Изучение генетического контроля и молекулярных механизмов устойчивости к индуктору окислительного стресса менадиону у цианобактерии Synechocystis sp. штамм РСС 6803

Изучение генетического контроля и молекулярных механизмов устойчивости к индуктору окислительного стресса менадиону у цианобактерии Synechocystis sp. штамм РСС 6803

Автор: Семина, Мария Евгеньевна

Шифр специальности: 03.00.15

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2007

Место защиты: Москва

Количество страниц: 94 с. ил.

Артикул: 3312442

Автор: Семина, Мария Евгеньевна

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1. Механизмы действия ингибиторов хинонного типа.
1.1. Ингибирование электронного транспорта
2. Механизмы защиты от ингибирующего действия хинонов.
2.1. Антиоксидантные системы
2.2. Восстановление хинонов с участием ИАБРНхиноноксидоредуктаз
3. Электронтранспортная цепьтилакоидной мембраны цианобактерий.
3.1. Фотосинтетическая ЭТЦ
3.2. Дыхательная ЭТЦ
3.2.1. Доноры электронов для дыхательной ЭТЦ
3.2.2. ЫАОРНдегидрогеназы
3.2.2.1. дегидрогеназа типа 1 1
3.2.2.2. дегидрогеназа типа 2
3.3. Сукцинатдегидрогеназа
3.4.Комплекс цитохромов 6
3.5. Цитохромоксидазы дыхательной цепи
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Штаммы и плазмиды.
Условия роста.
Трансформация ii i
Трансформация i
Выделение плазмидной ДНК методом кипячения , i,
Выделение хромосомной ДНК из клеток цианобактерий.
Ферментативная обработка ДНК
Электрофорез в агарозном геле.
Элюирование ДНК из агарозного геля.
Полимеразная цепная реакция
Измерение МТТредуктазной активности.
Выделение тилакоидных мембран из клеток i .
Измерение ферментативной активности
ЭПР спектроскопия
блоттгибридизация
ОТПЦР.
Компьютерная обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ.
Дегидрогеназная активность в клетках дикого типа и мутантов
Анализ устойчивости к менадиону клеток дикого типа и мутантов
Конструирование двойных мутантов.
Конструирование рекомбинантной плазмиды
Конструирование рекомбинантной плазмиды 4

Трансформация клеток мутантов 1, , 2 и Ох.
Проверка сегрегации мутаций
Физиологические характеристики двойных мутантов
Анализ устойчивости к менадиону
Ферментативная активность в бесклеточных препаратах дикого типа и
мутанта .
Восстановление Р0 в клетках дикого типа и мутантов
Экспрессия гена .
Изучение функции гена с помощью очищенного белка i.
ОБСУЖДЕНИЕ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Конструирование двойных мутантов. Трансформация клеток мутантов 1, , 2 и Ох. . Экспрессия гена . Изучение функции гена с помощью очищенного белка i. ОБСУЖДЕНИЕ. АТФ АТР аденозинтрифосфат ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота. Т.п. , спектиномицин, устойчивость к снектиномицину, соответственно i i . Хиноны, такие как менадион 2метил1,4нафтохинон и плумбагин 5гидрокси2метил1,4нафтохинон, индуцируют окислительный стресс в клетках аэробных организмов. Ингибирующее действие хинонов обусловлено одноэлектронным восстановлением до семихинонов. Семихинон может взаимодействовать с молекулярным кислородом с регенерацией исходного хинона и образованием супероксида, который индуцирует окислительный стресс , ivi, . При восстановлении хинонов по двухэлектронному механизму образуется нетоксичный гидрохинон i . У фотосинтезирующих организмов менадион может влиять на транспорт электронов, как в фотосинтетической, так и в дыхательной электронтранспортной цепи далее ЭТЦ. Липофильные хиноны с низкими окислительновосстановительными потенциалами, такие как менадион и плумбагин, легко проникают в тилакоидные мембраны цианобактерий и хлоропластов растений, где они могут акцептировать электроны из фотосинтетической цепи на уровне разных компонентов. У цианобактерии i . РСС далее i , дыхательная и фотосинтетическая системы транспорта электронов совмещены в тилакоидной мембране. Общими переносчиками, являются пул пластохинона , комплекс цитохромов и пластоцианин. Главными компонентами дыхательной ЭТЦ являются дегидрогеназный комплекс 1, окисляющий преимущественно и восстанавливающий пул , и цитохромоксидаза, которая восстанавливает кислород до воды. В восстановлении пула пластохинона также принимают участие дегидрогеназный комплекс 2, окисляющий i . , окисляющая сукцинат и функционирующая главным образом в темноте , V, . Фотосинтетическая ЭТЦ содержит два типа реакционных центров фотосистему I ФС1 и фотосистему II ФСИ. ФСН, пул , комплекс ЦИТОХрОМОВ ФС1 приводит к восстановлению . В отсутствие активности ФСН в тилакоидной мембране может осуществляться циклический транспорт электронов вокруг ФС1, в котором участвует дегидрогеназный комплекс 1, окисляющий и возвращающий электроны в фотосинтетическую ЭТЦ через и комплекс цитохромов . В основе противодействия клеток окислительному стрессу лежит активация защитных систем, к которым относится ряд ферментов, таких как супероксиддисмутазы, каталазы и пероксидазы. Кроме того, важную роль в защите клеток как прокариотических, так и эукариотических организмов от ингибирующего действия хинонов играют дегидрогеназы, способные осуществлять двухэлектронное восстановление этих агентов с образованием нетоксичных гидрохинонов i . В клетках млекопитающих обнаружен эффективный механизм защиты от токсического действия хинонов. Цитозольный фермент ЫА0РНхиноноксидоредуктаза диафораза восстанавливает хиноны по двухэлектронному механизму, препятствуя их одноэлектронному восстановлению другими ферментами . i . Функциональный гомолог диафоразы КАОРНхиноноксидоредуктаза, кодируемая геном , был обнаружен у цианобактерии i . РСС Чеснавичене и др. . . У нефотосинтезирующих организмов менадион взаимодействует, главным образом, с дыхательной ЭТЦ. У фотосинтезирующих организмов менадион может акцептировать электроны из фотосинтетической ЭТЦ на уровне ферредоксинЫАЭРоксидоредуктазы, ФС1, ФСН и комплекса цитохромов , iv . Роль дегидрогеназ и оксидаз в устойчивости к менадиону клеток фотосинтезирующих организмов оставалась не ясной. Целью данной работы было выяснение роли генов, кодирующих дегидрогеназы и оксидазы, в контроле устойчивости клеток цианобактерии i к индуктору окислительного стресса менадиону.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.175, запросов: 145