Хромосомные аномалии в эмбриональных стволовых клетках человека hESM01-04

Хромосомные аномалии в эмбриональных стволовых клетках человека hESM01-04

Автор: Прохорович, Мария Александровна

Шифр специальности: 03.00.15

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2009

Место защиты: Новосибирск

Количество страниц: 125 с. ил.

Артикул: 4240953

Автор: Прохорович, Мария Александровна

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Линии ЭСК человека.
1.1.1 Транскриптомныс портреты линий ЭСК
1.1.2 Импринтинг в линиях ЭСК.
1.1.3 Статус X хромосомы в линиях ЭСК.
1.1.4 Стабильность кариотина в линиях ЭСК.
1.2 Культивирование и стабильность кариотипа ЭСК человека
1.2.1 Методы хромосомного анализа ЭСК.
1.2.2 Фидер.
1.2.2.1 Растворимые факторы фидера.
1.2.2.2 Нерастворимый матрикс
1.2.2.3 Тип фидера.
1.2.3 Способы пересева
1.2.3.1 Появление аномалий кариотина ЭСК, культивировавшихся с
помощью ферментативного пересева.
1.2.3.2 Сохранение нормального кариотипа ЭСК, культивировавшихся с
помощью ферментативного пересева.
1.2.3.3 Кариотип ЭСК, культивировавшихся с помощью механического
пересева.
1.2.4 Проблема неопределенности факторов культивирования
1.3 Хромосомная изменчивость в линиях ЭСК человека.
1.3.1 Особенности цитогенетического анализа ЭСК.
1.3.2 Аномалии кариотипа ЭСК
1.3.2.1 Численные хромосомные аномалии.
1.3.2.1.1 Наиболее распространнные численные аномалии хромосом.
1.3.2.1.2 Редкие численные аномалии хромосом
1.3.2.2 Структурные хромосомные аномалии.
1.4 Возможные последствия хромосомных аномалий.
1.4.1 Возможные эффекты численных и структурных хромосомных аномалий
1.4.2 Эффект положения и трхмерная структура ядра как фактор
регуляции генной экспрессии
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Материалы.
2.1.1. Реагенты.
2.1.2. Антитела, использованные для проведения иммуноокрашивания
клеток и криосрезов эмбриоидных телец
2.1.3. Ферменты.
2.1.4. Линии ЭСК
2.2. Методы
2.2.1. Приготовление фидера.
2.2.1.1. Культивирование мьппиных эмбриональных фибробластов
2.2.1.2. Инактивация митотической акгивности мышиных эмбриональных фибробластов.
2.2.1.3. Предварительное культивирование фидера перед использованием
2.2.2. Культивирование ЭСК
2.2.2.1. Культивирование ЭСК
.2.2. Пересев ЭСК
2.2.3. Криоконссрвация и размораживание клеток
2.2.4. Получение эмбриоидных телец
2.2.5. Получение криосрезов и измерение диаметра эмбриоидных телец.
2.2.6. Иммуноокрашивание клеток и криосрсзов эмбриоидных телец
2.2.7. Получение фибробластоподобных производных на основе клеток
, , .
2.2.7.1. Получение сублинии .3.
.1.2. Получение сублиний дифференцированных клеток при
спонтанной дифференцировке ЭСК i vi.
2.2.8. Получение препаратов метафазных хромосом ЭСК.
2.2.9. Получение препаратов метафазных хромосом фибробластоподобных
клеток.
2.2 Дифференциальное окрашивание метафазных хромосом с помощью I
2.2 дифференциальное окрашивание метафазных хромосом
2.2 Сдифференциальное окрашивание метафазных хромосом.
2.2 Приготовление препаратов метафазных хромосом для III
2.2 Микродиссскция.
2 Приготовление игл.
2 Приготовление микропипеток
2 Приготовление покровных стекол
2 Приготовление препаратов метафазных хромосом
2 Микродиссекция метафазных хромосом
2.2 Приготовление ДНКпробы из ВАС клона 4В
2.2 ПЦР с частично вырожденными праймерами.
2.2 Введение метки в ДНК микродиссекционных ДНК библиотек
2.2 Супрессионная гибридизация i i.
2.2 Детекция на цитологических препаратах ДНК проб.
2.2 Микроскопический анализ препаратов после иммуноокрашивания и I
2.2 Получение препаратов для проведения трехмерной гибридизации.
2.2 3 I и иммуноокрашивание
2.2 Лазерная сканирующая микроскопия.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Кариотип клеток и характеристика клеток производных
сублиний, полученных на их основе.
3.1.1. Кариотип клеток и их фибробластоподобных производных.
3.1.1.1. Кариотип клеток
3.1.1.2. Хромосомы дифференцированных клеток, полученных на основе
3.1.2. Особенности сублиний дифференцированных клеток, полученных на основе клеток
3.1.2.1. Особенности культивирования сублиний дифференцированных клеток, полученных на основе 1, и
3.1.2.2. Анализ наличия тканеспецифических маркров в дифференцированных клетках сублиний, полученных на основе 1, и
3.1.3. Характеристика ЭСК, несущих аномальные хромосомы
3.1.3.1. Выделение сублипий ЭСК, несущих аномальные хромосомы
3.1.3.2. Ростовые свойства клеток 8 и 9.
3.1.3.3. Анализ наличия маркров, характерных для плюрипотентных клеток, в клетках I 8 и
3.1.3.4. Особенности получения сублиний дифференцированных клеток на основе 8 и
3.1.3.5. Анализ наличия ткансспецифических маркров в эмбриоидных тельцах и дифференцированных клетках сублиний, полученных на основе 8 и
3.1.3.6. Кариотип дифференцированных клеток, полученных на основе и
3.2. Молекулярноцитогенетический анализ хромосомных аномалий в клетках I и
3.2.1. Анализ аномальной хромосомы в клетках
3.2.2. Анализ аномальных хромосом в клетках
3.3. Сравнительный анализ положения в интерфазном ядре нормальных хромосом и гсс аномальных дериватов
