Особенности экспрессии рецепторов пролактина в опухолях печени разного клеточного происхождения

Особенности экспрессии рецепторов пролактина в опухолях печени разного клеточного происхождения

Автор: Остроухова, Татьяна Юрьевна

Шифр специальности: 03.00.13

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2008

Место защиты: Москва

Количество страниц: 159 с. ил.

Артикул: 3421094

Автор: Остроухова, Татьяна Юрьевна

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. РОЛЬ ПРОЛАКТИНА И ЕГО РЕЦЕПТОРОВ В РАЗВИТИИ ОПУХОЛЕВЫХ ПРОЦЕССОВ обзор литературы.
1.1. ПРОЛАКТИН И ЕГО ФУНКЦИИ
1.1.1. Общие положения
1.1.2. Секреция пролактина
1.1.3. Функции пролактина .
1.2. РЕЦЕПТ.ОРЫ ПРОЛАКТИНА И РЕАЛИЗАЦИЯ ЕГО ЭФФЕКТОВ.
1.2.1. Особенности строения рецептора пролактина
1.2.2. Строение гена рецептора пролактина и его транскрипция
1.2.3. Сравнительный анализ изоформ рецептора пролактина млекопитающих и механизмы их образования
1.2.4. Механизм проведения сигнала пролактина через собственные рецепторы
1.2.4.1. Активация рецепторов.
1.2.4.2. Передача биологического сигнала внутрь клетки
1.2.4.3. Негативная регуляция запускаемой пролактином внутриклеточной сигнализации.
1.2.4.4. Терминация рецепторного цикла
1.2.4.5. Роль короткой и длинной изоформ РПрл в проведении сигнала
1.2.5. Регуляция экспрессии мРНК рецептора пролактина.
1.2.5.1. Уровень рецепторов пролактина. Регуляция транскрипции
1.2.5.2. Регуляция альтернативного сплайсинга прсмРНК РПрл, соотношения
короткой и длинной изоформ РПрл.
1.3. РОЛЬ ПРОЛАКТИНА В РАЗВИТИИ ОПУХОЛЕЙ
1.3.1. Общая характеристика опухолей и опухолевого процесса.
1.3.2. Аутокринная регуляция роста опухолей различных типов тканей
1.3.3. Особенности экспрессии РПрл в опухолях различных типов тканей
1.4. ДЕЙСТВИЕ ПРОЛАКТИНА НА ПЕЧЕНЬ
1.4.1. Структура и функции печени.
1.4.1.1. Строение печени и сс клеточный состав
1.4.1.2. Физиологические функции печени. Участие различных клеточных элементов в осуществлении этих функций
1.4.1.3. Функции клеток печени при развитии холестаза. Общая характеристика холестаза.
1.4.1.4. Функции клеток печени при развитии опухолей печени.
1.4.1.4.а Характеристика различных типов опухолей печени и их
гистологических особенностей
1.4.1.4.6 Особенности экспрессии некоторых маркеров, а также основные метаболические нарушения в опухолях печени
1.4.1.4.в Особенности экспрессии некоторых сигнальных соединений и
рецепторов в опухолях печени
1.4.2. Механизмы действия пролактина на печень
1.4.2.1. Действие пролактина на гепагоциты
1.4.2.2. Действие пролактина на холангиоциты
1.4.3. Экспрессия РПрл в печени в норме и при различных патологических
состояниях
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ.
2.1.1. Биопробы печени человека.
2.1.2. Животные.
2.1.2.1. Экспериментальные группы.Г.
2.1.2.2. Обоснование контрольной группы.
2.1.3. Штаммы опухолевых клеток.
2.2. МАТЕРИАЛЫ
2.2.1. Реактивы.
2.3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ.
2.3.1. Хирургические операции.
2.3.1.1. Подкожное поддержание штаммов опухолей.
2.3.1.2. Внутри печеночная перевивка штаммов опухолей.
2.3.1.3. Кастрация самцов.
2.3.1.4. Овариэктомия самок.
2.3.2. Приготовление перпаратов клеток и тканей для анализа.
2.3.2.1. Подготовка тканей для иммуногистохимического анализа.
2.3.2.2. Подготовка ткани печени для ПЦРанализа
2.3.2.3. Дифференциальное выделение гепатоцитов и холангиоцитов.
