Лиганд-связывающие свойства и субклеточная локализация цитокининовых рецепторов

Лиганд-связывающие свойства и субклеточная локализация цитокининовых рецепторов

Автор: Ломин, Сергей Николаевич

Шифр специальности: 03.00.12

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2008

Место защиты: Москва

Количество страниц: 196 с. ил.

Артикул: 4037824

Автор: Ломин, Сергей Николаевич

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список условных сокращений
Введение
Обзор литературы
1. Цитокинины
1.1 Химическая структура цитокининов
1.2 Функциональная активность цитокининов
1.3 Действие цитокининов на ткани и органы растения
1.4 Действие цитокининов па клеточном уровне
2. Метаболизм цитокининов
2.1 Изопентенилтраисфсразы
2.2 Синтез шрансзеатина
2.3 Активация цитокининов
2.4 Инактивация цитокининов. Образование конъюгатов
2.5 Катаболизм цитокининов. Цитокининоксидазы
3. Транспорт цитокининов
4. Передача цитокининового сигнала
4.1 Двухкомпонентные системы передачи сигнала
4.2 Рецепторы цитокининов
4.3 Трансдукция сигнала
4.3.1 Факторыфосфотрансмиттеры.
4.3.2 Регуляторы ответа Втипа
4.3.3 Транскрипционные факторы
4.4 Гены первичного ответа на цитокинин
4.4.1 Регуляторы ответа Атипа
4.4.2 Другие гены первичного ответа на цитокинин
4.5 Возможное участие эукариотических компонентов в передаче сигнала цитокинина
4.5.1 Фосфолипазы С и
4.5.2 Участие кальция в передаче сигнала
4.5.3 Участие 0 в передаче сигнала
5. Теоретические основы изучения гормонрецепторного взаимодействии
5.1 Теоретические основы определения аффинности и концентрации рецепторов
5.2 Радиолигандный мсгод
5.3 Взаимодействие нескольких лигандов с одним сайтом. Конкурентное связывание
5.4 Более сложные варианты взаимодействия гормона с рецепторами
Материалы и методы
1. Реактивы
2. Модельные системы
2.1 Модельные системы на основе . i
2.2 Модельные системы на основе трансгенного арабидопсиса
2.3 Модельная система на основе амаранта
2.4 Модельная система на основе кукурузы
3. Радиолигандный метод
3.1 Метод анализа связывания гормона с живыми клетками
3.2 Метод анализа связывания гормона с мембранами растительных клеток
4. Анализ состава цитокининов методом тонкослойной хроматографии
5. Анализ активности репортерных генов
5.1 Анализ активности глюкуронидазы флюориметрическим способом
5.2 Анализ активности галактозидазы флюориметрическим способом
5.3 Анализ активности галактозидазы в колониях трансгенных бактерий после индукции цитокининами
6. Выделение мембран растительных клеток
6.1 Выделение микросомалыюй фракции для анализа активности фосфолипаз
6.2 Выделение мембран растительных клеток в водной двухфазной системе
6.3 Определение активности маркерных ферментов растительных мембран
6.3.1 Определение активности НУ АТФазы плазмешеммы
6.3.2 Определение активности антимицин Анечувствительной зависилюй цитохром с редуктазы маркер эидоппазматического ретикулума
6.3.3 Определение активности пирофосфатазы маркера вакуоли
7. Вестернблотинг
8. Нозсрнблотинг
9. Выделение ДНК из растений
9.1 Метод i .,
9.2 СТАВметод
. Выделение РНК из растений
.1 Выделение РНК с ом
. Анализ инсерционных мутантов с помощью
. Биотест по влиянию цитокининов на рост корней
. Фармакологический анализ
.1 Эксперименты с арабидопсисом
.2 Эксперименты с амарантом
. Анализ активности различных типов фосфолипаз i vi
.1 Анализ активности
.2 Анализ активности и у
.3 Анализ активности
Результаты и обсуждение
1. Лигандсвзывающие свойства рецепторов цитокининов
1.1 Способность различных цитокининов активировать ген v. в Е.соИ, экспрессирующей рецепторы 1 и
1.2 Алгоритм исследований по изучению лигандсвязыващих свойств рецепторов
1.3 Лигандная специфичносгь рецепторов арабидопсиса , АНКЗ, АНК
1.3.1 Специфичность связывания трансзеатина рецепторами и АНКЗ
1.3.2 Связывание цитокинина доменам и рецепторов II2, АНКЗ и 4I
1.3.3 Константы диссоциации комплексов рецепторов АНК4СК1, АНКЗ и СИАЭБдоменов АНК2 и АНК4СКЕ1 с транозеатином
1.3.4 Лигандная специфичность связывания рецепторов АНК4СКН1, АНКЗ и СНАЗЕдоменов АНК2 и АИК4СКЕ1 с различным цитокининами, кажущиеся константы связывания
1.3.5 Определение сайга связывания
тидиазурона
1.4 Лигандсвязывающие свойства рецепторов кукурузы , 2,
1.4.1 Константы диссоциации рецепторов , 2, II3 для трансзеатина
1.4.2 Лигандная специфичность связывания рецепторов , 2, 3, кажущиеся константы связывания
1.5 Оценка возможности меболических превращений цитокининов в ходе
1.6 Влияние некоторых физикохимических факторов на лигандсвязывающие свойства рецепторов цитокининов
1.6.1 Влияние температуры на связывание трансзеатина рецепторами и I
1.6.2 Влияние солей одновалентных и двухвалентных катионов на связывание
1.6.3Влияние среды инкубации на связывание меченого трансзеатина и лигандную специфичносгь связывания
1.7 Способность различных цитокининов активировать экспрессию гена первичного ответа в проростках двойных мутантов арабидопсиса по рецепторам цитокининов
2. Субклеточная локализация рецепторов цитокининов
2.1 Анализ связывания меченого цитокинина с различными мембранными фракциями мутанта арабидопсиса 2
2.2 рНзависимость связывания меченого цитокинина мембранными фракциями кукурузьь
2.3 Лигандная специфичность связывания цитокининов с различными мембранными фракциями кукурузы
3. Исследование влияния некоторых компонентов различных сигнальных путей на ранние эффекты цитокининов
3.1 Возможное участие оксида азота
3.2 Возможное участие фосфолипаз и С
3.2.1 Действие ингибиторов фосфолипазы , первичных спиртов и I
3.2.2 Влияние цитокинина на активность различных типов фосфолипаз
3.2.3 Мутанты по фосфолипазам
3.2.4 Возможное участие фосфолипазы С
4. Общее обсуждение
Выводы
Список цитируемой литературы


