Промышленные технологии производства тест-систем для диагностики инфекционных болезней свиней

Промышленные технологии производства тест-систем для диагностики инфекционных болезней свиней

Автор: Клюкина, Валентина Ивановна

Шифр специальности: 03.00.23

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2002

Место защиты: Щелково

Количество страниц: 326 с. ил

Артикул: 2313326

Автор: Клюкина, Валентина Ивановна

Стоимость: 250 руб.

Промышленные технологии производства тест-систем для диагностики инфекционных болезней свиней  Промышленные технологии производства тест-систем для диагностики инфекционных болезней свиней 

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Свинья, как объект научноисследовательской деятельности человека
1.1.2. Иммуноглобулины сыворотки крови и молозива свиней
1.2. Выделение и очистка ф свиньи.
1.2.1. Выделение из сыворотки свиньи
1.2.2. Очистка из сыворотки свиньи
1.2.3. Очистка из молозива свиньи.
1.3. Кролики и овцы продуценты антисвиных сывороток
1.3.1. Иммуноаффинная очистка антител.
1.3.1. Количественное определение свиньи
1.4. Средства и методы серолотческой диагностики инфекционных болезней свиней.
1.4.1. Диагностическая ценность серологических исследований
1.4.2. Методы обнаружения возбудителя.
1.4.3. Серологические методы выявления антител
1.4.4. Иммуноферментный анализ ИФА
1.4.4.1. Иммуноферментный анализ антител
1.4.4.2. Иммуноферментный анализ антигенов
1.4.4.3. Множественноантигенные варианты ИФА
1.4.4.4. Стандартизация иммуноферментного анализа
1.4.4.5. Получение иммуноферментных конъюгатов
1.4.4.6. Интерпретация результатов ИФА
1.4.4.7. ИФА в диагностике инфекционных болезней свиней
1.5. Вирусный гастроэнтерит свиней.
1.5.1. Морфология, состав и основные свойства вируса ТГЭ
свиней.
Иммунитет и меры профилактики при ТГЭ свиней
Лабораторная диагностика ТГЭ свиней.
Болезнь Ауески свиней.
Морфология, состав и основные свойства вируса Б А.
Иммунитет и специфическая профилактика БА.
Методы лабораторной диагностики БА свиней.
Рожа свиней.
Характеристика и основные свойства возбудителя
Диагноз и дифференциальный диагноз
Профилактика и меры борьбы с рожей свиней.
Хламидиозы животных.
Характеристика и основные свойства возбудителя хлами
диозов животных.
Иммунитет и меры специфической профилактики хлами
диозов
Хламидиоз свиней
Методы лабораторной диагностики хламидиозов.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Приготовление антиглобулиновых и изотипспецифических
иммунопероксидазных конъюгатов свиньи.
Очистка 1, и 1А свиньи
Получение РаЬ2фрагментов 1в свиньи
Получение антивидовых сывороток.
Очистка антивидовых антител.
Получение антиглобулиновых и изотипспецифических иммунопероксидазных конъюгатов
Получение компонентов набора для выявления вируса ТГЭ и антител к нему методом ИФА, испытание опытных серий
Получение компонентов набора для выявления антител к вирусу болезни Ауески методом ИФА, испытание опытных серий .
Получение компонентов набора для выявления антител к бактериям рожи свиней методом ИФА, испытание опытных серий
Получение компонентов набора для серологической диагностики хламидиоза свиней методом ИФА, испытание
опытных серий.
Конструирование тестсистемы ИФА для одновременного выявления антител к вирусам ТГЭ, КЧС, БА, бактериям рожи и хламидиям у свиней методом ИФА, испытания
опытных серий.
Приготовление ФИТЦ конъюгатов.
Получение контрольных препаратов
Исследуемый материал
Концентрирование антигенов и антител
Иммунологические реакции
Биохимические методы анализа
Статистическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
Приготовление антиглобулиновых и изотипспецифических иммунопероксидазных конъюгатов
Очистка ,1М, I свиньи
Очистка сыворотки крови свиньи от липидов.
Очистка из сыворотки крови свиньи.
Получение фрагментов 1в свиньи.
Очистка 1М из сыворотки крови свиньи.
Очистка 1А из молозива свиньи
Очистка из желтка яиц кур.
Получение антивидовых сывороток.
Очистка антивидовых антител.
Получение антиглобулинового иммунопероксидазного
конъюгата.
Получение изотипспецифических иммунопероксидазных конъюгатов
3.2. Количественное иммуноферментное определение I, I
и I свиньи.
3.3. Приготовление ФИТЦ конъюгатов.
3.3.1. Приготовление ФИТЦантиI свиньи конъюгатов
3.3.2. При готовлен ие ФИТЦанти КЧС конъюгатов
3.3.3. Приготовление ФИТЦантирожистых конъюгатов
3.4. Разработка технологии получения компонентов набора для
выявления вируса ТГЭ и а1ггител к нему методом ИФА и испытания опытных серий
3.4.1. Очистка, концентрирование вируса ТГЭ и получение антигена для ИФА.
