Парентеральные вирусные гепатиты в сибирских регионах России

Парентеральные вирусные гепатиты в сибирских регионах России

Автор: Кочнева, Галина Вадимовна

Шифр специальности: 03.01.03

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2010

Место защиты: Кольцово

Количество страниц: 337 с. ил.

Артикул: 5024472

Автор: Кочнева, Галина Вадимовна

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Вирусный гепатит В.
1.1.1. Вирус гепатита В НВУ.
Г1.2. Генотипы вируса гепатита В.
1.1.3. Эпидемиология вирусного гепатита В.
1.1.4. Вакцинация против НВУ
1.2. Вирусный гепатит С.
1.2.1. Вирус гепатита С НСУ.
1.2.2. Вариабельность НСУ.
1.2.3. Эпидемиология вирусного гепатита С.
1.2.4. Особенности иммунного ответа при инфекции НСУ
1.2.5. Методы культивирования НСУ.
1.3. Вирусный гепатит О.
1.4. Заключение.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Обследованные популяции
2.2. Получение образцов крови.
2.2.1. одготовка сывороток для анализов.
2.2.2. Получение лимфоцитов периферической крови
2.3. Серологическая диагностика.
2.3.1. Маркеры ИВУ
2.3.2. Маркеры ПСУ
2.3.3. Маркеры гепатитов А и Е
2.4. ЕЫБРОТ.
2.5. Выделение вирусных нуклеиновых кислот и проведение ПЦР
2.5.1. Выделение ДНК ИВУ, расчет праймеров и амплификация
2.5.2. Выделение РНК НСУ, расчет праймеров и амплификация
2.5.3. Выделение РНК РЮУ, расчет праймеров и амплификация
2.6. Генотипирование
2.6.1. Определение генотипов НСУ.
2.6.2. Определение генотипов НВУ.
2.6.3. Определение генотипов НвУ.
2.7. Обработка эпидемиологических данных.
2.8. Пептидный анализ антиЕ1 и Е2 НСУ в позитивных сыворотках .
2.9. Конструирование, препаративная наработка и очистка рекомбинантных гликопротеинов Е1 и Е2 НСУ
2 Иммунизация и анализ сывороток крови мышей.
2 Блокирование пептидспсцифических антител
2 Определение НСУнейтраяизующей активности антител
Глава 3. МОЛЕКУЯЯРНОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
ИССЛЕДОВАНИЕ ПАРЕНТЕРАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ
ГЕПАТИТОВ В СИБИРСКИХ РЕГИОНАХ РОССИИ.
3.1. Организация молекулярноэпидемиологических исследований в
Новосибирской, Иркутской областях и Алтайском крае
3.1.1. Разработка анкет для сбора социальнодемографической информации и эпидемиологически значимых данных от обследуемых лиц
3.1.2. Подготовка и утверждение пакетов документов в Этическом комитете.
3.1.3. Получение анкетных данных
3.1.4. Формирование коллекций сывороток крови, полученных от различных популяционных групп1
3.1.5. Формирование баз данных в формате ЕрИпГо.
3.1.6. Общая характеристика обследованной выборки па основе всех баз данных
3.2. Встречаемость серологических маркеров гепатитов В и С в различных группах населения сибирских регионов России
3.2.1. Группа посетителей поликлиники НРБ1 пос. Кольцово
Новосибирской области.
3.2.2. Группа сотрудников медицинских учреждений Новосибирской области
3.2.3. Группа пациентов 1 ептра СПИД
3.2.4. Пациенты наркологического диспансера г. Новосибирска
3.2.5. Пациенты инфекционных больниц Новосибирской, Иркутской областей и Алтайского края с диагнозом острый гепатит.
3.2.6. Пациенты Новосибирской области с диагнозом хронический гепатит
3.3. Анализ геномов вирусов гепатитов В, С и в в сыворотках крови.
3.3.1. Выявление ДНК НВУ в серопозитивных сыворотках.
3.3.2. Выявление РНК НСУ в серопозитивных сыворотках.
3.3.3. Анализ серонегативных образцов, полученных от пациентов
инфекционных больниц
3.3.4. Выявление РНК НСУ.
3.4. Фулминантные гепатиты
3.5. Анализ факторов риска парентеральных вирусных гепатитов В,
3.5.1. Факторы риска инфицирования ИВУ.
3.5.2. Факторы риска инфицирования НСУ.
3.5.3. Факторы риска инфицирования 1ЮУ среди пациентов наркологического диспансера МГНД г. Новосибирск
3.6. Заключение.
Глава 4. ИССЛЕДОВАНИЕ НАПРЯЖЕННОСТИ ГУМОРАЛЬНОГО
ИММУНИТЕТА И СОСТОЯНИЯ КЛЕТОЧНОГО
ИММУНИТЕТА ЧЕРЕЗ 5 ЛЕТ ПОСЛЕ ПОЛНОГО КУРСА ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ГЕПАТИТА В
4.1. Вакцины против V, разрешенные к использованию в России
4.2. Анализ серологических маркеров V в группе вакцинированных.
