Разработка аффинной тест-системы для количественного определения гликозилированного гемоглобина

Разработка аффинной тест-системы для количественного определения гликозилированного гемоглобина

Автор: Сулейманова, Марзия Хажиевна

Шифр специальности: 03.00.23

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2006

Место защиты: Уфа

Количество страниц: 139 с. ил.

Артикул: 3043578

Автор: Сулейманова, Марзия Хажиевна

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Перечень сокращений
Введение
ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ Глава 1. Роль неферментативного гликозилирования протеинов в патогенезе
сахарного диабета.
1.1 .Распространенность и социальная значимость сахарного диабета
1.2. Сосудистые осложнения и диагностические критерии сахарного диабета.
1.3. Гликозилированный гемоглобин, его структура
1.4. Биохимия неферментативного гликозилирования протеинов
1.5. Роль гликозилированных протеинов в патогенезе сахарного диабета.
1.6. Взаимосвязь между нарушениями углеводного обмена и
онкологическими заболеваниями.
1.7. Диагностическое значение определения уровня НЬ Ас.
1.8. Методы ранней диагностики нарушений углеводного обмена.
1.9. Сравнительный анализ методов определения уровня НЬ АС.
Глава 2. Аффинный метод выделения биополимеров
2.1. Принцип аффинной хроматографии.
2.2. Компоненты аффинного сорбента
2.3. Материалы, применяемые в качестве матрицы аффинного
сорбента
2.3.1. Агароза
2.3.2. Поливиниловый спирт
2.3.3. Макропористое стекло.
2.3.4. Полиакриламидный гель
2.4. Активация матрицы аффинного сорбента.
2.5. Спейсеры.
2.6. Лиганды.
2.7. Аффинная модификация биополимеров.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава 3. Материалы и методы исследования
3.1. Реагенты для синтеза аффинного сорбента с иммобилизованной мАФБК
3.2. Реагенты для проведения цветных реакций.
3.3. Реагенты для приготовления буферных растворов.
3.4. Объекты исследования на аффинных сорбентах.
3.5.Приборы, необходимые для работы
3.6. Определение растворов стеклянным электродом
3.7. Определение оптической плотности растворов
3.8. Определение альдегидных групп реактивом Шиффа.
3.9. Определение альдегидных групп реактивом Несслера
3 Цветная реакция с ТНБС натрия
3 Определение оксирановых групп тиосульфатом натрия
3 Определение карбоксильных, гидразидных и аминных групп кислотноосновным титрованием.
3 Статистическая обработка результатов.
РЕЗУЛЬТА ТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 4. Создание аффинных сорбентов с иммобилизованной жгАФБК для количественного определения гликозилированного гемоглобина
4.1. Аффинный сорбент с иммобилизованной ЛАФБК на основе гранулированной агарозы.
4.1.1. Приготовление матрицы аффинного сорбента эпоксиактивацией гранулированной агарозы.
4.1.2. Иммобилизация ЛАФБК на модифицированную агарозную матрицу сорбента
4.2. Аффинный сорбент с иммобилизованной ЛАФБК на основе модифицированного ПААГ
4.2.1. Синтез широкопористого ПААГ в качестве матрицы аффинного сорбента.
4.2.2. Модифицирование ПААГ гидразингидратом.
4.2.3. Активация глутаровым альдегидом гидразидного производного полиакриламидного геля.
4.2.4. Иммобилизация .мАФБК на модифицированный ПААГ
4.2.5. Стабилизация азометиновых связей в аффинном сорбенте с иммобилизованной мАФБК
4.3. Аффинное выделение гликогемоглобина.
4.4. Хроматограмма выделения гликозилированного гемоглобина
4.5. Формула расчета содержания НЬА1С
4.6. Механизм аффинного взаимодействия сорбентов с иммобилизованной.мАФБКс гликозилированным гемоглобином
4.7. Исследование количественной характеристики параметров синтеза аффинного сорбента с иммобилизованной мАФБК на основе модифицированного ПААГ.
4.7.1. Исследование влияния бисметиленакриламида на свойства полиакриламидного геля.
4.7.2. Исследование зависимости изменения емкости сорбента от содержания бора в лиганде
4.7.3. Исследование зависимости соотношений между количеством связавшегося лиганда и концентрацией исходного раствора
4.7.4. Определение рНоптимума буферной системы при иммобилизации м АФБК
4.8. Исследование влияния температуры на сорбционную активность аффинного сорбента на основе ПААГ.
4.9. Исследование изменения емкости сорбента от объема нагрузки .
4 Исследование емкости сорбента при нагрузке гликогемоглобином от изменения буфера.
4 Воспроизводимость результатов определения НЬАс при многократном использовании одной колонки с аффинным сорбентом на основе ПААГ с иммобилизованной лАФБК.
4 Вариабельность показателей определения НЬАщ, многократно проведенных на одной колонке с аффинным сорбентом на основе ПААГ.
4 Исследование воспроизводимости результатов определения НЬАС, полученных при многократном использовании одной колонки с аффинным сорбентом на основе агарозы.
4 Оценка эффективности применения аффинного сорбента на основе макропористого стекла.
Глава 5. Разработка методики количественного определения гликозилированного гемоглобина аффинной тестсистемой
5.1. Техника безопасности при проведении работ по определению гликозилированного гемоглобина.
5.2. Технология приготовления гемолизата крови
5.3. Изготовление миниколонок с аффинным сорбентом
5.4. Приготовление буферных растворов
5.5. Проведение анализа определения содержания НЬАС
5.6. Регистрация и оценка результатов определения НЬАС.