3.4.2. Разработка тестсистемы ИФА для выявления антител к
3.4.3. Апробация тестсистемы для выявления антител к ВТГЭ
методом ИФА
3.4.4. Изучение изотипспецифического иммунного ответа при
ТГЭ свиней.
3.4.5. Разработка тестсистемы ИФА для индикации антигенов
вируса ТГЭ.
3.4.6. Апробация тестнабора ИФА для диагностики ТГЭ свиней
3.5. Разработка технологии получения компонентов набора для
выявления антител к вирусу болезни Ауески методом ИФА, испытание опытных серий.
3.5.1. Очистка и концентрирование вируса БА и получение антигена для ИФА.
3.5.2. Ограбогка оптимальных условий постановки тестсистемы
ИФА для выявления антител к ВБА, испытания опытных серий набора.
3.6. Разработка технологии получения компонентов и тест
системы ИФА для выявления специфических антител к роже свиней
3.6.1. Получение антигена бактерий рожи дтя ИФА
3.6.2. Отработка оптимальных условий постановки тестсистемы
ИФА для выявления антител к роже свиней
3.6.3. Применение ИФА при серологическом контроле рожи
свиней
3.7. Разработка технологии получения компонентов набора для
выявления хламндийных антител в сыворотках крови свиней методом ИФА, испытание опытных серий.
3.7.1. Очистка, концентрирование хламидий и получение антигена для ИФА
3.7.2. Отработка оптимальных условий постановки тестсистемы
ИФА для выявления хламндийных антител.
3.7.3. Состав набора ИФА для выявления хламндийных антител
в сыворотках крови сх животных.
3.7.4. Изучение динамики накопления изотипспецифических
хламндийных антител.
3.7.5. Оценка диагностической значимости определения изотин
снецифических антител при хламидиозе свиней.
3.8. Разработка комплексного набора для одновременного выявления антител к вирусам ТГЭ, КЧС, БА, бактериям рожи
и хламидиям свиней методом ИФА
3.8.1. Конструирование тестпанели ИФА для одновременного
выявления антител к антигенам вирусов КЧС, БА, ТГЭ, бактерий рожи и хламидий в сыворотках свиней
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
5. ВЫВОДЫ.
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АТ антитела АТ антиген
АгИФА антиген для иммуноферментного анализа
ЛТГХ антитела, меченные нерокендазой хрена
АгПХ антиген, меченный перокендазой хрена
АЧС африкансая чума свиней
БА болезнь Ауески
БСА бычий сывороточный альбумин
ВОЗ Всемирная организация здравоохранения
ВБЛ вирус болезни Ауески
ВНЛ вируснейтртизующие антитела
ВТГЭ вирус трансмиссивного гастрозггерита
ВгСЫ бром циан сефароза
ВЭСвсзикулярная экзантема свиней
ВС везику лярный стоматит
ВД вирусная диарея
ГА глютаровый атьдегид
ГХИФА гистохимический иммуноферментный анализ ДСП додецилсульфат натрия ДКРС диарея крупного рогатого скота гликопротсин
ЖОКЭ желточные оболочки куриных эмбрионов
1 иммуноглобулин
иммуноглобулин О
1А иммуноглобулин А
1М иммуноглобулин М
ИРТ инфекционный рииотрахеиг
ИФА иммуноферментный анализ
ИОХ ионообменная хроматография
ИЭМ иммуноэлектроиная микроскопия
кД кнлодальтон
КЧ. кру пный рогатый скот
КЧС классическая чума свиней
КС комплементевязывакмцис антитела
ЛПС липополисахарид
Ь легкие цени
мАТ моноклональные антшела
м.м молекулярная масса
2МЭ 2меркаптоэтанол
МФА метод флюоресцирующих антител
МФЗ метод флюоресцирующих зондов
МПС модифицированное стекло
НЬ тяжелые и легкие цени
Н тяжелая цепь
НМФЛ непрямой метол флюоресцирующих антител
оптические единицы
ОП оптическая платность
ОФД ортофениленднамин
ПААГ полиакриламидный гель
пАТ поликлоналышс антитела
ПЭГ полиэтиленглнколь молекулярной массой дальтон
ПБОпо1раничная болезнь овец
Г3 парагрипп
ПС почка сайги
ИХ пероксидаза из хрена
Г1ЦР полимеразная цепная реакция
ПР реакция пробы рос га
РДП реакция диффузионной преципитации
РГАрсакция гемагглютинации
1 рсашпя латсксагтлютинации
РА реакция агглютинации
РТрегикулярное тельце
РИМ радионммунолоптчсский метод
РИГА реакция непрямой гемагглютинации
реакция нейтрализации
РСК реакция связывания комплемента
РДСК реакция длительного связывания комплемента
РИД реакция иммунодиффузии
РИОЭОФ реакция иммуноэлектроосмофорсза
РКВСресиираторный коронавирус свиней
РМА реакция микроагтлютинации
показатель чистоты от немецкого ii
РСХродамида сульфохлорид
РСФродамида сульфофторид
РРССрепродуктивнорсспираториый синдром свиней
I В культура клеток почек эмбрионов свиньи
СД сульфат декстран
СКсскрсторный компонент
ТГЭ трансмиссивный гастроэнтерит свиней
Т декстран с мол.массой тыс.дальтон
ТФИФА твердофазный иммуноферментиый анализ
УЗлизаты ультразвуковые шзаггы
ФБР фосфатный буферный раствор
ФИТЦ флюорссцин тиоционат
ФИГ флюоресцентная миграция агара
