Поиск и структурно-функциональные особенности генов, участвующих в процессе опухолеобразования у человека

Поиск и структурно-функциональные особенности генов, участвующих в процессе опухолеобразования у человека

Автор: Баранова, Анна Вячеславовна

Шифр специальности: 03.00.15

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2004

Место защиты: Москва

Количество страниц: 218 с. ил.

Артикул: 3298238

Автор: Баранова, Анна Вячеславовна

Стоимость: 250 руб.

1. ВВЕДЕНИЕ.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1. Патогенез Вклеточных лимфатических опухолей.
2.1.1. Общая характеристика генетических
повреждений при лимфомах
2.2. Ремоделирование генов I перестройка
генов иммуноглобулинов, соматическая гипермутация
и сдвиг изотипа в норме.
2.2.1. Перестройка генов иммуноглобулинов.
2.2.2. Соматическая гипермутация и события
в герминальном центре.
2.2.3. Сдвиг изотипа
2.3. Хромосомные транслокации с участием
локусов иммуноглобулинов
2.3.1. Хромосомные транслокации, возникающие
в процессе V рекомбинации.
2.3.2. Хромосомные транслокации, возникающие
во время сдвига изотипа.
2.3.3. Значение соматической гипермутации
в лимфомагенезе хромосомные транслокации
и мутации генов вне локусов I.
2.4. Оценка степени зрелости клетокпредшественниц Вклеточных лимфом путем анализа
ремоделирования генов иммуноглобулинов
2.5. Роль антигенной селекции при Вклеточных лимфомах.
Антигенная стимуляция и селекция
2.6. Патогенез отдельных видов лимфом.
2.6.1. Лимфома из клеток мантийной зоны ЛМЗ.
2.6.2. Хронический лимфолейкоз
2.6.3. Лимфомы из клеток центра фолликула.
2.6.3.1.Центрофолликулярная лимфома.
2.6.3.2. Лимфома Беркитта.
2.6.3.3. Вкрупноклеточная лимфома ВККЛ
2.6.4. Лимфоплазмацигоидная лимфома.
2.6.5. Зрелоклеточные лимфомы, возникающие
из клеток памяти
3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Экспериментальные методики.
3.1.1. Рекомбинантные космидные клонотеки.
3.1.1.1. Клонотека I С8 5
3.1.1.2. Клонотека
3.1.2. Клонотека РАС и се гибридизационый скрининг
3.1.3. Создание субклонотски из отдельных
фрагментов отобранных клонов РАС
3.1.4. Рестрикционный анализ ДНК и Саузерн блоттинг.
3.1.5. Приготовление радиоактивно меченых ДНКзондов
3.1.6. Гибридизация панелей космидных клонов и РАСклонов.
3.1.7. Нозернблоттинг
3.1.8. Радиоавтография
3.1.9. ПЦР анализ.
3.1 Выделение космидной, плазмидной ДНК, а также ДНК
РАСклонов из клеток . i и выделение
ДНК из клеток дрожжей.
3.1 Электрофорез фрагментов ДНК в агарозном геле.
3.1 Выделение фрагментов ДНК из агарозных гелей.
3.1 Клонирование фрагментов ДНК.
3.1 Трансформация клеток .i и дрожжей.
3.1 Определение нуклеотидных последовательностей
плазмид и ПЦРпродуктов. .
3.1 Экспрессионная кДНК библиотека для дрожжевой
двугибридной системы.
3.2. Реагенты и оборудование.
3.2.1. Среды, условия хранения и культивирования бактерий
3.2.2. Ферментные препараты
3.2.3. Другие реактивы и расходные материалы
3.3. Программы для компьютерного анализа
4. РЕЗУЛЬТАТЫ.
4.1. Пояснения к выбору стратегий поиска генов, принимающих участие в процессе образования
опухолей у человека.
4.2. Поиск генасупрессора опухолевого роста,
расположенного в районе ц.3.
4.2.1. Поиск минимального участка
хромосомы , утрачиваемого у пациентов с ВХЛЛ.
4.2.2. Первичная характеристика генов ШЛЗД и ШЛШ2, расположенных в составе минимального
утрачиваемого участка хромосомы
4.2.3. Построение космидного контига между
ЭТВмаркерами и хромосомы человека
4.2.4. Составление транскрипционной карты участка между 8Т8маркерами и хромосомы человека
4.2.5. Картирование повторяющихся последовательностей и анализ их распределения в составе референтной
нуклеотидной последовательности.
4.2.6. Получение клонов, содержащих участки геномной ДНК мыши, соответствующие участку, утрачиваемому
у больных ВХЛЛ.
4.2.7. Сравнительный геномный анализ
нуклеотидных последовательностей гомологичных
участков ДНК мыши и человека
4.2.8. Анализ генов ЯРР2, КСШааЗОМЧ и ЕАМА4 потенциальных онкосупрессоров, обнаруженных
в результате построения транскрипционной карта Ф участка генома, утрачиваемого у больных ВХЛЛ
4.2.8.1. Ген 2.
4.2.8.2. Г ен .
4.2.8.3. Ген .
4.2.8.4. Ген .
4.3. Структура генаонкосупрессора I1 и описание
его ближайших гомологов.
4.4. Структура генаонкосупрессора СКАР
4.5. ii скрининг последовательностей нуклеотидов
генома человека, специфически экспрессирующихся в опухолях
4.5.1. Пилотный эксперимент.
4.5.2. Результаты полномасштабного сопоставления
спектров экспрессии нормальных и опухолевых клеток
5. ВЫВОДЫ.
БЛАГОДАРНОСТИ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВККЛ Вкрупноклеточная лимфома
ВХЛЛ Вклсточный хронический лимфолейкоз
ГЦ герминальный центр
лимфома из клеток мантийной зоны
МБКЛ моноклональный Вклеточный лимфоцитоз
ММ множественная миелома
п.н. пар нуклеотидов
ПЦР полимеразная цепная реакция
т.п.н. тысяч пар нуклеотидов
ЭДТА этилендиаминтетраацетат
ВАС искусственная хромосома бактерий
Вклеточный рецептор
V вирус ЭпштейнаБарр
экспрессирующаяся нуклеотидная последовательность
база данных
дезоксинуклеотидтрифосфаты
I флуоресцентная гибридизации i i
потеря гетерозиготности
РАС искусственная хромосома на основе ДНК бактериофага Р
быстрая амплификация концов к ДНК ПЦР
обратная транскрипцияПЦР
додецилсульфат натрия
однонуклеотидный полиморфизм
короткий тандемный повтор
искусственная хромосома дрожжей
АКТУАЛЬНОСТЬ