3.3.1. Разработка методов идентификации хромосомных территорий в
интерфазных ядрах ЭСК
3.3.2. Сравнительный анализ локализации хромосом и
3.3.3. Сравнительный анализ положения хромосом 9 и 9.
3.3.3.1. Сравнительный анализ положения хромосом 9 и
3.3.3.2. Сравнительный анализ объма ядер клеток 9 и дифференцированных клеток сублиний, полученных на их основе
3.4. Обсуэюдение
3.4.1. Основные направления изучения стабильности кариотипа ЭСК
3.4.2. Фиксация аномальных хромосом в клеточных популяциях ЭСК. ХР
3.4.3. Особенности хромосом недифференцированных клеток и мете
хромосомного анализа ИИПХ
3.4.4. Хромосомные аномалии, выявленные в клетках ЬЕ8Мг1. и
ЬЕ8Мс1ег9. д
3.4.5. Влияние хромосомных аномалий на общую архитектошшшжку
интерфазного ядра ТТИИЖ
3.4.6. Возможности использования ЭСК, несущих аномальные хромосожвшчы
в качестве экспериментальных моделей 1
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Наиболее распространнные численные аномалии хромосом. Структурные хромосомные аномалии. Возможные последствия хромосомных аномалий. Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Материалы. Реагенты. Ферменты. Приготовление фидера. Инактивация митотической акгивности мышиных эмбриональных фибробластов. Получение криосрезов и измерение диаметра эмбриоидных телец. Получение сублинии . ЭСК i vi. Получение препаратов метафазных хромосом ЭСК. Сдифференциальное окрашивание метафазных хромосом. Микродиссскция. Приготовление игл. ПЦР с частично вырожденными праймерами. Супрессионная гибридизация i i. Детекция на цитологических препаратах ДНК проб. Получение препаратов для проведения трехмерной гибридизации. Лазерная сканирующая микроскопия. Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Кариотип клеток и их фибробластоподобных производных. Ростовые свойства клеток 8 и 9. Сравнительный анализ положения хромосом 9 и 9. Фиксация аномальных хромосом в клеточных популяциях ЭСК. Хромосомные аномалии, выявленные в клетках ЬЕ8Мг1. ЬЕ8Мс1ег9. ЭСК эмбриональные стволовые клетки. Мб тысяча пар нуклеотидов, миллион пар нуклеотидов. В настоящее время возможности практического использования эмбриональных стволовых клеток ЭСК человека привлекают все более пристальное внимание. Все существующие линии ЭСК человека имеют такие общие характеристики как способность к самовоспроизведению, экспрессия специфических маркров, способность к диффсрснцировкс. В то же время появляется вс больше работ, в которых выявляются различия между разными линиями ЭСК. Несомненно, что генетическая нестабильность и связанное с ней изменение паттерна экспрессии генов могут давать вклад как в потенциал дифференцировки линий ЭСК человека, так и в процесс формирования клетками опухолевого фенотипа v i, . Это существенно щраничивает возможности практического применения клеточных технологий на основе ЭСК. В то же время, при условии детального описания перестроенных хромосом, сублинии ЭСК с аномальным кариогипом могут оказаться мощным инструментом для изучения роли конкретных хромосомных районов в поддержании плюрипотентности ЭСК и определении спектра их возможной дифференцировки, а также механизмов формирования ряда патологий, сопровождающих раннее развитие эмбрионов, клетки которых отягощены аналогичными аномалиями. Несмотря на интенсивные исследования в этой области информация в отношении стабильности кариотипа ЭСК человека остается весьма ограниченной и противоречивой. В литературе наряду с данными, свидетельствующими о стабильности кариотипа ЭСК человека при их культивировании i vi, представлены факты появления в кариотипе ЭСК хромосомных аномалий и описаны примеры изменения ряда свойств ЭСК, сопутст вующие таким аномалиям. В настоящее время актуальным является не только детальный анализ хромосомных перестроек и сопутствующих им изменений экспрессии генов, но также и выяснение влияния хромосомных перестроек на общую архитектонику интерфазных ядер ЭСК человека. Результаты исследований, проведенных в последние годы, показали, что трхмерная организация интерфазного ядра является одним из факторов рефляции генной экспрессии Сгешег, Сгешег, . ЭСК человека ii . Полученные в этой работе результаты указывают на то, что архитектоника ядер ЭСК имеет ряд особенностей в сравнении с организацией ядер других типов клеток. В связи с этим исследования локализации и пространственной организации хромосом в ядрах ЭСК человека представляют особый интерес. Целью настоящей работы является определение закономерностей реорганизации кариотипа эмбриональных стволовых клеток человека серии и сопутствующих им изменений в процессе культивирования i vi. ЭСК. Показана возможность сохранения нормального кариотипа эмбриональными стволовыми клетками человека серии при длительном культивировании, что является необходимым условием для получения большого количества этих клеток и их практического использования. Выявлены и детально охарактеризованы аномальные хромосомы, являющиеся производными хромосом 9 и , аналогичные ранее описанным аномалиям у пациентов с рядом патологий.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.200, запросов: 145