Согласно современным данным, они могут синтезироваться во всм растении, но главным местом синтеза является корень. Оттуда цитокинины преимущественно в виде рибозидов транспортируются по ксилеме в побег, где оказывают сво действие. Но эти вещества могут действовать и в месте их синтеза. Роль цитокининов в растении исследовали с помощью различных методов, включая экзогенное внесение, изменение эндогенного уровня путем создания трансгенных растений, оценки корреляции эндогенного уровня цитокининов с различными состояниями растения и стадиями его развития Мок Мок, . Цитокинины присутствуют как в высших, так и в низших растениях, например, во мхах изопентениладенин i, , у некоторых пресноводных Vvx i и морских ii ii водорослей Гудвин и Мерсер, и даже у некоторых бактерий и насекомых. Были обнаружены гены синтеза и секреции цитокининов у метил и метанотрофных бактерий различного таксономического и филогенетического происхождения, но здесь цитокинины не выполняют гормональных функций в хозяйском организме Иванова Шепеляковская . У ряда мстилотрофных бактерий сскретируемые цитокинины образуются преимущественно при разрушении тРНК, а не v. Продукция цитокининов данными бактериями, заселяющими поверхность листьев растений, может играть роль во взаимодействии растений и бактерий. Содержание цитокининов меняется на протяжении жизненного цикла растения Оно высоко в прорастающих семенах экзогенный цитокинин способен пробудить покоящиеся почки древесных растений, клубни, семена некоторых видов Полевой, , становится максимальным в генеративных органах в период окончания
цветения, а затем резко падает. Клетки в физиологически активном состоянии содержат больше цитокининов, чем клетки тканей и органов в состоянии покоя. Цитокинины, как и остальные растительные гормоны, полифункциональны. Они относятся к группе гормоновстимуляторов и вовлечены во многие аспекты роста и развития растений, включая деление клеток, инициацию роста побегов, фотоморфогенез и замедление процесса старения тканей Мок Мок, . Цитокинины в сочетании с другими фитогормонами могут влиять на морфогенез растений. В частности, комбинация цитокинииа с ауксином вызывает формирование в каллусе i vi побегов или корней, в зависимости от соотношения гормонов Уэринг, . Если преобладает цитокинин над ауксином, то образуется побеги. Также в культуре клеток этот гормон стимулирует дифференцировку пластид
в хлоропласты и деление клеток. Эти его свойства используют в биотестах по определению цитокининовой активности. Совместно с другим фитогормоном гиббереллином цитокинины влияют на развитие мезофилла листа i v, . Они способствуют увеличению числа клеток на единицу площади листа у сахарной свеклы, массы и площади листа ряда многолетних злаковых трав, усилению лигнификации механических тканей листа Чернядьев, . При удалении кончика корня нарушается рост тканей листа между жилками. Во внутреннем слое столбчатого мезофилла цитокинин вызывает дифференцировку новых мелких жилок и развитие сосудистых связей от боковых почек к проводящим пучкам главного стебля Курсанов, . Цитокинины способствуют формированию хлоропластов, отчасти изза того, что стимулируют синтез хлорофилла, они ускоряют деэтиоляцию побега и предотвращают старение листьев. Также цитокинины снижают ингибирующий эффект дальнего красного света у арабидопсиса i . И этот эффект в некотором роде сходен с действием фитохрома В растений. Цитокинин способствует развитию побеговой апикальной меристемы. В дефицитных по этому гормону растениях, экспрессирующих цитокининоксидазыдегидрогеназы, размер меристемы уменьшался . Похожая ситуация наблюдалась и в мутантах без цитокининовых рецепторов ii . X 1 гомеобокс содержащий белок арабидопсиса ответственен за поддержание клеток побеговой апикальной меристемы в недифференцированном состоянии . Предполагается, что X осуществляет свою работ через контроль баланса гормонов цитокинина и гиббереллина. Он подавляет экспрессию некоторых генов оксидаз . I ii . Цитокинин ингибирует таранскрипциию гена 3 гидроксилазы . В рисе транскрипция 2 и I3 индуцируется Xбслком II .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.207, запросов: 145