Физико-химическая организация цитоскелета и водный обмен озимой пшеницы при действии низкой температуры и абсцизовой кислоты

Физико-химическая организация цитоскелета и водный обмен озимой пшеницы при действии низкой температуры и абсцизовой кислоты

Автор: Олиневич, Ольга Викторовна

Шифр специальности: 03.00.12

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2001

Место защиты: Казань

Количество страниц: 243 с. ил

Артикул: 2310759

Автор: Олиневич, Ольга Викторовна

Стоимость: 250 руб.

Физико-химическая организация цитоскелета и водный обмен озимой пшеницы при действии низкой температуры и абсцизовой кислоты  Физико-химическая организация цитоскелета и водный обмен озимой пшеницы при действии низкой температуры и абсцизовой кислоты 

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Цитоскелет растений интегрирующая и структурно функциональная роль в клетках
1.1.1. Микротрубочки
1.1.2. Микрофиламенты.
1.1.3. Промежуточные филаменты
1.1.4. Цитоскелет как целостная внутриклеточная система.
1.2. Мембранноассоциированный цитоскелет.
. Влияние низких температу р на структурное состояние и стабильность цитоскслета
1.3.1. МТ и МФ растительных клеток при действии низких температур
1.3.2. Механизмы увеличения стабильности основных компонентов цитоскелета к холоду.
1.4. Зависимость состояния и транспорта воды в клетках от цитоскелета.
1.5. АБК как индуктор морозоустойчивости растений.
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Объекты, схема и методика исследований
2.1.1. Условия выращивания растений и схема опытов
2.1.2. Исследование цитоскслетных и фосфорилированных белков
в клетках методом одномерного электрофореза и иммуноблотинга
2.1.3. Метод непрямой иммунофлуоресцептной микроскопии для визуализации тубулинового и актинового цитоскелета в клетках разных органов проростков с использованием воска Стидманса
2.1.3.1. Методика I для визуализации МТ в клетках корней
2.1.3.2. Методика II для визуализации МТ и МФ в клетках корней,
колсоптилсй и листьев.
2.1.4. Методический подход для выявление зависимости водного
обмена от структурного состояния цитоскелета
2.1.5. Приготовление растворов ингибиторов и стабилизаторов цитоскелета.
2.1.6. Методика определения водоудерживающей способности
2.1.7. Измерение биофизических показателен водного обмена.
2.1.8. Изучение проницаемости мембран по выходу электролитов
из тканей.
2.1.9. Оценка морозоустойчивости растений по ЛТ
2.1 Статобработка.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ЗЛ. Иммунохимическое изучение цитоскелегных и фосфорилированных белков в экстрактах листьев и корней проростков разных сортов озимой пшеницы при действии низких температур и АБК
3.1 Л. Иммунохимическое исследование цитоскелетных белков.
3.1.1.1. Иммуноблоты атубулиновых белков.
3.1.1.2. Иммуноблоты Ртубулиновых белков.
3.1.1.3.Иммуноблоты актиновых белков
3.1.1.4. Иммуноблоты ртубулиновых и актиновых белков молодых проростков
3.1.1.5. Иммуноблоты а и Ртубулиновых белков проростков, подвергшихся криострессу
3.1.2. Иммунохимическое исследование фосфорилированных белков.
3.2. Иммунофлуоресцентная визуализация тубулннового и актннового цитоскелета в клетках корней, колсоптилсй и листьев с использованием воска с низкой точкой плавления
3.2.1. Конфокальные изображения тубулинового цитоскелета в интерфазных мсристематических клетках корней разных сортов пшеницы.
3.2.2. Визуализация тубулиновых компонентов в делящихся клетках, разных зонах корней, колеоптилях и листьях проростков различного возраста
3.2.3. Визуализация актиновых МФ в клетках разных зон корней
3.3. И.ммуноцитохимическое исследование влияния АБК и закаливания растений к холоду на содержание, структу ру и стабильность ту булиновых и актиновых компонентов цитоскелета в разных зонах корней
