Исследование роли протеинкиназы Pho85p в регуляции метаболизма дрожжей Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris

Исследование роли протеинкиназы Pho85p в регуляции метаболизма дрожжей Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris

Автор: Попова, Юлия Георгиевна

Количество страниц: 155 с. ил

Артикул: 2296607

Автор: Попова, Юлия Георгиевна

Шифр специальности: 03.00.15

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2002

Место защиты: Санкт-Петербург

Стоимость: 250 руб.

Исследование роли протеинкиназы Pho85p в регуляции метаболизма дрожжей Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris  Исследование роли протеинкиназы Pho85p в регуляции метаболизма дрожжей Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris 

Содержание.
Введение.
Глава I. Циюшнзависимые протеинкиназы в регуляции клеточного цикла
и метаболизма у эукариот Обзор литературы.
1. Введение.
1.1. Фосфорилирование как способ модификации активности транскрипционных факторов.
2. Структура и функции протеинкиназ
3. Регуляция активности
3.1. Первый этап активации взаимодействие с циклинами
3.2. САК ivi i взаимодействует с протеинкиназным комплексом и активирует
3.3. Тирозиновая протеинкиназа ингибирует активность .
3.4. Действие фосфатаз семейства восстанавливает активность
3.5. Белки СЮ ингибируют активность
3.6. Влияние белков на активность
4. Семейство дрожжей .vii
4.1. Роль в регуляции стадий клеточного цикла.
4.2. i фосфорилирует Сконцевой домен большой субъединицы РНКполимеразы II
4.3. регулирует активность протеинкиназ
4.4. 3 в составе комплекса холоэнзима РНКполимеразы II регулирует транскрипцию различных генов.
4.5. Общие свойства и
5. Роль и циклинов семейства i в регуляции клеточного цикла и метаболизма .vii.
5.1. Участие и 2 в регуляции стадии i клеточного цикла.
5.2. Влияние на протеолиз i.
5.3. Участие 2 в регуляции реакции клетки на воздействие а
фактора
5.4. Роль 9 в регуляции перехода от стадии М к стадии i клеточного цикла
5.5. и циклины подсемейства i 1,2 участвуют в регуляции морфогенеза.
5.6. Функции и циклинов Рср, i Юр, и в регуляции накопления гликогена
5.7. репрессирует стрессиндуцируемые гены
5.8. Влияние на стабильность белка 4.
6. Участие в метаболизме фосфата.
6.1. Структурные гены кислых фосфатаз.
6.2. Протеинкиназный комплекс регулирует синтез рКФ.
6.3. Позитивные регуляторы экспрессии гена РН.
6.4. Фосфорилирование 4.
6.5. Белок ингибирует активность .
6.6. Модель регуляции экспрессии гена РН в зависимости от концентрации неорганического фосфата в среде
7. Влияние генов РНО на другие пути метаболизма и наследование органелл
7.1. Общие элементы в регуляции биосинтеза метионина и фосфата.
7.2. Взаимодействие генов РНО и гена 1 в процессе поддержания роста клеток при высокой температуре
7.3. Влияние мутаций в генах РНО на наследование вакуолей.
Глава П. Материалы и методы.
1. Основные обозначения.
2. Основные штаммы и условия их культивирования
2.1. Штаммы
2.2. Условия культивирования штаммов.
3. Методы
3.1. Трансформация дрожжей с помощью .
3.2. Трансформация бактерий с помощью МпСЬ.
3.3. Выделение хромосомной ДНК из дрожжевых клеток.
3.4. Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции
3.5. Электрофорез фрагментов ДНК.
3.6. Лигирование фрагментов ДНК
3.7. Выделение плазмидной ДНК из клеток .i.
3.8. Выделение фрагментов ДНК из агарозных гелей.
3.9. ПЦР с праймерами к гену РН5.
3 Качественное определение активности репрессибельной кислой фосфатазы
3 Определение активности ргалактозидазы в жидкой среде
3 Определение запасов гликогена
3 Получение мутантов с помощью УФизлучения
3 Анализ случайной выборки аскоспор
Глава Ш. Результаты. Исследование новых фенотипических проявлений
мутаций в гене РН5.
1. Изучение участия протеинкиназы в катаболизме пролина
1.1. Фенотипическая характеристика роста мутантов на средах, содержащих разные источники азота
1.2. Генетический анализ признака мутантов
1.3 Изучение влияния мутаций на транспорт и катаболизм
пролина.
1.4. Секвенирование мутаций 3,
1.5. Влияние мутации 4 на рост мутантов на среде с пролином
1.6. Анализ промоторных областей генов 1 и 2 катаболизма пролина.
2. Участие в репрессии гена
2.1. Изучение влияния мутации на экспрессию .
2.2. Выяснение влияния мутации 4 на экспрессию .
2.3. Анализ последовательности промоторной области гена .
3. Изучение наследования признаков дыхательная некомпетентность и термочувствительность мутантов
3.1. Рост мутантов на разных источниках углерода.
3.2. Генетический анализ признаков , мутантов
