Биотехнологические основы диагностики вирусных и бактериальных инфекций человека и животных

Биотехнологические основы диагностики вирусных и бактериальных инфекций человека и животных

Автор: Туманов, Юрий Васильевич

Автор: Туманов, Юрий Васильевич

Шифр специальности: 03.01.06

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2011

Место защиты: Кольцово

Количество страниц: 365 с. ил.

Артикул: 5087585

Стоимость: 250 руб.

1.1. Проблемы и методы диагностики вирусного гепатита А
1.2. Проблемы диагностики туберкулеза
1.2.1. Туберкулинодиагностика
1.2.2. Иммунохимические методы анализа.
1.2.3. Моноклональные антитела в диагностике туберкулеза.
ч 1.2.4. Маркеры туберкулезной инфекции, используемые в дифференциальной.
диагностике туберкулеза
1.2.4.1. Критерии оценки пригодности антигенов М i для серологической диагностики туберкулезной инфекции
1.2.5. Методы получения и изучения антигенов М. i .
1.2.6. Характерист ика белковых антигенов М. i.
1.2.7. Цитокиновый статус при туберкулезной инфекции.
1.2.8. Биохимические маркеры, отражающие локальный иммунный
ответ к туберкулезу
1.2.9. Цитокиновые маркеры при активном туберкулезе
1.2 Роль I при характеристике Тклеточного иммунитета туберкулезной инфекции.
1.3. Технология иммунного мониторинга туберкулезной инфекции.
1.3.1. Иммунологические маркеры туберкулезной инфекции.
1.3.2. Iтехнология в диагностике микобактериальных инфекций
1.3.3. Разработка и применение Iанализа
1.4. Антигены в специфической диагностике туберкулеза
1.4.1. Белки культурального фильтратаМ i
1.4.2. Клеточные морфологические тесты в диагностике туберкулеза.
1.5. Коммерческие тесты на выявление туберкулезной инфекции
1.6. Клеточный иммунитет при туберкулезной инфекции
1.6.1. Генетические основы различий в резистентности к туберкулезной инфекции.
1.6.2. Клеточные медиаторы иммунного ответа
1.6.3. Применение цитокиновых костимуляторов
1.7. Методы структурного анализа.
1.7.1. Модель антигснспецифического тетрамерного комплекса
с антиген презентирующими клетками
1.8 Технология . .
1.8.1 Современные тенденции в диагностике туберкулеза.
1.8.2 Клиническое использование тестов.
11 Новые Тклеточные тесты при диагностике латентного тубсркулеза0 1 Чувствительность новых тестов при исследовании активного
туберкулеза с коинфекцией. V
Глава 2. Материалы и методы.
Глава 3 Результаты и их обсуждение
3.1. Разработка методов лабораторной диагностики гепатита АР
3.1.1. Диагностическая тестсистема для выявления антител
к вирусу гепатита А.
3.1.2. Разработка тестсистемы иммуноферментной для выявления
Iантител к вирусу гепатита А.
3.1.2 1. Аналитические и диагностические характеристики
разработанной тсстсисгемы.
3.2. Роль МКА в диагностике маркеров ВГА. .
3.3. Консерванты.
3.4. Разработка методов диагностики туберкулеза с использованием рекомбинантных белков М. i
3.4.1. Выбор высокоспецифичных белков для серологической , диагностики туберкулеза.
3.4.2. Выбор видоспецифичных антигенов М. i для тестирования
в ИФА и Iанализс
3.4.3. Выбор экспрессирующего вектора для конструирования рекомбинантной молекулы, несущей геи, кодирующий аминокислотную
последовательность целевогобелка
3.4.4. Конструирование рекомбинантных молекул, несущих гены, кодирующие видоспецифичные белки М. i
3.4.5. Информационный поиск генов x, x и , и дизайн праймеров для синтеза ампликонов, включающих эти гены.
3.4.6. Оптимизация условий для наработки рекомбинантных белков.6
3.4.7. Оценка рекомбинантных видоспецифичных белков М i в
ИФА, Iанализе на клинических изолятах
3.4.7.1. Описание структуры, гибридных белков АТ6 и
3.4.7.2. Оптимизация условий для.выделения и очистки рекомбинантных белков