2.3.2.3.1. Общие стадии разделения клеток печени
2.3.2.3.2. Выделение гепатоцитов
2.3.2.3.3. Выделение холангиоцитов
2.3.2.3.4. Проверка качества выделения клеток
2.3.3. Иммуногистохимическая идентификация рецепторов пролактина в срезах печени человека и крысы
2.3.3.1. Приготовление срезов
2.3.3.2. Иммуногистохимическая идентификация рецепторов пролактина.
2.3.4. Полуколичсственное цитофотометрическое определение интенсивности РПрлпозитивного окрашивания.
2.3.4.1. Получение микрофотографий срезов
2.3.4.2. Подбор интенсивности освещения
2.3.4.3. Компьютерный анализ интенсивности РПрлпозитивного окрашивания изображений срезов.
2.3.4.4. Измерения клеточных структур
2.3.4.5. Полу количественный анализ внутриклеточной относительной концентрации РПрл
2.3.4.6. Проверка на нормальность распределения
2.3.5. Выделение РНК из тканей и изолированных клеток
2.3.6. Обработка РНК ДНКазой 1.
2.3.7. Синтез первой цепи кДНК
2.3.8. Полимеразная цепная реакция в реальном времени ПЦРРВ в присутствии интеркалируюшего красителя 1
2.3.9. Полимеразная цепная реакция в реальном времени ПЦРРВ с использованием зондов .
2.3 Полимеразная цепная реакция.
2.3 Определение стабильности экспрессии мРНК Рактина как гена внутреннего контроля.
2 Определение порогового цикла
2 Определение эффективности амплификации.
2 Определение стабильности экспрессии мРНК гена рактина с помощью программы .
2 Обоснование правомерности нормирования уровней экспрессии генов в разных экспериментальных группах по рактину.
2.3 Определение относительного количества мРНК изоформ рецептора пролактина и их соотношения с использованием внутреннего контроля и нормирования при помощи калибратора
2.3 Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ ЧЕЛОВЕКА
3.1. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА В ПЕЧЕНИ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ЖЕЛЧНОКАМЕННОЙ БОЛЕЗНИ И ХОЛЕСТАЗЕ РАЗНОЙ ЭТИОЛОГИИ
3.2. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА В
ПЕЧЕНИ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ВТОРИЧНОМ РАКЕ ПЕЧЕНИ.
3.2.1. Гистологические особенности опухолевых образований и печени человека
при вторичном раке печени.
3.2.2. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в печени человека при
вторичном раке печени.
3.3. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА ПРИ ПЕРВИЧНЫХ ОПУХОЛЯХ ПЕЧЕНИ ЧЕЛОВЕКА
3.3.1. Гистологические особенности опухолевых образований и печени человека
при доброкачественных опухолях печени.
3.3.2. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в доброкачественных опухолях печени.
3.3.3. Гистологические особенности опухолевых образований и печени человека
при гепатоцеллюлярной карциноме.
3.3.4. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в гепатоцеллюлярной карциноме.
3.3.5. Гистологические особенности опухолевых образований и печени человека
при холангиоцеллюлярной карциноме.
3.3.6. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в холангиоцеллюлярной
карциноме.
ГЛАВА 4. АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА В КЛЕТКАХ ПЕЧЕНИ ИНТАКТНЫХ ЖИВОТНЫХ.
4.1. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА В ГЕПАТОЦИТАХ И ХОЛАНГИОЦИТАХ ИНТАКТНЫХ ЖИВОТНЫХ
4.1.1. Экспрессия рецепторов пролактина в гспатоцитах и холангиоцитах интактных крыс
4.2. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ мРНК ИЗОФОРМ РЕЦЕПТОРОВ
ПРОЛАКТИНА И ИХ СООТНОШЕНИЯ.
