Изучение структурной организации и полиморфизма микросателлитных локусов у партеногенетической ящерицы Darevskia unisexualis

Изучение структурной организации и полиморфизма микросателлитных локусов у партеногенетической ящерицы Darevskia unisexualis

Автор: Бадаева, Татьяна Николаевна

Шифр специальности: 03.00.26

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2008

Место защиты: Москва

Количество страниц: 127 с. ил.

Артикул: 4115803

Автор: Бадаева, Татьяна Николаевна

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Однополые виды позвоночных.
1.1. Общая характеристика однополых позвоночных.
1.2 Способы размножения.
1.3. Цитогенетические механизмы однополого размножения.
2. Партеногенез у рептилий.
2.1. Происхождение и эволюция партеногенеза у рептилий.
2.2. Сетчатое видообразование у кавказских скальных ящериц рода vi.
2.3. Клональное разнообразие у однополых видов рептилий.
2.4 Характеристика вида vi ixi.
3. Молекулярногенетические маркеры ДНК.
3.1. Тины молекулярных маркеров.
3.1.1 Маркеры индивидуальных локусов.
3.1.2.Марксры множественных локусов.
3.2. Основные критерии отбора маркеров для генетических исследований.
4. Повторяющиеся последовательности генома эукариот.
4.1. Классификация тандемно повторяющихся последовательностей.
4.2. Микросателлитные последовательности.
4.2.1. Распространение микросатсллитов.
4.2.2. Структура микросателлитов.
4.2.3. Неканонические структуры ДНК, образуемые микросателлитами.
4.2.4. Возникновение и эволюция микросателлитов.
4.2.5. Возможные функции микросателлитов.
4.2.6 Микросателлиты как генетические и геномные маркеры.
5. Генетическая нестабильность микросателлитных локусов.
5.1. Молекулярные механизмы нестабильности микросателлитных последовательностей.
5.2. Модели мутационного процесса микросателлитов.
5.3. Частота микросателлитных мутаций.
5.4. Факторы, влияющие на частоту микросателлитных мутаций.
5.5. Подходы к изучению микросателлитных мутаций.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Биологический материал.
2. Выделение геномной ДНК.
2.1. Выделение ДНК из крови.
2.2. Выделение ДНК из эмбрионов и тканей.
3. Анализ геномной клонит ски . ixi.
3.1. Скрининг геномной библиотеки на наличие микросатсллитных последовательностей.
3.2. Приготовление меченых зондов.
3.3. Гибридизация.
3.4. Получение радиоавтографов.
3.5 Выделение плазмидной ДНК.
3.6 Обработка плазмидной ДНК рестрикционными эндонуклеазами.
3.7 Электрофоретическое фракционирование фрагментов ДНК.
3.8 Перенос ДНК на мембрану.
3.9. Секвеиированис рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащей
м и кросатс лл итные i юслсдовател ыюсти.
4.Постановка локусспецифнчсскон полимеразной пенной реакции.
4.1 Подбор праймеров.
4.2 Подбор условий для амплификации.
4.2.1 Электрофоретическое фракционирование фрагментов ДНК. ,
4.2.2. Перепое фрагментов ДНК на нейлоновую мембрану .
4.3 Полимеразная ценная реакция.
5. Электрофорез в полиакриламидном геле ПААГ.
5.1 риготовлеяие 8 ПААГ.
5.2 Подготовка стекол.
5.3 Вертикальный электрофорез.
6. Элюция и секвеиированис ДНК.
6.1 Элюция ДНК из агарозною геля на ватман.
6.2. Элюция ДНК из полиакриламидного геля.
6.3 Переклонирование продукта ПЦР в плазмиду.
6.3.1 рК реакция.
6.3.2. Лигирование.
6.3.3 Трансформация.
6.3.4 Выделение трансформированных клеток.
6.4 Секвенированис и анализ продуктов.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Изучение структурной организации и полиморфизма мнкросателлн г
содержащих локусов у .iixi и двуполых родительских видов . i iг i и .vii.
1. Получение и молекулярная характеристика рекомбинантных клонов партеновида . ixi содержащих микросатсллитные кластеры.
1.2 Анализ популяций . ixi по локусам , 8, 1, 2 и 4.
1.3 Анализ внутри и межпопуляцнонного полиморфизма локусов , 8 и 6 у двуполых родительских видов, i ii и .vii.
1.4 Первичная структура ДНК аллельных вариантов локусов , 8 и у .ixi.
1.5 Первичная структура ДНК локуса у двуполых родительских видов . i ii и .vii.
2. Выявление и молекулярная характеристика v мутаций в ,, содержащих локусов у партеногснетических потомков .iixi.
2.1 Монолокусный анализ анализ локусов 1 и на панели семенных образцов . i.
2.2 Монолокусный анализ локусов и на панели семейных образцов .iixi.
2.3 Молекулярная характеристика мутантных аллелей у потомков .iixi.
3. Сравнительный анализ содержащих локусов 1 и у различных двуполых видов рода vi.
3.1.1 олиморфизм двуполых видов рода vi по локусу .
3.2. Полиморфизм двуполых видов рода vi по локусу .
3.3 Секвенированис аллельных вариантов локуса 1 у ряда представителей двуполых видов рода vi.
3.4 Секвенированис аллельных вариантов локуса у ряда представителей двуполых видов рода vi.
3.5. Структурные взаимоотношения аллельных вариантов локуса 1 у разных видов рода vi
3.6. Структурные взаимоотношения аллельных вариантов локуса у разных видов рода vi
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
БЛАГОДАРНОСТИ
УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ
ионообменная нитроцсллюлозная мембрана с диэтиламиновой функциональной группой
xii i дезоксинуклеотидтрифосфат фильтр стеклянный фильтр Ватман градуировка С
I Ix I длинные диспергированные повторы i длинные концевые повторы
буфер солевой буфер для элюции, в состав которого входят , ЭД ГА, рис i i Полимеразная Цепная Реакция ПЦР
i Додецил сульфат натрия
I I короткие диспергированные повторы
i i одноступенчатая модель микросателлитных мутаций
i i i однонуклсотидный полиморфизм
i i i натрий цитратный буферный раствор
ТХУ Трихлоруксусная кислота
V Vi вариабельные тандемные повторы
ААГ полиакриламидный гель
ГВЕбуфер ТрисЭДТАборатный буфер ТБЭбуфер
ТЕбуфер ТрисЭДГА буфер ТЭбуфер
ТЕМЕД ,,, тетраметилэтилендиамин
ЭДТА Динатриевая соль эгиледиаминтетрауксусной кислоты ii i
ВВЕДЕНИЕ