4.3. Соотношение показателей клеточного индекс специфической стимуляции лимфоцитов и гуморального уровень анти I иммунного о тве та у вакцинированных.
4.4. Определение специфичсской продукции ИФНу лимфоцитами методом 1.
4.5. Оценка необходимости ревакцинации при различном соотношении показателей иммунного ответа
4.6. Заключение.
Глава 5. ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННОГО ПРОФИЛЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ
БЕЛКОВ И Е2 V
5.1. Пептидное сканирование антигенных детерминант нативных поверхностных белков и Е2 V
5.2. Получение и анализ рекомбинантных белков и Е2 V, экспрессированных в клетках млекопитающих.
5.2.1. Выделение и Е2 белков в системе экспрессии вируса осповакцины
5.2.2. Выделение и Е2 белков в системе экспрессии вируса Синдбис
5.3. Связывание очищенных препаратов гЕ1Е2 с Vпозитивными сыворотками человека
5.4. Оценка антиЕ1 и Е2 V у иммунизированных мышей.
5.5. Картирование вируснейтрализующих линейных эпитопов и
Е2 белков V.
5.5.1. Вируснейтрализующая активность иммунных мышиных
сывороток.
5.5.2. Вируснейтрализующая активность иммуногенных эпитопов
рекомбинантных белков Е1 и Е2.
5.6. Заключение.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ АЛТ апанинамииотрансфераза
АнтиНВб антитела к
АнтиНВс антитела к НВсА
АнтиНВе антитела к
а.о. аминокислотный остаток
ВОЗ Всемирная Организация Здравоохранения
ГИКБ1 Городская Инфекционная Клиническая Больница
ДАБ ЗЗсйаттоЬспЗсГтс i
ДМЕМ среда Игла в модификации Дульбекко
ИФА иммуноферментный анализ
ИФНу цитокин интерферон у
кДНК ДНК, синтезированная на матрице РНК
1У1ГНД Муниципальный Городской Наркологический Диспансер
г. Новосибирска МКА моноклональное антитело
НОКБ Новосибирская Областная Клиническая Больница
НРБ Новосибирская районная больница 1, р.п. Кольцово
ОРТ открытая рамка трансляции
ОТ обратная транскриптаза
ОТНЦР ПЦР с использованием в качестве матрицы РНК
ПААГ полиакриламидный гель
пгРНК прегеномная РНК вируса гепатита В
ПИН потребители инъекционных наркотиков
п.о. пара оснований ДНК
ПЦР полимеразная ценная реакция
ФБС фетальная бычья сыворотка
ФСБ фосфатносолевой буфер
ФСБТ фосфатносолевой буфер с твином
ЭР эндоплазматический ретикулум
Гог i vi Центр по
Контролю и Профилактике Заболеваний в США
1 количественный иммунологический тест на основе ИФА
i фокус флюоресценции
i флюоресцеин
зеленый флюоресцирующий белок
i
агароза, модифицированная лектином ivi
подснежник белоснежный
V ii vi вирус гепатита А
белок С вируса гепатита В
белок е фрагмент белка С вируса гепатита В
II белок вируса гепатита В
V ii В vi вирус гепатита В
V ii С vi вирус гепатита С
I IV культуральные частицы V V i
V Vподобные частицы Vi i
V псевдоретровирусные частицы V i
V ii vi вирус гепати та
V ii vi вирус гепатита
пероксидаза хрена
V vi i гипервариабсльный район
IV Международный Комитет но Таксономии и Номенклатуре
Вирусов
I доза, ингибирующая активности
I ii i инфекционная единица
рсцстор 1ЛЖ
липопротсины низкой плотности i ii
V липовирионы ivii
i ii метод объединения ближайших соседей
. клетки натуральные киллеры
нормальная мышиная сыворотка
i отношение шансов
протеин киназа
гЕ 1Е2 рекомбинантный белок Е1Е2 вируса гепатита С
i2 рекомбинантный вирус Синдбис
VV2 рекомбинантный вирус осповакцины
I ii vi вирус Синдбис
IАВ суммарная сыворотка мышей, иммунизированных
белками I I рекомбинантные белки Е1Е2 вируса гепатита С,
полученные в системе экспрессии вируса Синдбис ТЫ Тхэлперы первого типа
2 Тхэлперы второго типа
i i i ii v
метод певзвешенных попарных средних
5 5 i 5нетранслируемая область
VV vii vi вирус осповакцины
VV суммарная сыворотка мышей, иммунизированных
белками VV
VV рекомбинантные белки Е1Е2 вируса гепатита С,
полученные в системе экспрессии вируса осповакцины