4.2.1. Экспрессия мРНК изоформ рецепторов пролактина и их соотношения в гепатоцитах и холангиоцитах ингактных крыс
4.2.2. Экспрессия мРНК изоформ рецепторов пролактина и их соотношения и
печени интактных крыс
4.3. ЭКСПРЕССИЯ мРНК ПРОЛАКТИНА В ИЗОЛИРОВАННЫХ
ХОЛАНГИОДИТАХ ИНТАКТНЫХ КРЫС
ГЛАВА 5. АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА В КЛЕТКАХ ГЕПАТОМЫ Н КРЫС
5.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ВНУТРИПЕЧЕНОЧНОГО ТРАНСПЛАНТАТА ГЕПАТОМЫ Н.
5.1.1. Гистологические особенности внутри печеночной опухоли Н.
5.1.2. Особенности экспрессии мРНК основных маркеров печеночных клеток глюкозо6фосфатазы и цитокератина в клетках гепатомы Н.
5.1.3. Особенности экспрессии мРНК пролактина в клетках гепатомы Н.
5.2. ЭКСПРЕССИЯ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА В КЛЕТКАХ ОПУХОЛИ И НАТИВНОЙ ТКАНИ ПРИ ВНУТРИПЕЧЕНОЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕПАТОМЫ Н.
5.2.1. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в клетках гепатомы Н и нативной ткани печени у животных с интактными гонадами.
5.2.2. Особенности экспрессии рецепторовпролактина в клетках гепатомы Н у
гонадоэктомированных животных
5.3. ОСОБЕННОСТИ СООТНОШЕНИЯ мРНК ИЗОФОРМ РЕЦЕПТОРОВ
ПРОЛАКТИНА В КЛЕТКАХ ГЕПАТОМЫ
ГЛАВА 6. АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА В КЛЕТКАХ ХОЛАНГИОЦЕЛЛЮЛЯРНОГО СЛИЗИСТОГО РАКА КРЫСЫ РС1. .
6.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ВНУТРИПЕЧЕНОЧНОГ О ТРАНСЛАНТАТА 1.
6.1.1. Г истологнческие особенности внутри печеночной опухоли РС1.
6.1.2. Особенности экспрессии мРНК основных печеночных маркеров глюкозо
6 фосфатазы и цитокератина в клетках опухоли 1.
6.1.3. Особенности экспрессии мРНК пролактина в клетках опухоли РС1.
6.2. ЭКСПРЕССИЯ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА ВО ВНУТРИПЕЧЕНОЧНЫХ
И ПОДКОЖНЫХ ТРАНСПЛАНТАТАХ РС1
6.2.1. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в клетках опухоли РС
при внутрипеченочной трансплантации
6.2.2. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в клетках холангиокарциномы РС1 при подкожной трансплантации
6.3. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ мРНК ИЗОФОРМ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА И ИХ СООТНОШЕНИЯ В КЛЕТКАХ ОПУХОЛИ РС1
6.4. ЭКСПРЕССИЯ РЕЦЕПТОРОВ ПРОЛАКТИНА В ТКАНИ ПЕЧЕНИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ УДАЛЕННОСТИ ОТ ОЧАГА ОПУХОЛИ РС1
6.4.1. Гистологические особенности окружающей и нативной ткани при внутрипеченочной опухоли РС1.
6.4.2. Особенности экспрессии рецепторов пролактина в печеночной ткани при
внутрипеченочной опухоли РС1.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Проанализировать зависимость от пола экспрессии РПрл во внутрипеченочных трансплантатах Н и РС1. Изучить взаимное влияние клеток опухолей и клеток окружающей ткани на экспрессию и характер компартменталнзации РПрл в ткани печени животногореципиента. Исследовать уровень мРНК РПрл и соотношение ее изоформ в клетках гепатомы и слизистого рака РС1. В результате проведенного исследования установлено, что у человека уровень экспрессии РПрл в первичных опухолях печени разного клеточного происхождения находится на очень высоком уровне. Внутрипеченочные трансплантаты гепатоцеллюлярной карциномы Н и холангиоцеллюлярного рака РС1 крыс, представляющие собой животные модели разных типов рака печени, также характеризуются повышенной