Эмбриологические и генетические аспекты создания и размножения сельскохозяйственных животных с новыми фенотипическими свойствами

Эмбриологические и генетические аспекты создания и размножения сельскохозяйственных животных с новыми фенотипическими свойствами

Автор: Сураева, Наталья Михайловна

Шифр специальности: 03.00.23

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2005

Место защиты: Родники

Количество страниц: 270 с. ил.

Артикул: 2883325

Автор: Сураева, Наталья Михайловна

Стоимость: 250 руб.

1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗРАБОТКИ МЕТОДА ОПЛОДОТВОРЕНИЯ ЯЙЦЕКЛЕТОК КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ВНЕ ОРГАНИЗМА .
2.1.1. Извлечение ооцитов.
2.1.2. Созревание вне организма ооцитов домашнего скота.
2.1.3. Оплодотворение ооцитов вне организма.
2.1.3.1. Капацитация сперматозоидов
2.1.3.2. Оплодотворение в яйцеводах другого вида
2.1.3.3. Оплодотворение i vi
2.1.4. Влияние факторов культуральной среды на развитие оплодотворенных i vi ооцитов крупного рогатого скота до стадии морулы и бластоцисты
2.1.5. Пересадка полученных i vi эмбрионов крупного рогатого скота
2.2. МЕТАБОЛИЗМ РАННИХ ЭМБРИОНОВ ЖИВОТНЫХ.
2.3. ХРАНЕНИЕ И КРИОКОНСЕРВАЦИЯ ООЦИТОВ И ЭМБРИОНОВ ЖИВОТНЫХ
2.4. МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСГЕННЫХ ЖИВОТНЫХ
2.4.1. Методы введения клонированных генов в геном животных.
2.4.1.1. Использование ретровирусов в качестве векторов.
2.4.1.2. Трансфекция эмбриональных стволовых клеток и получение трансгенных химер
2.4.1.3. Микроинъекция ДНК в пронуклеус зиготы
2.4.1.4. Трансфекция бластодермальных и первичных половых клеток кур
2.4.1.5. Пересадка ядер из трансфецированных соматических клеток
2.4.1.6. Использование сперматозоидов в качестве переносчиков чужеродной ДНК
2.4.2. Особенности интеграции чужеродных генов в организме животных.
2.4.3. Экспрессия чужеродных генов у трансгенных животных.
2.4.3.1. Экспрессия клонированных генов, интегрированных с помощью ретровирусных векторов
2.4.3.2. Регуляция экспрессии трансгена, интегрированного в составе нсвирусных плазмид
2.4.3.2.1. Использование тканеспецифичных промоторов.
2.4.3.2.2. Использование промоторов, активирующих экспрессию в ответ на внешние стимулы
2.5. ТРАНСГЕННЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ ЖИВОТНЫЕ
2.5.1. Экспрессия трансгена в кровь.
2.5.2. Экспрессия трансгенов в молоко.
2.5.3. Трансгенные животные устойчивые к инфекционным заболеваниям
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Биологический материал и содержание подопытных животных
3.2. Отбор проб тканей у подопытных кроликов. ИЮ
3.2. Выделение и культивирование половых клеток и эмбрионов.
3.2.1. Получение зигот кролика
3.2.2. Извлечение ооцитов крупного рогатого скота, их созревание оплодотворение и
культивирование ранних эмбрионов i vi.
3.2.4 Выделение и культивирование гонадных примордиальных и бластодермальных зародышевых клеток птиц
3.3. Гистохимические методы окрашивания эмбриональных клеток
3.3.1. Окрашивание эмбрионов кролика и крупного рогатого скота лакмоидом.
3.3.2. ШИКреакция для выявления гликогена в гонадных ППК.
3.3.3. Окраска эмбриональных клеток кур по РомановскомуЛейшману.
3.4. Метаболическое мечение общих белков эмбрионов крупного рогатого скота
3.5. Замораживание и трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота.
3.6. Микроинъекция и трансфекция чужеродных генов в эмбриональные клетки животных
3.6.1. Микроинъекция чужеродного гена в зиготы кроликов и трансплантация инъецированных эмбрионов реципиенту.
3.6.2. Микроинъекция чужеродного гена в зиготы крупного рогатого скота.
3.6.3. Трансфекция бластодермальных и гонадных клеток геном галактозидазы с помощью липофскции