5.7. Регенерация и условия хранения миниколонок с аффинным сорбентом для количественного определения НЬАС
Глава 6. Экспериментальноклинические испытания тестсистемы для количественного определения НЬАС.
6.1. Определение гликемического статуса пациентов поликлиники УНЦ РАН
6.2. Определение НЬАС у больных сахарным диабетом, отягощенных
офтальмологической патологией.
6.2.1. Определение НЬАС аффинной тестсистемой на основе ПААГ с иммобилизованной .мАФБК
6.2.2. Определение НЬАС аффинной тестсистемой на основе модифицированной агарозы с иммобилизованной ,мАФБК
6.3. Определение i аффинной тестсистемой на основе ПААГ у пациентов эндокринологического отделения РДКБ
6.4. Сравнительная характеристика диагностикумов, использованных для определении i
6.5. Исследования гликемического статуса онкобольных методом аффинной хроматографии.
Глава 7. Разработка периодатного метода определения гликозилированного гемоглобина.
7.1. Определение НЬАС методом периодатного окисления с
последующей детекцией альдегидных групп реактивом Несслера
7.2. Определение методом периодатного окисления с
последующей рНметрической детекцией.
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Анализ существующих методов определения показывает, что аффинные методы являются одними из наиболее перспективных и разрабатываемых областей биотехнологии. Цель работы заключалась в создании аффинной тестсистемы на основе высокомолекулярных соединений с иммобилизованной метааминофенилбороновой кислотой для многократного количественного определения гликозилированного гемоглобина. Синтезировать сорбенты с использованием различных материалов в качестве матрицы агарозы, стекла, полиакриламидного геля, с иммобилизованной жАФБК и оценить их эффективность. Определить оптимальные параметры синтеза аффинного сорбента с иммобилизованной ЛАФБК на основе модифицированного полиакриламидного геля. Исследовать влияние температуры на сорбционную активность аффинного сорбента. Разработать методику многократного количественного определения i в крови человека аффинной тестсистемой. Определить степень корреляции уровня гликозилированного гемоглобина с содержание4м глюкозы в крови. Научная новизна. Разработан новый метод иммобилизации ЛАФБК на полиакриламидном сорбенте путем активации матрицы гидразингидратом с последующей обработкой глутаровым альдегидом. Синтезирован новый широкопористый аффинный сорбент с иммобилизованной мАФБК, пригодный ДЛЯ многократного количественного определения НЬАС. Разработана аффинная методика количественного определения НЬАс в микроколоночном исполнении, позволяющая выявлять ранние и латентные формы нарушений углеводного обмена у человека. Разработан метод синтеза широкопористого полиакриламидного аффинного сорбента с иммобилизованной жАФБК путем активации его гидразингидратом с последующей обработкой глутаровым альдегидом. Определены условия получения аффинного сорбента с достаточным содержанием лиганда для выделения гликозилированного гемоглобина. Разработана методика многократного количественного определения НЬА,С. Тестсистема на основе модифицированного ПААГ с иммобилизованной ЛАФБК пригодна для проведения массовых скрининговых исследований и обладает следующими преимуществами 1 высокой специфической емкостью 2 достаточной механической прочностью, необходимой для микроколоночного варианта проведения анализов 3 биологической инертностью 4 воспроизводимостью результатов. Практическая значимость. Аффинный сорбент с иммобилизованной ,иАФБК на основе модифицированного ПААГ может быть использован для контроля эффективности лечения сахарного диабета, в скрининге ранних и латентных форм сахарного диабета. Аффинная тестсистема не уступает зарубежным аналогам ii i НЬА, фирмы i, США, но в то же время экономически более выгодна ввиду того, что каждая микроколонка позволяет произвести определение НЬАС многократно 7 циклов. Внедрение в практику результатов исследований осуществлено в Республиканской клинической больнице, поликлинике УНЦ РАН, Уфимском НИИ глазных болезней, Республиканском онкологическом диспансере. Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на II на и III съездах биохимического общества РАН Пущино, , на симпозиуме Биохимия медицине СанктПетербург, , Пой Всероссийской научной iконференции Интеграция науки и высшего образования в области био и органической химии и механики многофункциональных систем Уфа, , на конференциях биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири Актуальные проблемы прикладной биохимии и биотехнологии Уфа, , биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии Челябинск, , Современные методы диагностики Барнаул, , И. П. Павлов и современные проблемы биологии и медицины Уфа, , Безопасность проблемы прогнозирования, предотвращения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций Уфа, , Биология наука го века Пущино, , Актуальные проблемы технических, естественных и гуманитарных наук Уфа, . Публикации. По материалам диссертации опубликовано работ, в т. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 5 страницах, содержит таблицы, рисунков, 6 схем. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, включающего 5 источника 7 отечественных и 8 зарубежных, приложений на 3 листах.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.197, запросов: 145