экспрессией РПрл, но сравнению с клетками печени интактных животных. Обнаружено, что в клетках внутрипеченочного трансплантата РС1, в отличие от Н, возможна аутокринная регуляция развития опухоли пролактином. Показано, что внутрипеченочные рансплантать холангиоцеллюлярного слизистого рака РС1 характеризуются интенсивной аккумуляцией РПрл в ядрах клеток. Было выявлено также, что характерная для печени половая дифференцировка экспрессии РПрл с преобладанием у самок сохраняется. Н и холангиокарциномы РС1, так и в окружающих и удаленных от опухолей гспатоцитах. Данная тенденция в целом наблюдается и у человека при различных заболеваниях печени. В клетках гепатомы Н при внутрипечепочной трансплантации выявляется классическая для нормальных гепатоцитов гормональная регуляция экспрессии РПрл, позитивно зависимая от эстрогенов, и негативно от андрогенов. Показано, что ткань печени значительно влияет на опухоль в зависимости от ее типа в случае РС1 индуцирует увеличение экспрессии РПрл и аккумуляцию их в ядрах опухолевых клеток, а в опухоли Н у животных обоих полов индуцирует увеличение доли мРНК длинной изоформы РПрл, при сравнении с культурой клеток гепатомы Н. Установлено, что доля мРНК длинной изоформы РПрл растет в клетках внутрипеченочного трансплантата у крыс обоего иола, а в клетках внутрипеченочного трансплантата РС1 только у самцов, но сравнению с печеныо иитактных животных. В проведенной работе наглядно продемонстрирована возможность и важность участия пролактина в патогенезе различных типов заболеваний и опухолей печени человека и крыс установлена половая дифференцировка экспрессии РПрл в опухолях печени показано также взаимовлияния опухоли и ткани печени. Результаты исследования позволяют обосновать новые подходы для зависимой от пола терапии опухолей печени, а также возможности использования признака ядерной аккумуляции РПрл при диагностике холангиокарциномы, и лечения этого заболевания с помощью лекарств на основе прямой ядерной доставки в клетки опухоли. Пролактин Прл вместе с соматотропным гормоном СТГ и плацентарными лактогенами ПЛ образуют одно общее семейство исходно простых одноцепочечных белковопептидных гормонов ряда СТГ. Прл вырабатывается у всех позвоночных животных, и выполняет различные функции, адаптирующие организм к различным физиологическим состояниям i, , , . Формы Прл найденные у различных видов животных, за исключением рыб, состоят из аминокислот и содержат 6 цистеинов, которые образуют три внутримолекулярных дисульфидных мостика Розен, . Ген, кодирующий Прл человека, локализован в 6 хромосоме, имеет длину около т. Синтезируемый предшественник пролактина содержит 7 а. Зрелый пролактин крысы содержит 7 а. Да . Прл может существовать в различных формах, которые представляют собой но т рансляционные модификации основного гормона кДа гликозилированной кДа, редуцированной кДа, димерной, полимерной и других. Разные формы Прл имеют различные свойства и биологическую активность i, , . Исследования вторичной структуры Прл показали, что аминокислотых остатков, входящих в первичную структуру Прл, образуют 4е аспирали 4 аспирали в конформации, а остальные складываются в неорганизованные петлевые структуры . Основным источником пролактина являются ацидофильные клетки передней доли гипофиза маммотрофные, маммосоматотрофные.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.225, запросов: 145