В данной работе использован метод комьютерного дифференциального дисплея, позволивший описать группу последовательностей человека, экспрессирующихся только или преимущественно в опухолевой ткани. В то же время, комплексные подходы анализа состояния опухолевой клетки обязательно должны дополняться молекулярнобиологическими исследованиями отдельных генов, описанию их связи с конкретными опухолевыми заболеваниями, их функции в нормальной и опухолевой клетке, и, как следствие, точного установления их роли в процессах озлокачествления. В качестве модельного исследования такого типа здесь будет описан процесс поиска и харакетристики генов, расположенных в районе ц. Вклеточном хроническом лимфолейкозе, лимфоме мантийоной зоны и множественной миеломе. Для удобства читателя этот экспериментальный раздел будет предварен литературным обзором, посвященным молекулярным механизмам лимфомагенеза, с одной стороны, суммирующим современное состояние знаний о данном вопросе, а с другой стороны исследующим уровень сложности процессов, приводящих к образованию опухолей у человека. Общие принципы онкогенеза, механизмы активации протоонкогенов и инактивации генов, подавляющих опухолевый рост достаточно широко описаны в современной литературе Vi В, i , . В. i . В рамках этого обзора речь пойдет о различных аспектах патогенеза лимфатических опухолей. В каждом случае лимфатической опухоли клиническая картина и прогноз зависят, прежде всего, от двух факторов тканеспецифического из какой субпопуляции лимфоцитов возникла эта опухоль и молекулярного какие онкогенные события в ней произошли. Эти факторы тесно связаны между собой, поскольку каждый этап созревания лимфоцита происходит в результате запуска специальной генетической программы. Изменения состояния ключевых генов, активирующих или выполняющих программу созревания лимфоцита, а также определяющих его функцию на данном этапе жизненного цикла, могут приводить к развитию опухоли . Как и любой другой онкогенез, лимфомагенез опирается на нормальные механизмы дифференцировки, апоптоза и клеточного цикла. Цепь событий, приводящих к образованию лимфатической опухоли включает в себя несколько ключевых звеньев предраспологающие факторы, первичные онкогенные события и вторичные онкогенные события. К числу предрасполагающих факторов относятся хроническая антигенная стимуляция . Первичным онкогенным событием, запускающим развитие опухоли, считают генетическое нарушение, выявляемое в большинстве случаев лимфом данного типа, начиная с самых ранних стадий. Примерами первичных онкогенных событий являются транслокация 8 2 при лимфоме Беркитта . Vi . Патогенез отдельных видов лимфом будет рассмотрен в сопоставлении с гентическими программами реализованными в их нормальных клеткахпредшественниках Влимфоцитах, находящихся на разных этапах созревания. Генетические нарушения при лимфомах весьма специфичны. Общая нестабильность генома, проявляющаяся в накоплении многочисленных хромосомных аберраций и характерная для многих типов эпителиальных опухолей i . В. . Как и в большинстве солидных опухолей человека, основные повреждения генов при лимфомах можно подразделить на две крупные категории активация протоонкогенов и инактивация геновсупрессоров опухолевого роста. В лимфомах инактивация генов, подавляющих опухолевый рост, происходит посредством тех же механизмов, что и в других опухолях человека. Для развития онкогенного события как правило требуется инактивация обоих копий генасупрессора. Обычно такая инактивация происходит в результате делеции одной из копий гена и мутации в другой, иногда одна из копий гена отключается с помощью метилирования его промоторной области. Чаще всего поражается генсупрессор ТР, кодирующий белок р, являющийся стражем генома . Среди других часто повреждаемых генов стоит отметить I4, кодирующий ингибитор циклинзависимых киназ р i . Помимо изменений упомянутых геновсупрессоров опухолевого роста, в лимфатических опухолях нередко наблюдаются специфические делеции, возможно, содержащие еще не идентифицированные генысупрессоры i . Чаще всего встречаются делеции длинного плеча 6 и хромосом i .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.204, запросов: 145