Первичное действие аденовирусного онкогена E1A на JNK/cJUN путь и регуляцию клеточного цикла у трансформантов E1A+E1B-19кДа и E1A+cHa-Ras

Первичное действие аденовирусного онкогена E1A на JNK/cJUN путь и регуляцию клеточного цикла у трансформантов E1A+E1B-19кДа и E1A+cHa-Ras

Автор: Бричкина, Анна Игоревна

Шифр специальности: 03.00.25

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2005

Место защиты: Санкт-Петербург

Количество страниц: 179 с.

Артикул: 2816937

Автор: Бричкина, Анна Игоревна

Стоимость: 250 руб.

1.1. Актуальность проблемы
1.2. Цель и задачи исследования.
ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Общая характеристика фенотипа трансформированных клеток
2.2. Аденовирусный онкоген А структура и клеточные функции.
2.2.1. Мишени белка А регуляторы клеточного цикла
2.2.2. А в регуляции транскрипции на уровне модуляции активности хроматина.
2.2.3. Транскрипционный фактор АР1 как мишень онкобелка А
2.2.4. Цитоплазматические мишени А.
2.2.5. А как опухолевый супрессор
2.2.6. Индукция апоптоза белком А
секвестрирование р.
2.3. Клеточные функции белка Е1ВкДа.
2.4. Функции белка в проведении сигнала и трансформации клеток.
2.5. Регуляция клеточного цикла
2.5.1. Комплексы циклинов с циклинзависимыми киназами как ключевые регуляторы прохождения клетки по циклу
2.5.2. Белки семейства ретинобластомы негативные регуляторы перехода
2.6. Транскрипционный фактор АР1.
2.6.1. Структура и регуляция активности .
2.6.2. в пролиферации.
2.6.3. в трансформации и опухолевой прогрессии клеток.
2.6.4. как регулятор апоптоза.
2.7. Стресс киназы семейства .
2.7.1. Регуляция активности киназ
2.7.2. как регулятор транскрипционного фактора АР1.
2.7.3. Роль в пролиферации и опухолевой профессии.
2.8. Малые ГТФазы семейства .
2.8.1. Роль ГТФаз в реорганизации цитоскелета и трансформации клеток
2.8.2. Роль белков в регуляции транскрипции генов и пролиферации
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
3.1. Клеточные линии и их культивирование, получение стабильных
трансформантов, временные трансфекции.
3.2. Анализ клеточного цикла методом проточной цитофлуориметрии
3.3. Конструирование плазмид
3.4. Иммуноблотинг и иммунопреципитация.
3.5. Анализ киназной активности i vi
3.6. Метаболическое мечение.
3.7. Оценка люциферазной активности для тестирования
4 активации пути.
3.8. Оценка роста клеток в полужидком агаре.
3.9. Оценка апоптотической гибели клеток методом фрагментации ДНК
3 Кривая роста
3 Ядерноцитоплазматическое фракционирование клеток.
3 Оценка активности малой ГТФазы
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. Влияние онкобелка А на активность пути.
4.1.1. Описание эстрадиолиндуцибельных ДНКконструкций, кодирующих онкобелок А
4.1.2. А временно активирует киназу
4 А активирует транскрипционный фактор
за счет активации киназы
4.1.4. А активирует киназу в цитоплазме
4.1.5. Активация пути онкобелком А опосредована
активацией ,7 сигнального каскада.
4.1.6. Анализ функционирования пути у Е1А
экспрессирующих трансформантов
4.2. Исследование способности Аэкспрессирующих трансформантов регулировать прохождение по клеточному циклу
4.2.1. Характеристика Аэкспрессирующих трансформантов.
4.2.2. Анализ содержания циклинов и киназ фазы
и формирование их комплексов после облучения
4.2.3. Анализ функционирования ингибитора у Iэкспрессирующих трансформантов после облучения.
4.2.4. Анализ активности циклинзависимых киназ после облучения
4.2.5. Роль фосфорилирования в регуляции функционирования циклинзависимых киназ у Е1 Атрансформантов
4.2.6. Состояние фосфорилирования белков семейства у Атрансформантов.
ГЛВАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Список работ, опубликованных по теме диссертации
Список цитированной литературы