3.6.4. Инъекция раствора гена или трансфецированных бластодермальных клеток в
эмбрионы кур.
3.7. Идентификация интеграции инъецированных генов с помощью блотанализа у кроликов.
3.8. Методы определения экспрессии встроенного гена
3.8.1. Радиоиммунологический метод определения гормона роста человека
3.8.2. Определение экзогенной галаюгозндазы в клетках эмбриона кур.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4.1. РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ СОЗРЕВАНИЯ ООЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ИХ ОПЛОДОТВОРЕНИЯ И РАННИХ СТАДИЙ
РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ ВНЕ ОРГАНИЗМА.
4.1.1 .Созревание ооцитов
4.1.1.1. Влияние добавок в культуральную среду для созревания ооцитов в виде сыворотки крови различных видов животных
4.1.1.2. Влияние продолжительности созревания ооцитов крупного рогатого скота на их дальнейшее развитие после оплодотворения i vi.
4.1.1.3. Влияние индивидуальных различий коровдоноров на эффективность развития полученных от них ооцитов после оплодотворения в условиях i vi
4.1.2. Оплодотворение ооцитов вне организма животного
4.1.2.1. Влияние продолжительности процедуры отбора подвижных сперматозоидов на эффективность оплодотворения яйцеклеток вне организма.
4.1.3. Культивирование полученных i vi эмбрионов крупного рогатого скота.
4.1.3.1. Культивирование вне организма эмбрионов крупного рогатого скота до стадии бластоцисты с инактивированной и неинактивированной сывороткой кроби крупного рогатого скота
4.1.3.2. Влияние сыворотки крови астральной коровы на развитие эмбрионов крупного рогатого скота вне организма
4.1.3.3. Использование монослоя эпителиальных клеток яйцевода кролика для культивирования эмбрионов крупного рогатого скота.
4.1.4. Изучение метаболизма белка в ранних эмбрионах крупного рогатого скота.
4.2. РАЗРАБОТКА МЕТОДА ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ОПЛОДОТВОРЯЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ СПЕРМЫ БЫКА В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ
4.2.1. Изучение индивидуальных различий в оплодотворяющей способности спермы быков в условиях i vi.
4.2.2. Изучение взаимосвязи между показателями оплодотворяющей способности спермы быков по результатам искусственного осеменения и концентрацией подвижных спермиев в процессе их отбора i vi
4.3.1. Получение телят после пересадки полученных вне организма эмбрионов крупного рогатого скота
4.3.2. Криоконссрвация полученных вне организма эмбрионов крупного рогатого скота
4.4.1. Получение трансгенных кроликов, в геном которых интегрирован ген гормона роста человека
4.4.2. Интеграция гена асРНК против аденовируса человека у трансгенных кроликов
4.5. РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ИНЪЕКЦИИ ЧУЖЕРОДНЫХ ГЕНОВ В ОПЛОДОТВОРЕННЫЕ ВНЕ ОРГАНИЗМА ООЦИТЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
4.5.1. Влияние манипуляционных воздействий на развитие вне организма микрошгьецированных чужеродным геном зигот крупного рогатого скота до стадии морулы и бластоцисты.
4.5.2. Изучение прижнвляемости оплодотворенных i vi и микрошгьецированных эмбрионов крупного рогатого скота геном асРНК против БЛВ после пересадки
реципиентам.
4.6. РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ИНЪЕКЦИИ ЧУЖЕРОДНЫХ ГЕНОВ В ПЕРВИЧНЫЕ ПОЛОВЫЕ КЛЕТКИ КУР
4.6.1. Трансфекция i vi культуры гонадных ППК и инъекция трансфецированных клеток в 2,5дневные эмбрионы
4.5.2. Трансфекция i vi культуры бластодермальных клеток.
5. ОБСУЖДЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ.
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. В В ЕДЕНИЕ
Актуальность


