Влияние регуляторных факторов на морфологические, иммунофенотипические, функциональные особенности и дифференцировку стромальных клеток-предшественников и иммунокомпетентных клеток

Влияние регуляторных факторов на морфологические, иммунофенотипические, функциональные особенности и дифференцировку стромальных клеток-предшественников и иммунокомпетентных клеток

Автор: Лебединская, Ольга Витальевна

Шифр специальности: 03.00.25

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2007

Место защиты: Санкт-Петербург

Количество страниц: 0 с. 476 ил.

Артикул: 4305911

Автор: Лебединская, Ольга Витальевна

Стоимость: 250 руб.

Оглавление
Введение
Гла ва I. Обзор л итерато ры
1. Стромальные клеткипредшественники КОКф морфофункциональные особенности, взаимодействие с гемопоэтическими клетками, факторы, обеспечивающие их регуляцию
1.1. Стромальные клеткипредшественники методы выделения, культивирования, функциональные свойства, морфология.
1.2. Гетерогенность популяции стромальных клетокпредшественников, мезенхимальные стволовые клетки
1.3. Возможности миграции строматьных клетокпрсдшественников, клоногенные клетки, находящиеся в биологических жидкостях, детерминированные и индуцибельные остеогенные предшественники
1.4. Регуляция пролиферативных и клоногенных свойства стромальных клетокпредшественников i vi
1.5. Возрастные изменения, влияние ряда факторов и патологических состояний на остеогенез и стромальные клеткипредшественники кроветворных и лимфоидных органов
1.6. Создание кроветворного и лимфоидного микроокружения одна
из основных функций стромальных клетокпредшественников. факторы, обеспечивающие взаимодействие клеток
2. Экстракорпоральная генерация и активация эффекторов врожденного иммунитета, характеристика используемых регуляторных факторов, применение генерированных клеток в медицине
2.1. Натуральные и лимфокинактивированные киллеры ЛАК, использование ЛАКклеток в адоптивной иммунотерапии
2.2. Натуральные киллеры Тклетки НКТ, иммунофенотипическая
и функциональная характеристика, активация, значение в практической медицине
2.3. Антигенпрезентирующие дендритные клетки генерация и индукция созревания, морфофункциональные характеристики, применение ДКвакции в иммунотерапии
2.4. Бактериальные препараты и пектины растительного происхождения регуляторы клеточных и молекулярных реакций, использование
в исследованиях и медицине
2.5. Человеческий афетопротеин регулятор гомеостаза в физиологических условиях и при развитии патологических процессов, возможности его применения в клинике
Глава II. Материал и методы исследования
1 Экспериментальные животные.
1.1. Используемые лабораторные животные
1.2. Характеристика мышей с имплантированной пораженных опухолью.
2. Объекты и материалы исследования.
2.1. Пробы, взятые у здоровых мужчин добровольцев
2.2. Пробы, взятые у онкологических больных
2.3. Характеристика больных острым миелоидным лейкозом и доноров, получавших нейпоген
3. Используемые препараты.
4. Методы исследования
4.1. Культивирование стромальных клетокпредшественников КОКф
4.2. Методы исследования возрастных изменений численности КОКф
и эффективности их клонирования
4.3. Исследование влияния различных факторов на КОКф кроветворных
и лимфоидных органов.
4.4. Методы выделения и культивирования мононуклеарных лейкоцитов
4.5. Методы экстракорпоральной генерации активированных лейкоцитов.
4.6. Метод иммуномагнитной сепарации активированных мононуклеарных лейкоцитов .
4.7. Методы исследования функциональных характеристик активированных мононуклеарных лейкоцитов
4.8. Генерация дендритных клеток и индукция их созревания
4.9. Исследование функциональных характеристик генерированных дендритных клеток
4 Исследование иммунофенотипа клеток методом проточной цитофлюорометрии анализ .
4 Исследование цитокинового профиля.
4 Цитологические, морфогистохимические, иммуноцитохимическис
методы исследования и анализ полученных данных.
4 Электронномикроскопические исследования с использованием цитохимической электронной микроскопии
4 Методы статистической обработки экспериментальных данных
Глава III.Собственные исследования.
1. Стромальные клеткипредшественники КОКф костного мозга, селезнки и тимуса лабораторных животных, изменения
их функциональных и морфологических характеристик в процессе онтогенеза и под действием регуляторных факторов
1.1. Зависимость свойств стромальных клегокпредшественников костного
мозга от условий культивирования в первичных культурах.
1.2. Потребность пассажных фибробластов в громбоцитарных ростовых факторах
1.3. Морфология колоний, формируемых костномозговыми стромальными клеткамипредшественниками костного мозга и селезнки
1.4. Иммунофенотип клеток первичных монослойных культур костного мозга
