм с клеткой хозяина и его иммунной системой
1.2. ОПУХОЛЕВЫЙ СУПРЕССОР Р
1.2.1 Биологическая роль р.
1.2.2. Характеристика гена р.
1.2.3. Структурнофункциональная организация белка р.
1.2.4. Регуляция активности р
1.2.5. Транскрипционная активность р.
1.2.6. Транскрипционные мишени белка р.
1.2.7. Инфекционные агенты и их влиянте на активность р
1.3.ТРАНСКРИПЦИОННЫЙ ФАКТОР ИЕКВ И ЕГО РОЛЬ В РЕАЛИЗАЦИИ РАЗЛИЧНЫХ КЛЕТОЧНЫХ ФУНКЦИЙ
1.3.1. Строение и функции транскрипционного фактора МБкВ
1.3.2. Пути активации транскрипционного фактора ОТкВ
1.3.3. Роль ЭТкВ в формировании и прогрессии опухолей.
1.3.3.1. Хронические инфекции, воспаление и их ассоциация с опухолевым
ростом.
1.4. МИКОПЛАЗМЕННАЯ ИНФЕКЦИЯ И ЕЕ ВЛИЯНИЕ НА АКТИВНОСТЬ ИБкВИр
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Материалы
2.1.1. Вирусы и бактериальные штаммы
2.1.2. Клеточные линии
2.1.3. Плазмидные векторы.
2.1.4. Ферменты и другие реактивы.
2.1.5. Лабораторные животные
2.1.6. Лабораторное оборудование
2.2. Методы.
2.2.1. Подготовка компетентных клеток . i штамма 5.
2.2.2. Трансформация компетентных клеток . i штамма
2.2.3. Выделение аналитических количеств плазмидной ДНК.
2.2.4. Выделение тотальной ДНК
2.2.5. Выделение и очистка плазмидной ДНК.
2.2.6. Рестрикционный анализ ДНК специфическими
эндодезоксирибонуклеазами.
2.2.7. Фракционирование фрагментов ДНК методом электрофореза в агарозном геле.
2.2.8. Препаративное разделение фрагментов ДНК и элюция их из геля
2.2.9. Лигирование фрагментов ДНК.
2.2 Выделение, наращивание и видовая идентификация микоплазм
2.2 Выделение фракции липидассоциированиых мембранных белков микоплазм.
2.2 Экспериментальное заражение культур клеток микоплазмой
2.2 Полимеразная цепная реакция
2.2 ПЦР в режиме реального времени
2.2 Измерение активности ферментов микоплазмы в культуральной среде
2.2 Измерение активности галактозидазы
2.2 Иммуноблотинг.
2.2 Метод окраски клеток метиленовым голубым.
2.2 Определение количества живых клеток по реакции с субстратом МТТ
2.2 Получение лентивируса методом котрансфекции
2.2 Выделение тотальной РНК из культуры клеток.
2.2 Реакция обратной транскрипции
2.2 Измерение активности каспаз
2.2 Измерение уровня митохондриального трансмембранного потенциала Дт
2.2 Измерение концентрации цитокинов.
2.2 Трансфекция клеток линии 3 для получения рекомбинантных аденовирусов.
2.2 Накопление вирусов.
2.2 Очистка и концентрирование аденовирусов
2.2 Титрование вирусов.
2.2 Выделение вирионной ДНК
2.2. Определение активности секретируемой щелочной фосфатазы
2.2. Анализ включения 5Вгс1и
2.2 Получение образцов простаты
ГЛАВА
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Экспериментальное заражение и идентификация микоплазм в культурах клеток.
3.2. Влияние микоплазменной инфекции на активность транскрипционного фактора р
3.2.1 Изучение влияния различных видов микоплазм на транскрипционную активность р.
3.2.2 Микоплазменная инфекция ингибирует рзависимую остановку
клеточного цикла и рзависимый апоптоз
3.2.3. Микоплазменная инфекция способствует Каьопосредованной трансформации крысиных эмбриональных фибробластов
3.2.4. Изменение профиля экспрессии генов в клетках инфицированных
микоплазмой.
3.3 Влияние микоплазменной инфекции на активность транскрипционного
фактора .
3.3.1. Различные виды микоплазм приводят к активации в клетках при
взаимодействии с Толлрецептором
3.3.2 Определение возможных сочетаний Толлподобных рецепторов, вызывающих активацию транскрипционного фактора после взаимодействия .iii или ее структурными компонентами
3.3.3. Микоплазмы и их липидассоциированныс мембранные белки повышают выживаемость клеток линии 3, экспрессирующих Толлподобные рецепторы , при действии химиотерапевтических препаратов.
3.3.4. Блокирование функциональной активности в клетках, инфицированных микоплазмой, приводит к отмене их устойчивости к химиотерапевтическим препаратам.
3.3.5. Анализ экспрессии Толлподобных рецепторов 2 и 6 в различных опухолевых линиях клеток
3.3.6. .iii и ее структурные компоненты активируют подавляют апоптоз в опухолевых клетках, экспрессирующих Толлподобные рецепторы , при действии химиотерапевтических препаратов.