Для большинства однополых позвоночных установлено, что они возникают в результате межвидовой гибридизации изменяющей цитологические механизмы их репродукции , Vi, . Их популяции состоят из самок, размножающихся клонально. Кавказские скальные ящерицы рода vi ранее принадлежащие к роду i. Закавказье и соседних районах Турции восемнадцатью бисексуальными и семью партеногенетическими видами. Все паргеногенетические виды рода vi имеют гибридное происхождение, характеризуется диплоидным набором хромосом, невысоким уровнем гетерозиготюсти аллозимных локусов . ДНК i . Ранее проведенные ДНКфингерпринтные исследования Кавказских скальных ящериц рода vi выявили значительный уровень популяционной неоднородности особей но отдельным микросателлитным маркерам ДНК Кап и др. Токарская и др. Популяционной разнообразие однополых видов принято объяснять мутациями, множественным гибридным происхождением и возможной незаконной рекомбинацией , , . Однако степень влияния каждого из этих факторов на уровень генетической вариабельности остасгся неясным. Более того, практически нет данных о природе мутаций и их вкладе и в геномное и клональное разнообразие однополых позвоночных. Наиболее простой путь для выявления мутационной составляющей это прямое изучение мутационных событий в родословных, например при сравнении геномов матери и потомков. ДНКфингерпринтный анализ семей иартсногснетических ящериц показал, что в геноме . ДНКфингерпринтных фенотипов у потомков и в популяциях Токарская и др. Однако что лежит в основе наблюдаемых изменений мутации в сайтах рестрикции, изменение длины микросатсллитного кластера или мутации в участках ДНК, прилежащих к микросателлитному кластеру остается неясным. Поэтому необходимо проведение молекулярногенетических исследований индивидуальных микросателлитсодержащих локусов в популяционных и семейных образцах ДНК, что позволит определить структуру аллельных вариантов локусов, молекулярную природу и механизмы возникновения микросателлитных мутаций у клонально размножающихся животных. Цслыо настоящей работы является изучение структурной организации и полиморфизма микросателлитных локусов генома, поиск и характеристика мутаций по этим локусам у партеногенетических ящериц vi ixi и vi i. Выделение и характеристика рекомбинантных клонов, содержащих п О С. СТП микросателлиты из геномной оиблиотски . Молекулярногенетический анализ микросателлитсодержащих локусов у . Я i ii и . Поиск и характеристика сепочо мутаций полиморфных локусов на больших выборках семейных образцов ОмтвехиаИя и А. Молекулярногенетическая характеристика и сравнительный анализ вариабельных микросателлитсодержащих локусов у ряда представителей двуполых видов рода агеу. Впервые однополый вид позвоночных животных был обнаружен в году, Карлом и Лаурой Хуббс. Это была живородящая рыба ii , которую впоследствии назвали Амазонской молли , . На данный момент известно свыше видов однополых позвоночных со всех пяти континентов, которые относятся к родам рыб, амфибий и рептилий Vi, . Некоторые авторы полагают, что их число может быть больше. В целом, количество однополых видов по сравнению с общим числом видов позвоночных достаточно невелико , Vi, . В природе до настоящего времени не обнаружено однополых форм млекопитающих i . Японии впервые удалось получить партеногенетическую мышь, названную . Несмотря на большое число исследований, причины, делающие не возможным партсногснетический способ размножения у млекопитающих, долгое время оставались загадкой вплоть до открытия феномена геномного импринтинга. Было установлено, что в результате дифференциальной экспрессии аллелей импринтированных локусов родительские геномы являются функционально неэквивалентными . В связи с этим, для нормального развития зародыша млекопитающих необходимы оба генома материнский и отцовский, а партеногенез и андрогенез невозможны , Конюхов, Платонов, Копо, . Однополые позвоночные представлены видами, состоящими исключительно из самок. При их размножении не происходит генетической рекомбинации женского и мужского геномов.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.189, запросов: 145