3.3 Выяснение митохондриального характера признаков и мутантов .
3.4. Изучение возникновения дыхательной некомпетентности и термочувствительности на фоне отсутствия продукта гена
Глава IV. Идентификация гомолога РН5 у метилотрофных дрожжей
ii i.
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Роль фосфорилирования в регуляции активности факторов транскрипции наиболее подробно изучена на примере белков 1, 4 и 2. В клетках человека, млекопитающих и дрожжей в зависимости от внешних условий фактор 1 1 активирует экспрессию генов, содержащих в промоторной области последовательность . Последовательность 5АЗ обнаружена в промоторах большого числа генов, продукты которых функционируют в разных процессах. Например, у почкующихся дрожжей последовательность находится в промоторах генов, кодирующих структуру белковшаперонов , , 1, 3, 4, гена 1, кодирующего фосфоглицераткиназу, гена I4, продуктом которого является полиубиквитин, гена кодирующего металлотионеин i, , . Шапероны поддерживают нативную конформацию белков, поврежденных при тепловом шоке. Присоединение полиубиквитина к денатурированным белкам, конформация которых уже не подлежит восстановлению, инициирует их протеолиз. Фосфоглицераткиназа является ферментом гликолиза. Металлотионеин участвует в регуляции концентрации ионов меди и кадмия в клетке. Фактор 1 активирует транскрипцию генов , , , 3, 4, , I4, в условиях роста клеток при высокой температуре, недостатке глюкозы или при высокой концентрации ионов кадмия и меди в среде i, , . Активность фактора 1 регулируется на посттрансляционном уровне. Фосфорилирование играет как позитивную, так и негативную роль в регуляции активности 1. Степень фосфорилирования фактора 1 влияет на его активность. ЗОЗ фосфорилирует протеинкиназа 3 i , 7 фосфорилирует x i i. Фосфорилирование данных аминокислот репрессирует активность 1 при нормальной температуре. В условиях теплового шока, когда фактор 1 принимает форму тримера и находится в гиперфосфорилированном состоянии, 1 активирует транскрипцию Xvi , . Функция гилерфосфорилирования ещ не выяснена. Предполагают, что протеинкиназа С РКС млекопитающих участвует в гипсрфосфорилировании 1 , , . При высокой температуре 1 человека локализован в ядре, где накапливается в виде гранул i , . При понижении температуры, после теплового шока происходит инактивация 1. Фосфорилирование так же инактивирует 1. Протеинкиназа 2i i фосфорилирует 3 фактора 1 человека, что приводит к распаду гранул 1. Протеинкиназы фосфорилируют 1 в зависимости от внешних условий. Таким образом, уровень фосфорилирования 1 определяет способность 1 активировать транскрипцию генов i , . Активность белка I4 дрожжей . Белок 4 активирует экспрессию генов 1, 2, 7, , 1, необходимых для усвоения галактозы в качестве источника углерода. Исследование регуляции транскрипции генов катаболизма пролина показало, что, если отсутствует активатор 3, 4 активирует экспрессию генов 1 и 2 в условиях роста клеток на среде с галактозой и аммонием i, i, . При отсутствии галактозы в среде с 4 связан репрессор , и транскрипция генов регулона 1, 2, 7, , МЕИ, оказывается блокированной. При использовании галактозы в качестве источника углерода, белок 3 взаимодействует с галактозой и, связываясь с комплексом 4, вызывает его конформационное изменение, в результате которого 4 взаимодействует с факторами транскрипции. Взаимодействие 4 с белками комплексов ТВР и II определено в экспериментах i vi , . Циклинзависимая протеи нкиназа , входящая в состав медиаторного комплекса холоэнзима РНКполимсразы, фосфорилирует 9 белка 4, что приводит к активации 4. Фосфорилированный 4 инициирует транскрипцию генов , . Белок 2 дрожжей . РН, РНОП, , , генов биосинтеза аденина, гистидина и триптофана 1, 2, 5, 7, 8, I4, 4, гена НО, кодирующего эндонуклеазу, инициирующую переключение типа спаривания дрожжей, гена 1 , i, , , 2 , . Белок 2 активирует транскрипцию этих генов в зависимости от концентрации фосфата в среде , i, i , . Активность белка 2 регулируется фосфорилированием. Протеинкиназа фосфорилирует 0 белка 2 в условиях недостатка фосфата в среде, фосфорилирование изменяет конформацию белка 2 и увеличивает отрицательный заряд его активирующего домена. Фосфорилированный белок 2 активирует транскрипцию генов i , . Таким образом, фосфорилируя белки, регулирующие транскрипцию генов разных путей метаболизма, протеин киназы контролируют реакцию клетки на изменение внешних условий.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.618, запросов: 145