3.3.1. Содержание тубулиновых белков
3.3.2. Содержание тубулиновых белков в обработанных оризалином
корнях
3.3.3. Структура тубулинового цитоскелета ориентация, пространственная локализация, уровень агрегации и
иммунофлуоресценции МТ
3.3.4. Структура к стабильность МТ в обработанных оризалином корнях
3.3.5. Структура актинового цитоскелета ориентация, пространственная локализация, уровень агрегации и
иммунофлуоресценции МФ
3.4. Изучение эффектов последействия АБК на структурное состояние и стабильность тубулиновых компонентов цитоскелета в клетках разных зон корней с использованием метода непрямой мммунофлуорссцснтной микроскопии
3.4.1. Структурная организация МТскелета.
3.4.2. Стабильность МТскелета
3.5. Индуцированные модификаторами цитоскелета
изменения физиологических и биофизических показателей водного обмена растений разных сортов озимой пшеницы при действии
низких температур и АБК
3.5.1. Влияние цитохалазина Б и колхицина на ВС листьев проростков, выращенных в нормальных условиях без закаливания
3.5.2. Эффект пипольфена и осмотического стресса на ВС
листьев, обработанных колхицином и цитохалазином Б.
3.5.3. Действие разных концентраций СаСЬ на ВС листьев,
обработанных колхицином и цитохалазином Б
3.5.4. Влияние колхицина и ДМСО на ВС листьев
незакалнных и холодозакалнных проростков.
3.5.5. Эффект оризалнна на водный обмен незакалнных, закалнных к холоду и обработанных АБК проростков
3.5.5.1. Водоудерживающая способность и времена спинспиновой релаксации Т2 проростков, закаленных к холоду в
течение 3 суток
3.5.5.1.1. ВС листьев
3.5.5.1.2. ВС корней.
3.5.5.1.3. Т2 листьев и корней.
3.5.5.2. ВС листьев и биофизические показатели водного обмена проростков, закалнных к холоду в течение 7 суток
3.5.5.2.1. ВС листьев
3.5.5.2.2. Времена спинспиновой релаксации Т2 и эффективный коэффициент саммодиффузии воды Д, листьев.
3.5.6. Действие ингибиторов цитоскелета на ВС листьев проростков
в условиях криостресса разной силы.
3.6. Вызываемые оризалином изменении проницаемости плазматических мембран клеток незакалнных, закалнных к холоду н обработанных АБК растений
3.6.1. Проницаемость мембран клеток листьев и корней при закаливании растений к холоду в течение 3 суток.
3.6.2. Проницаемость мембран клеток листьев при закаливании растений к холоду в течение 7 суток.
3.7. Оценка морозоустойчивости листьев и корней закаленных к холоду
и обработанных АБК проростков.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
Сокращения
МТ микротрубочки
МФ мнкрофиламенты
ПФ промежуточные филаменты
микротрубочкоассоциированные белки
аквапориновые белки
АДГ антидиуретический гормон
класс актинсвязывающих белков
АБК абспизовая кислота
ЯМР ядерный магнитный резонанс
ЛТопоказатель морозоустойчивости растений
ПЭГ полиэтиленгликоль
ОДА осмотически действующий агент
ДМСО диметилсульфоксид
ВС водоудерживающая способность
Т2 времена спин спиновой релаксации протонов воды
Дэфф эффективный коэффициент самодиффузии воды
ЭП электропроводность
БСА бычий сывороточный альбумин
ФБС фосфатный буфер
СБ стабилизирующий буфер
МТСБ микротрубочко стабилизирующий буфер
ФМСФ фснилметилсульфонилфлуорид
гидроксисукцинимидный эфир малеимидобензоевой кислоты
I толуидиновая соль 5бром4хлор3индолилфосфата
нитро синий хлорид тетразолия
I 4, 6диамино2феннлиндол
I иммуноглобулин