Главный хранитель целостности генома клеток является опухолевый супрессор р, который в ответ на повреждение ДНК вызывает блок клеточного цикла с целью репарации ДНК или апоптоз в случае нерепарабельных повреждений. Функционирование рпути часто нарушается в клетках за счет мутаций гена р, что повышает их генетическую нестабильность и дает возможность появлению новых мутаций. В отличие от предыдущих описанных признаков, которые тестируются на культурах клеток, этот и последующие признаки присущи уже опухолевым клеткам, которые проявляют их в организме. Данный признак является необходимым условием для дальнейшего роста опухолевого узелка в организме до размеров большой опухоли. Т.е. Проблема изучения механизмов опухолевой трансформации клеток связана с поиском информативных модельных систем, использование которых позволило бы выяснить общие принципы и молекулярные основы неопластической трансформации. Перспективной моделью для изучения молекулярных механизмов канцерогенеза являются эмбриональные клетки грызунов, которые приобретают способность к неограниченному размножению i vi или иммортализуются введением одного онкогена и морфологически трансформируются введением пары комплементирующих онкогенов , . Известно, что для полной трансформации первичных клеток грызунов необходима комплементация онкогенов ядерного типа, продукты которых локализуются в ядре стус, , , I, V, Е7 и как правило являются транскрипционными факторами или в случае вирусных онкогенов действуют на уровне модуляции транскрипции генов, и цитоплазматического с, , и вирусные В, V, Е6, с локализацией онкопродуктов в цитоплазме, которые действуют на уровне изменения верхних компонентов цепи передачи сигнала в клетке или в случае вирусных онкобелков взаимодействуют с опухолевым супрессором р, подавляя апоптоз. Для клеток человека процесс трансформации, как недавно было показано, требует введения третьего гена гена теломеразы, что позволяет получать трансформанты с высокой частотой и стабильностью . К числу иммортализующих генов относятся ранние районы ДНКсодержащих вирусов V, , ivi, vi, которые кодируют онкобелки, стимулирующие клеточную пролиферацию. Эволюционно механизм трансформации клеток вирусами связан с необходимостью производить максимально большое количество вирусных потомков, что достигается путем стимуляции репликации ДНК и соответственно пролиферации вирусинфицированных клеток. Стоит отметить, что иммортализующие гены ДНКсодержащих вирусов V, Е1А,Е7 обладают консервативным сходством структуры, что проявляется в общих механизмах их действия на пролиферацию клеток. В нашей работе мы использовали аденовирусный ген А, подробная характеристика которому будет дана в следующей главе. Аденовирусный онкоген А структура и клеточные функции. Аденовирусы широко распространены среди людей и животных, являясь возбудителями респираторных, кишечных и глазных заболеваний. Поэтому громкой сенсацией стало открытие, сделанное Трентиным, Ябе и Тейлором i, , об онкогенности некоторых аденовирусов человека тип , которые вызывали опухоли при введении новорожденным хомячкам. Однако впоследствии было обнаружено, что высокоонкогенные аденовирусы тип , к которым не относится используемый в нашей работе аденовирус 5го типа, способны индуцировать опухоли только у грызунов, но не у приматов и человека. Причина такой селективности аденовирусов до сих пор не ясна. Исследования трансформирующего действия аденовирусов привело к открытию экспрессирующегося с вирусного генома онкобелка А, который стал неким молекулярным зондом для выяснения многих фундаментальных аспектов регуляции экспрессии генов, контроля за клеточным циклом и индукции апоптоза и как следствие трансформации клеток. Аденовирусный геном содержит 4 типа районов, объединенные в группы по принципу времени экспрессии и функциям , рис. В группу ранних генов входят гены А и В раннего района , которые должны экспрессироваться в первую очередь после проникновения вируса в клетку, причем сначала экспрессируется ген Е1А ген немедленной экспрессии, стимулируя репликативную программу инфицированной клетки, необходимую для транскрипции остальных аденовирусных генов, включая В. Рис. Схема ранних районов генома аденовируса типа 5 человека Ас.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.193, запросов: 145