Остальные факторы также оказывали позитивный эффект на созревание ооцитов й их дальнейшее развитие после оплодотворения в отдельности или в комбинации друг с другом или гонадотропными гормонами. Однако, скорее всего это еще не полный перечень ростовых факторов, а значит и невозможно представить себе ясную картину всех регуляторных взаимодействий, которые имеют место в растущем фолликуле или в культуральной среде с созревающим ооциткумулюсным комплексом 9,0,8. Во время роста ооцит увеличивается в размерах от мкм в примордиальных фолликулах до 0 мкм в предовуляторных. В примордиальных и первичных фолликулах ооцит взаимодействует с гранулезными клетками, вероятно, посредством эндоцитоза 0. Ооциты из вторичных фолликулов образуют так называемые тонкие соединения с соматическими клетками, через которые осуществляется липидный и белковый обмен. Были выявлены следующие закономерности между диаметром ооцитов крупного рогатого скота, полученными после аспирации последних из яичников с мясокомбината, и способностью половых клеток к дальнейшему развитию , , . Среди ооцитов менее 0 мкм и мкм в диаметре, и , соответственно, возобновили мейоз при i vi культивировании, среди ооцитов мкм и более 0 мкм и , соответственно, достигли метафазы II. Процесс дробления и формирования бластоцист также возрастал с увеличением диаметра ооцита среди ооцитов менее 0, , и более 0 мкм 7, , и и , , и , соответственно. Согласно ультраструктурным данным растущий ооцит, прежде всего, характеризуется непрерывным накоплением липидов, уменьшением аппарата Гольджи, появлением многочисленных рибосом вокруг хромосом. Изменяется и клеточная стенка ооцита, в ней также накапливаются липиды . Синтез РНК в ооцитах начинаетвозрастать уже в первичных фолликулах и заканчивается в ооцитах с диаметром около 0 мкм. Очевидно, за это время накапливается достаточное количество транскриптов, т. Уже в х годах стало ясно, что эпидидимальные или эякулированные сперматозоиды должны быть подвергнуты дополнительному созреванию перед оплодотворением , , . Этот процесс был назван капацитацией. Капацитация включает серию изменений на молекулярном уровне, и они остаются до настоящего времени не до конца изученными , . В процессе капацитации в сперматозоиде происходит так называемая акросомная реакция 9. Она включает процесс везикуляции между внешней акросомной мембраной и подлежащей плазменной мембраной, и в результате этого освобождение акросомных ферментов акросин, гиалуронидаза, арисульфатаза. В дополнение к этому внутренняя акросомная мембрана становится новой внешней мембраной вокруг головки сперматозоида 1. Чтобы проникнуть в ооцит, сперматозоид должен преодолеть несколько клеточных и внеклеточных слоев кумулюсный матрикс, корона радиата и зона пеллюцида. Предполагается активная роль акросомных ферментов во время процесса проникновения 9, 4, 1, но точная роль этих ферментов остается пока невыясненной. Рассматривая вопросы капацитации, акросомной реакции и проникновения спермиев в зону пеллюциды, необходимо иметь в виду, что, повидимому, существуют видоспецифические механизмы, которые осложняют наши представления о картине оплодотворения. Многие исследователи сошлись во мнении на существование следующих событий, рассматриваемых как ряд этапов процесса капацитации. Место капацитации сперматозоидов в женском половом тракте не является определенным . С учетом того, что сперматозоиды в течение длительного периода времени должны оставаться в нижней части истмуса перед овуляцией у коровы и овцы 2, наиболее вероятно, что капацитация завершается в яйцеводе 8. Для крупного рогатого скота показано, что акросомная реакция у спермиев почти исключительно происходит в ампуле яйцевода и только во время, или непосредственно после овуляции. Установлено, также, что содержимое яйцевода от овцы но не в лютеиновую фазу полового цикла вызывало акросомную реакцию и капацитацию спермиев быка , 8. Повидимому, капацитация скорее всего связана с околоовуляционными процессами, чем с конечным дозреванием, требующим от 1 до 5 часов в женском половом тракте.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.186, запросов: 145