3.3.7. Изучение кинетики роста опухолевых клеток I3 при инфекции .iii или добавлении ее структурных компонентов в эксперименте i vi
3.3.8. Влияние микоплазменной инфекции клеток на прогрессию мышиной миеломоноцитарной лейкемии в экспериментах i viv
3.3.9. Влияние диациллипоиептида .iii на пролиферацию и резистентность к химиотерапевтическим препаратам опухолевых клеток IЗВ в экспериментах i viv
3.3 Изучение влияния структурного компонента .iii 2 на продукцию факторов, стимулирующих пролиферацию клеток мышиной миеломоноцитарной лейкемии I3 i viv.
3.4 Экспрессия 2 на поверхности лейкозных клеток человека повышает их резистентность к химиотерапии
3.5 Персистенция микоплазм в опухолях простаты.
3.5.1 Детекция микоплазмы в ткани простаты пациентов с подозрением на рак
простаты.
3.5.3Соотношение между уровнем простатического специфического антигена и
присутствием М. ii в ткани простаты.
3.6. Определение влияния микоплазменной инфекции на резистентность просгатных клеток к действию химиотерапевтических препаратов.
3.7 Изучение влияния микоплазменной инфекции на метаболизм клеток.
3.8 Активация КВ ассоциирована с подавлением транскрипционной
активности р
3.9. Изучение радиопротективных свойств диациллипопептида 2
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Согласно первой, молликуты филогенетически связаны с грамположительными бактериями, от которых они развились путем упрощения генома . Окончательного разрешения в пользу одной или другой теории на сегодняшний момент не существует. Однако, исходя из метаболомного анализа, основанного на данных полной нуклеотидной последовательности геномов нескольких видов микоплазм, очевидно, что многие метаболические пути у микоплазм сильно редуцированы. Например, в геноме М. АТФ из глюкозы Перечисленные выше факты позволяют предположить, что наиболее вероятным происхождением микоплазм являлось упрощение. Представители молликут, наряду с риккетсиями, являются самыми мелкими самореплицирующимися прокариотами . Микоплазмы близки по размеру крупным вирусам, но в отличие от последних, способны размножаться в исскуственных средах. Вследствие того, что микоплазмы лишены ригидной клеточной стенки их клетки характеризуются такими морфологическими и физиологическими свойствами, как полиморфизм, пластичность, осмотическая неустойчивость к воздействию детергентов Прозоровский С. Кроме того, ввиду отсутствия клеточной стенки, микоплазмы не окрашиваются по Граму и обладают крайне низкой чувствительностью к большинству других красителей v . К . В колониях микоплазм обнаруживаются округлые, кольцевидные, овальные, кокковидные и нитевидные образования Рисунок 1 А,1Б, 1В. Клетки имеют различную величину, которая по данным различных авторов, чаще всего колеблется в пределах от 0,1 до 0,8 мкм Прозоровский С. Диаметр сферических клеток варьирует от 0,3 до 0,8 мкм. Кроме того, в популяции микоплазм встречаются элементарные тела гранулы размером 0,, мкм в диаметре, которые, по видимому, не способны реплицироваться i vi. Структурная организация микоплазм относительно проста. Все они представлены клетками, ограниченными только трехслойной цитоплазматической мембраной. В цитоплазме клеток имеются нуклеоид, диффузно распределенный в виде нитей ДНК, рибосомы и иногда внугрицитоплазматические мембранные структуры. Рисунок 1Г i . В отличие от бактериальных клеток в состав мембран микоплазм входит стерол, составляющий до процентов от общего количества мембранных липидов. Основным компонентом паразитических видов является свободный и этерифицированный холестерин, обеспечивающий энергию и структурную организацию клетки 0 . На поверхности наруженого слоя мембраны у некоторых видов мико и уреаплазм выявляется капсулоподобный слой, который может выполнять защитную функцию, способствовать прикреплению к клеткехозяину, а также способствовать объединению клеток микоплазм в цепочки и колонии. Химический состав клетки состоит из белка в количестве ,, общего азота ,, нуклеиновых кислот 6, липидов 5,, и жирных кислот 2,. Количество белка в сухой массе микоплазм колеблется от до мг, в его состав входит до аминокислот. Кроме этого, белковый компонент включает различные ферменты, играющие основную роль в метаболизме микробной клетки. Геном клетки микоплазм состоит из кольцевой двух спиральной ДНК. При этом репликация генома происходит, как правило, в одной точке роста. Традиционным методом для определения размера генома i долгие годы являлся гельэлектрофорез в импульсном поле i Н. Полученные с использованием этого метода данные показали, что геном i варьирует от 0 до т. М. ii до т. Ixi v . Размер генома варьирует не только внутри одного рода, но и даже среди штаммов одного вида v . Таблица 1. Род II 6 0 1. Род II 0 1,0 Нет Оптимальная температура для роста С требуется 0. ОТРЯД IV А паегора. Род II Аего1ер1азта 1 1. Рисунок 1. Морфология микоплазм. А Б В электронные микрофотографии клеток М. Г электронная микрофотография ультратонкого среза клеток микоплазмы. Развитие современных методов высокопроизводительного сиквенса, повидимому, уже в ближайшее время станет альтернативой существовавшим до этого методам изучения геномов. На сегодняшний день классическим методом сиквенса и методом высокопроизводительного сиквенса определены полные первичные структуры геномных ДНК молликут см. Таблицу. Сиквенсы еще видов подготавливаются для размещения в Национальном центре биотехнологической информации 1.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.183, запросов: 165