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Вирус гепатита В в 0 раз более контагиозен, чем ВИЧ и способен сохранять инфекционность в течение недели в окружающей среде, чем обусловлена большая широта распространения и стойкость циркуляции этого вируса в человеческой популяции . ИВУ принадлежит к роду Ог1оЬераЛпаУ1гш семейства Нера1пстпс1ае . История открытия ЫВУ начинается с года, когда В1итЬе с соавторами обнаружили в реакции иммунопреципитации в сыворотке аборигена Австралии ранее неизвестный белок, который авторы назвали австралийским антигеном . В с соавторами с помощью электронного микроскопа обнаружили вирусную частицу размером нм первоначально названную частицей Дейна, которая содержала австралийский антиген на своей поверхности 6. Этот антиген получил название поверхностного антигена поверхность или в дальнейшем. В году i с соавторами идентифицировали еще один антиген, локализованный внутри частицы Дейна, они назвали его сердцевинным или коровым соте сердцевина антигеном . Через год i с соавторами обнаружили третий антиген, получивший название еантигена 0. В i впервые секвснировал полноразмерный геном 1IV 8. И, наконец, в i открыл последний антиген V, названный X антигеном или x изза его неизвестных в то время функций . При хроническом течении гепатита В в сыворотке крови человека находят три типа вирусных частиц Рис. А 1 частицы размером нм, известные как частицы Дейна или полный инфекционный вирион 2 нитеобразные или филаментные частицы разной длины и составляющие нм в диаметре 3 сферические нм частицы, концентрация которых превышает в 0 раз концентрацию частиц Дейна. В поверхностной мембране всех вирусных частиц представлены три вида белков малый , средний и большой поверхностный белок 2 , но соотношение их различно. Инфекционными являются только частицы Дейна. Внутри частиц Дейна находится вирусный капсид нм в диаметре, основной компонент его оболочки С белок, или коровый белок, или Рис. Б. В капсидс упакованы вирусная ДНК и несколько копий полимеразы или Р белка . Б или Л, средний ргеБ 8 и большой ргсБ 1 ргеБ2 Я. Самая большая открытая рамка считывания кодирует Р белок и перекрывает около генома. Ген ргеББ полностью находится внутри открытой рамки считывания Р гена. Рамки считывания X и С генов также перекрываются с Р геном, но только частично 1. Таблица . Различия между генотипами ТВУ по длине генома и кодируемых им полипептидов . Л vv2, 9 5 5 вставка а. Е 4, 2 8 2 3 деления а. Рис. Структура генома ИВУ. Жирными линиями представлена ДНК ИВУ с четырьмя открытыми рамками считывания в центре. Минусцепь представлена сплошной линией с ковалентно связанной полимеразой Р на 5конце, плюсцепь представлена сплошной и пунктирными линиями с РНК праймером в виде зигзага на 5 конце. Цифрами 1 и 2 обозначены прямые повторы Ж1 и Ж2. Энхансеры обозначены ЕпЫ и ЕпМ. Внешние линии представляют собой геномные и субген ом ные РНК. Стрелочками нарисованы сайты начала транскрипции и сигнал инкапсидирования с. На рисунке также изображены посгтранскрипционный регуляторный элемент РИЕ а, р, расположенный на ргс РНК и сигнал нолиаденилирования . Внутри генома ИВУ находится несколько регуляторных элементов, они принимают участие в регулировании экспрессии каждого гена вируса. ССААТ элементом 5, 7, . Транскрипция прегеномной РЫК зависит от печеночных активаторов транскрипции, таких как 3, 4 и С, т. Ген , включающий зоны , 2 и , кодирует три белка оболочки большой, средний и малый . Большой белок транслируется с 2. РНК 2 , а трансляция среднего и малого белков осуществляется с 2. РНК . Каждый из этих белков существует в двух формах, различающихся но степени гликозилирования 1. Р. Он состоит из 6 а. Соединяясь между собой, цистеиновые остатки формируют конформационную петлю, которая образует главную антигенную детерминанту а. Петля образуется с по 0 а. В также находятся две другие антигенные детерминанты и . Сочетание этих детерминант определяет существование четырех основных серотипов ВV vv, , vv, . В составе поверхностной оболочки находится в виде димера, две молекулы соединены друг с другом связями. Такой димер является основным белком оболочки вируса, его доля составляет , на средний и большой белки оболочки приходится ГО и соответственно.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.361, запросов: 160