и селезнки
1.5. Изменения численности и эффективности клонирования стромальных клетокпредшественников костного мозга, тимуса и селезнки лабораторных животных в процессе онтогенеза
1.6. Действие афетопротеина на пролиферативные и клоногенные свойства КОКф костного мозга, селезнки мышей, пассажные фибробласты костного мозга человека и их дифференцировку
1.7. Влияние бактериальных антигенов на стромальные клеткипредшественники костного мозга мышей.
2. Особенности стромальных клетокпредшественников.
выявленные в крови и серозных жидкостях лабораторных животных
2.1. Стромальные клеткипредшественники, находящиеся в крови.
их клоногенные свойства, морфология формируемых ими колоний
2.2. Клоногенные клетки плеврального транссудатак, их численность, эффективность клонирования и морфология колоний
в первичных культурах
2.3. Клоногенные клетки перикардиального транссудата крыс.
их пролиферативные свойства в зависимости от условий культивирования и морфология образованных ими колоний
2.4. Стромальныс клсткипрсдшественники перитонеального транссудата крыс, их функциональные особенности, зависимые от возраста и условий культивирования, морфологическая характеристика формируемых колоний.
2.5. Колониеобразующие клетки перитонеального экссудата крыс.
их пролиферативные и клопогонные особенности.
2.6. Сравнительная характеристика детерминированных стромальных
клетокпредшественников костного мозга и индуцибельных остеогенных
клеток, выявленных в перитонеальном транссудате и экссудате крыс
3. Характеристика активированных x viv мононуклеарных лейкоцитов периферической крови здоровых доноров и экссудатов онкологических больных
3.1. Лимфокинактивированные киллеры периферической крови человека, фуикциовальные. иммунофенотипические и морфологические характеристики на различных этапах культивирования.
3.2. Мононуклеарные лейкоциты периферической крови человека, активированные препаратом профеталь. нх иммунофенотип, морфология
и функциональная активность .
3.3. Дифференцировка мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека под действием препарата профеталь. результаты положительной селекции клеток методом иммуномагнитной сепарации
3.4. Функциональная активность мононуклеарных клеток периферической
крови человека, инкубируемых с пектинами растительного происхождения .
3.5. Влияние пектинов растительного происхождения на клеточный состав.
морфогистохнмию и структуру лимфоидных органов лабораторных
З.б. Генерацпя ЛАК клеток из мононуклеарных лейкоцитов плеврального экссудата онкологических больных, их морфология, функциональная активность и иммунофенотип
4. Клеточный состав, морфологические и функциональные особенности популяции мононуклеарных лейкоцитов печени онкологических больных, возможности их экстракорпоральной активации.
4.1. Морфологическая и иммуноцитохимическая характеристика лейкоцитарных инфильтратов различных участков печени больных с метастатическим опухолевым процессом
4.2. Мононуклеарные клетки печени онкологических больных, морфологические и фенотипические характеристики, локализация и дифференцировка НКТклеток
4.3. Генерация ЛАК из НКТклеток печени онкологических больных, сравнительный анализ их иммунофенотипических и функциональных свойств
4 4. Морфология и нммуноцитохимия лейкоцитарных инфильтратов печени
мышей с привитой опухолью
4.5. Натуральные киллеры печени мышей, пораженных опухолевым процессом,
методы выделения, генерация НКТклеток. морфология и иммунофенотип
5. Антигенпрезентирующис дендритные клетки, источники и способы их экстракорпоральной генерации, индукция созревания, морфогистохимическая и электронномикроскопическая характеристики, иммунофенотип и функциональные особенности.
5.1. Дендритные клетки, генерированные из моноцитов периферической крови здоровых доноров с использованием , I4 и ,
их морфология, иммунофенотии и функциональные свойства.
5.2. Дендритные клетки, генерированные x viv из мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека с помощью цитокинов и препарата профеталь, их морфогистохимия, иммунофенотип
и функциональные свойства
5.3. Морфологические, иммунофенотипические и функциональные характеристики дендритных клеток, генерированных i vi
из прогениторных клеток эмбриональной печени мышей.
5.4. Дендритные клетки, полученные из клетокпредшественников костного мозга мышей с применением различных индукторов созревания, их морфология, иммунофенотип и функциональные свойства
5.5. Дендритные клетки, генерированные из бластов больных острым миелоидным лейкозом, их морфологические, фенотипические
и функциональные свойства Заключение.
ВЫВОДЫ ц.,,.щи.
Библиографический список
Список сокращении
Введение
Актуальность