3.5.Клиникодиагностические исследования рекомбинантных белков
М i.
3.6. Выбор конъюгата
3.6.1. Синтез биотинилированных конъюгатов.
3.7. Подтверждающие тесты на туберкулезную инфекцию иммуноблотанализ
3.7.1. ПЦР в качестве подтверждающего тестаЛ
, 3.8. Функциональный анализ
3.8. . Технология Iанализа и IXIанализа в диагностике туберкулеза легких .
3.8.2. Клинические аспекты применения Iанализа
. 3.8.3. I ответ при.стимуляции периферической крови среди больных
туберкулезомлегких в процессе антитуберкулезной терапии .
3.9. Iанапиз .
3 Применение технологии I для оценки специфического
иммунного ответ натуберкулезную инфекцию. .
3 Набор компонеггов для выявления губеркулеза.
31. Технолотчсская схема проведения I анализа с
применением видоспецифических антигенов М. i 6 и I
3.9.3. ВИЧассоциированный туберкулез
3 Диагностика ВЛКРС.
3 Заключение
4. ВЫВОДЫ.
5. Список литературы
6. Приложения.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ад еноз индезаминаза Ар ампициллин
антиген секретирующие клетки вакцина БЦЖ i i
I бромхлориндолилфосфат, динатриевая соль i биотинпротеин лигаза ii i
бромистый этидий
СТАВ цетилтриметиламмоний бромид
СуаА аденилатциклаза i
фетальная сыворотка телят vi i
глюкоза i глутамин глицин
глутатионтрансфсраза i
глутатионтрансферазацелевой белок
система генов тканевой совместимости человека
метод предельных разведений
I индикаторные пробирки для роста микобактерий i ii
МНС главный комплекс гистосовместимости iiii x
1 макрофагальный белок, ассоциированный с естественной резистентностью
нитротетразолия хлорид голубой
xiiiii фенилметилсульфонилфторид
очищенный белковый дериват ii i iviv
область различия i i
ТАЕ трисацетатный буфер Годполимераза трисглициновый буфер
ТЫрецепторы Толлподобные рецепторы
ТББ буфер для трансформации и хранения компетентных клеток
РНу гаммаинтерферон
1НЫРЫанализ уиитсрфероновый гаммаиптерфероновый анализ НЫуЕЫБРОТанализ гаммаинтерферонспотанализ а.о. аминокислотный остаток АА акриламид
АП аминокислотная последовательность
АПК антигенпрезснтирующая клетка
БКГ буфер для концентрирующего геля
БНГ буфер для нанесения проб ДНК
БПБ буфер для переноса белков
БРГ буфер для разделяющего геля
БСА бычий сывороточный альбумин
БФС бромфеноловый синий
ВГА вирус гепатита А
ВИЧ вирус иммунодефицита человека
ВОЗ Всемирная организация здравоохранения
ДМСО диметилсульфоксид
дНТФ дезоксирибонуклсозидгрифосфат
ДСН додецилсульфат натрия
ДСНПААГ БОБПААГ полиакриламидный гель с додецилсульфатом натрия
ДТТ дитиотреитол
ИБ инкубационный буфер
ИПТГ изопропилтиогалактопиранозид
ИФА иммуноферментный анализ
ИФлА иммунофлуоресцентный анализ
КонА конканавалии А
КРС крупный рогатый скот
КФ культуральный фильтрат
КЦ ксилол цианол
м.м. молекулярная масса МБ маркеры молекулярных масс белков МБАА , метиленбисакриламид МКА моноклональное антитело
МКА I моноклональные антитела к гаммаинтерферону
МКА моноклональные антитела к глутатионтрансферазе
МКПК мононуклеарные клетки периферической крови
МТК микобактерии туберкулезного комплекса
МФ маркеры длины ДНКфрагментов
Ж ночная культура
НП нуклеотидная последовательность
ОП опт ическая плотность
ОРС открытая рамка считывания
ОФД ортофенилендиамин
п.н. пара нуклеотидов
ПЦ метод проточной циггофлуорометрии
ПЦР полимеразная цепная реакция
ПЭГ полиэтиленгликоль
РБТЛ реакция бласттрансформации лейкоцитов
РЫКаза рибонуклсаза А
СМЖ спинномозговая жидкость
твин
ТХ0тритон Х
ТЕМЕД тетраметилэтилендиамии
ТМБ ЗДДбтетраметилбензидин
Трис трисгвдроксиметиламинометан
УЗД ультразвуковой дезинтеграт, или соникат
ФСБ, фосфатный буферный раствор
ФСБТ фосфатный солевой буфер с тайном
ФГА фитогемагглютинин
ЭР эндонуклеаза рестрикции, рестриктаза
ЭФ электрофорез
ВВЕДЕНИЕ