ЭМ электронная микроскопия
ЭТ элементарные тельца
I ШДцитопатическое действие
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Повышенное содержание нестабильных липидосодержащих компонентов является также одной из проблем в производстве лечебнопрофилактических сывороточных препаратов, полученных гипериммунизацией не только свиней, но и овен, волов и других животных, приводящих к образованию хлопьевидного осадка в процессе их хранения и, частично, к снижению активности. Качество диагностических препаратов, приготовленных из таких сывороток, определяется степенью удаления липосодержащих компонентов не обладающих специфической активностью, для чего сыворотки выдерживают в течение месяцев при температуре 2С, что, однако, не обеспечивает полное удаление липидов и стабилизацию физикохимических и иммунобиологических свойств сывороток. ПЭГ различной молекулярной массой. I в сравнении с обезжиренной сывороткой. В.Н. РДП, РСК, РИГА. Все вышесказанное делает проблему удаления липидов из сыворотки крови свиньи весьма актуальной. Кленина Н. В. отмечала, что применение органических растворителей, таких как эфир, этанол, хлороформ вызывает частичную денатурацию сывороточных белков и требует низких температур, что делает процесс делипидации сывороток трудоемким и малоэффективным. Дя очистки от липосодержащих примесей сыворотки подвергают фракционированию ЭГ в 5 и более концентрации, термокоагуляции, с последующим отстоем, или комбинацией осаждения ПЭГ термокоагуляция. Каждый из используемых приемов в разной степени очищает сыворотки от липидов, альфа, беттаглобулинов и альбумина, но не приводит к максимальной очистке сывороточных препаратов от липосодержащих веществ. Гихоненко Т. Н. 8 отметил преимущество использования полимеров, в растворах которых липиды и липопротеиды обладают наименьшей растворимостью, а Простяков А. П. 9 и другие исследователи, изучали возможности использования ПЭГ м. Д для очистки сывороток крови свиней, овец, ослов, мулов и КРС от липидных веществ, с последующим применением их для практических целей. I свиней, установил, что беггалипонротеины не адсорбируются на инообменниках и контаминируют препараты I. СД0 сульфатдекстрана0 и 1 М раствора СаСЬ для предварительного удаления липопротеидов, но, несмотря на эффективность предлагаемого способа, сообщений о применении СД 0 СаСЬ для очистки от липидов сывороток крови других животных не достаточно. В практике препаративного выделения , очистку I свиней проводят из обогащенных этими белками фракций, полученных с помощью насыщении сульфата аммония 4, 5 или ПЭГ м. Д 0, которые не вызывают денатурацию сывороточных белков . Чистый I из нативной сыворотки можно выделить хроматографией на ДЭАЭссфадексе А или ДЭАЭцсллюлозс, который при низкой ионной силе буферного раствора и соответствующем элюируется в первую очередь. ДЭАЕ с использованием градиентного элюирования получил чистый препарат I, но с малым выходом. Т. . ОАЕ сефадскса А в мМ имидазольном буфере, так как он задерживает бетаглобулины при нейтральных значениях и позволяет получить I свиньи в достаточном количестве. Фссенко И. Д. 3 исследовала возможность разделения I и I методом молекулярноситевого фракционирования цельной сыворотки на сефадексе 0. По данным автора, материал первого пика содержал чистый I, второго чистый I. Батмасов , Бурцев В. А, и АсАбиогслях. С.А. I выделенного ионообменными методами составляет для сывороток крови большинства видов животных, но только для сыворотки свиньи. Препаративное выделение I крайне затруднено изза незначительного содержания его в сыворотке и трудности отделения ею от альфамакроглобулинов, поэтому используют комплекс приемов выделения I из обогащенных этим белком фракций и освобождения от альфа2макроглобулинов гельхроматрафией на различных носителях. I из фракций, очищенных от I, методом ИОХ, гельфилырацией на сефадексе 0 в буфере с солями цинка в больших концентрациях до мгсм5. Боровик Р. В. установил, что от I и бетаглобулинов можно освободиться, по аналогии с I КРС, диализом свиной сыворотки против раствора борной кислоты. Балмасов и др. I обогащенной фракции на ультрагеле АсА, обладающим лучшей селективной характеристикой. Следует отметить, что I обладает сложной четвертичной структурой и его конформация достаточно лабильна. Так при мягком воздействии на I изменениями , повышением ТС, ферментативным расщеплением происходит заметное изменение физикохимических свойств I и, повидимому, биологических.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.194, запросов: 145