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Расположение МТ в клетках, растущих растяжением, может быть наклонным, поперечным либо продольным , , . Эти структуры могут быстро менять свое пространственное положение и соответственно ориентировать отложение целлюлозных микрофибрилл в ответ на различные стимулы окружающей среды , . В связи с этим некоторые авторы полагают, что одной из основных функций МТ является непосредственное участие их в трансдукции внешних и внутренних сигналов в клетках i . Важная роль в осуществлении этих процессов также принадлежит . V, , . Микрофнламенты МФ, как и МТ, являются основными компонентами цитоскелета всех эукариотических клеток и состоят из актиновых белков. Актиновый цитоскелет растений, наряду с тубулиновым, играет важную роль в организации структуры цитоплазмы и ее функций . Каппучинелли, и деление пластид . По данным И. А.Аршавского и А. Е.Калевича , блокирование функций МФ верапамилом, цитохалазином Б почти полностью исключает начало роста и развития семян многих растений. С применением метода ингибиторного анализа i с сотр. МФ в регулировании проницаемости плазмодесм в мезофильных клетках табака. Установлена роль этих структур в трансмембранном переносе через плазмалемму необходимых веществ, энергии и воды Аршавский, Калсвич, . Во многих работах авторы акцентируют внимание на роли актинового цитоскелета в качестве внутриклеточной сигнальной системы растений i, . Не менее важной функцией МФ является их участие в обменных процессах. Обнаружена связь актина с гликолитическими ферментами в немышечных клетках, изменяющая их конформацию и активность , . Актин обнаружен в составе ядра клетки i . По данным с сотр. Кроме того, актин играет роль инициирующего фактора для РНКполимеразы II . Содержание акгина в клетках достигает от общего количества внутриклеточных белков Браун, Моженок, . МФ имеют одинаковое строение в клетках всех эукариот. Они образованы закрученными друг относительно друга тяжами, состоящими из повторяющихся субъединиц, каждая из которых включает глобулярных молекул актина . МФ называют еще фибриллярным актином Фактин в отличие от мономерной формы глобулярного актина Гактин Браун, Моженок, . Кроме Г и Ф форм актин может существовать в паракристаллической форме Пактина. В клетках Пактин обычно наблюдается при взаимодействии Фактина с актинсвязывающими белками. В ядерном матриксе немышечных клеток актин существует в филаментной форме и тесно связан с РНК Браун, Моженок, . В результате сравнительных исследований было обнаружено, что актин является филогенетически консервативным белком и очень сходен по первичной структуре и по свойствам в различных клетках. На основании полученных данных i, гены актина можно отнести к дисперсным по расположению в хроматине генам. Отсюда вывод о наличии небольшого видового и тканевого полиморфизма у этого белка i . Разные ткани характеризуются присутствием определнных изоформ актина, различающихся по аминокислотной последовательности концевых пептидов Vv, , . В клетках удалось идентифицировать три изоформы актина а, , у. В клетках нативный актин присутствует обычно в форме Гактина. МФ всегда находятся в динамическом равновесии с Гактином, растворенным в цитозоле, причем их регулируемая самосборка на одном конце идет быстрее, чем на другом конце. В последние годы были открыты многочисленные белки, связывающиеся с актином и регулирующие его полимеризацию , . Всего подсчитано, что в процессе полимеризации деполимеризации МФ участвует 6 классов актинсвязывающих белков. Кроме того, 4 класса белков ответственны за соединение актиновых МФ в пучки и образование сетей МФ в клетках, и один класс участвует в образовании связей между актином и плазматической мембраной , . Описано около актинсвязывающих белков, которые регулируются, как правило, вторичными мессенджерами, киназами, биоактивными липидами и фосфолипидами. В растительных клетках ассоциированные с актиновыми элементами цигоскелета белки только начинают изучаться . Акснова и др. Клячко, . Из пыльцы березы и лилии были выделены ДНК, кодирующие актинсвязывающие белки, близкие к профилину у березы V .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.192, запросов: 145