Благодаря своей простоте, дешевизне, возможности автоматической компьютерной обработке результатов анализа, исключающей субъективную оценку, отсутствие дорогостоящего оборудования ИФАтехнологии нашли широкое применение для диагностики большого числа вирусных и бактериальных инфекций Среди современных экспрессметодов исследования, получивших широкое применение в практике здравоохранения при диагностике туберкулеза, представлены методы дотблотинга И имммунохроматографии Андросова М. В. и др. Карпов . В этих методиках основным принципом является иммунохимическое взаимодействие в реакции антиген антитела. Данные методыиспользуются для быстрого скрининга уровня специфичных антител в крови или плазме крови. Специфичность иммунохроматографических методов, анализа туберкулезной инфекциисоставляет ,2, а чувствительность , . Степень корреляции между результатами культуральных исследований и иммунохроматографическими методами при. В качестве антигенов для специфической диагностики туберкулеза применяют селективные и специфические , , , , , антигены . МКА. М. i. М. i представляли гидрофобные аминокислоты и ,4 гидрофильные аминокислотные остатки. Чувствительность анализа составила , специфичность . Визуальная оценка результатов анализа несколько снижает эффективность метода, однако представляет определенный интерес в случае экстренной диагностики. Методы серодиагностики, основанные на определении антител к антигенам микобактерий, нашли широкое применение для скрининговых исследований, благодаря относительно невысокой стоимости, быстроте, высокой чувствительности и специфичности среди инфицированных людей. Титры антител в сыворотках больных в большей степени связаны с особенностями течения болезни и состоянием иммунной системы, пациента. Основными маркерами туберкулезной инфекции являются иммуноглобулины классов М, и А. Ранние антитела иммуноглобулины класса М присутствуют на ранней стадии заболевания и характеризуют, в основном, неактивную форму туберкулеза. При активации процесса количество Iантител уменьшается и возрастает количество иммуноглобулинов класса . Антитела класса I определяются как в крови сывороточный I, так и в секретах, моче, мокроте секреторный . Особенностью является высокая устойчивость к протеазам и отсутствие влияния на иммунохимические комплексы антигенантитело. Антиадгезивные свойства позволяют организму выработать резистентность против вирусных и бактериальных инфекций, блокируя их проникновение во внутреннюю среду микроорганизма. Другие серологические маркеры активности туберкулезного процесса, в частности, I вызывают специальный интерес. Недавно . I. Этот факт был также подтвержден позднее . Регуляторная роль I осуществляется через II рецептор на макрофагах и лимфоцитах. Высокий уровень сывороточного I общего обычно коррелируется с интенсивным синтезом I4 и акгивацией ТН2 ответа. I5 цитокины необходимы для образования. I. 1лимфоциты, синтезируют гаммаинтерферон и I2, необходимые для Тклеточного иммунитета. Снижение синтеза I и I2 приводит к повышению продукции I и развитию аллергических реакций. Одним из главных факторов, определяющих уровень специфичности серологических методов, является качество применяемого антигена . М. i, М. Т.М. Антитела к вирулентным антигенам микобактерий, вызывающих туберкулез у человека, часто перекрестно реагируют с антигенами непатогенных микобактерий и возбудителями других болезней. Вирулентные микобактерии имеют сходства в атгигенной структуре с М. России для вакцинации. Основными источниками получения антигенов микобактерий являются следующие цельные микобактерии, белковые компоненты которых получают в результате воздействия ультразвуком или под высоким давлением М. М. . V. . Vi . М. i , i . I . Поверхность микобакгериальной клетки содержит многочисленные небелковые антигены, обладающие высокой активностью. Однако эти антигены гетерогенны и образуют структурные комплексы, что ограничивает их использование в диагностике или в качестве лечебных препаратов. На различных стадиях инфекционного процесса про исходит наработка антител, отличающихся по своей природе. Так антиполисахаридныс аыгигсла нарабатываются при благоприятном течении заболевания.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.198, запросов: 160