Количество ядерных клеток в трансплантатах костного мозга, взятого от старых животных мышей, крыс на снижено по сравнению с трансплантатами от молодых животных 4. Возрастное снижение числа стромальных клоногенных клетокпредшественников КОКф касается всей популяции клеток в равной степени . Обнаружено, что возрастное снижение численности КОКф у мышей линии быстростареющих животных наступает значительно раньше в возрасте 9 месяцев, в то время как у мышей мыши с нормальной скоростью старения только в возрастной группе месяцев. Кроме того, количество ядерных клеток в трансплантатах костного мозга быстростареющих мышей увеличивается более чем в 2 раза, если реципиентами служили мыши с нормальным темпом старения . И, наконец, костный мозг, взятый от старых и молодых животных, выдерживал одинаковое количество ретрансплатаций, когда реципиентом служили животные одного, причем молодого, возраста 5 месяцев. На основании полученных данных было высказано предположение, что в то время как собственно стромальная ткань претерпевает существенные возрастные изменения, весьма значительное воздействие на нее оказывает весь организм в целом . В работе Ю. Ф. Горской с соавг. КОКф в транспланататах селезенки под контролем организма, или в одной возрастной группе реципиентов она определяется численностью присутствующих в трансплантатах стромальных клетокпредшественников, организующих трансплантат, то есть имеется ли линейная зависимость между массой трансплантированной селезеночной ткани и количеством КОКф в трансплантатах 2 как меняется численность КОКф в гетеротопных трансплантатах селезенки старых С и молодых М доноров при перекрестной посадке селезеночной ткани старым и молодым реципиентам. Результаты опытов показали, что, если объем пересаженной ткани селезенки мышей СВА достаточно мал и 1 органа, численность стромальных клетокпредшественников КОКф в гетеротопных транспланататах селезенки в пределах одной возрастной группы реципиентов определяется численностью стволовых стромальных клеток, организующих трансплантат. Содержание КОКф в гетеротопных трансплантатах селезенки старых С и молодых М мышей при перекрестной подсадке старым и молодым животным претерпевает существенные изменения. А именно, в трансплантатах группы МС по сравнению с группой ММ содержание КОКф падает почти в 1,5 раза, в трансплантатах группы С численность КОКф минимальна по сравнению со всеми остальными группами, однако в трансплантатах же группы СМ эта величина поднимается почти в 8 раз, превышая уровень контроля. Как уже указывалось, для образования кроветворных территорий на новом месте достаточно переноса лишь одного определенного типа клеток, а именно, стромальных клетокпредшественников. Однако в целом организация микроокружения это, повидимому, кооперативный процесс, который обеспечивается взаимодействующими между собой стромальными механоцитами, кроветворными клетками и клетками эндотелия . В этой связи представляет значительный интерес один из генетических дефектов остеогенеза, демонстрирующий тесную связь между гемопоэзом и костной тканью, а именно врожденный остеопетроз. Остеопетроз заболевание, сопровождающееся частыми переломами костей, недоразвитием костномозговых полостей, резкой анемией и отставанием роста. У мышей и крыс оно сопровождается еще и быстрой к 4ой неделе жизни атрофией тимуса. Выяснилось, что в основе костной патологии при остеопетрозе лежит недостаточность резорбции костной ткани, при этом важной особенностью является отсутствие остеокластов. Больные остеопетрозом крысы характеризуются выраженными дефектами иммунной системы, которые выявляются раньше, чем изменения в скелете. Например, оказывается сниженной способность Тлимфоцитов к бласттрансформации в присутствии митогенов 4. Оказалось, что остеопетроз излечивается в результате трансплантации костномозговых клеток от нормальных доноров 4. Введенные клетки колонизируют тимус, селезенку, а затем и костный мозг, к этому времени восстанавливаются костномозговые полости в костях, увеличивается масса тимуса, и все нарушения иммунитета устраняются. Для излечения необходимо, чтобы у больного остеопетрозом был сохранен собственный тимус.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.193, запросов: 145