Особенности внутренних цепей питания зеленоядных мышевидных грызунов

Особенности внутренних цепей питания зеленоядных мышевидных грызунов

Автор: Варшавский, Александр Андреевич

Шифр специальности: 03.00.08

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2004

Место защиты: Москва

Количество страниц: 90 с. ил.

Артикул: 262127

Автор: Варшавский, Александр Андреевич

Стоимость: 250 руб.

Особенности внутренних цепей питания зеленоядных мышевидных грызунов  Особенности внутренних цепей питания зеленоядных мышевидных грызунов 

1. РНКлигаза .
1.1. Физикохимические свойства РНКлигазы .
1.1.1. Источник фермента, выделение и очистка
1.1.2. Стабильность РНКлигазы .
1.1.3. Тестирование РНКлигазы .
1.1.4. Структура РНКлигазы.
1.2. Биохимические свойства РНКлигазы .
1.2.1. Механизм катализируемой РНКлиг азой реакции
1.2.2. Специфичность и кинетические свойства РНКлигазы
1.2.3. Необычные свойства РНКлигазы .
1.3. Практическое использование РНКлигазы .
1.3.1. РНКлигаза и синтез олигорибонуклсогидов
1.3.2. РНКлигаза и синтез олигодезоксирибонуклеотидов .
1.3.3. РНКлигаза и синтез смешанных олигонуклеотидов
1.3.4. РНКлигаза и синтез модифицированных олигонуклеотидов .
1.3.5. Модификация природных полинуклеотидов
2. Полинуклеотидкиназа .
2.1. Физикохимические свойства полинуклеотидкиназы.
2.1.1. Источник фермента, выделение и очистка
2.1.2. Стабильность полинуклеотидкиназы
2.1.3. Тестирование полинуклеотидкиназы
2.1.4. Структура полинуклеотидкиназы .
2.2. Биохимические свойст ва полинуклеотидкиназы .
2.2.1. Механизм катализируемой полинуклеотидкиназой реакции
2.2.2. Специфичность и кинетические свойства
поли нуклеотид киназы.
2.2.3. Необычные свойства полинуклеотидкиназы.
2.3. Практическое использование полинуклеотидкиназы.
3. Резюме
Глава II. Материалы и методы
1. Материалы
2. Методы.
2.1. Получение хроматографического носителя ЯРС7.
2.2. Тестирование нуклеаз из яда кобры
2.3. Выделение нуклеаз из яда кобры.
2.4. Получение гомогенных олигорибонуклеотидов
2.5. Тестирование РНКлигазы
2.6. Выделение РНКлигазы вариант 1.
2.7. Выделение РНКлигазы вариант 2.
2.8. Выделение РНКлигазы вариант 3.
2.9. Выделение РНКлигазы вариант 4.
2 Определение молекулярною веса РНКлигазы
2 Тестирование полинуклеотидкиназы.
2 Выделение полинуклеотидкиназы вариант 1.
2 Выделение полинуклеотидкиназы вариант 2.
2 Иммобилизация и свойства иммобилизованной РНКлигазы
2 Иммобилизация и свойства иммобилизованной
полинуклеотидкиназы
2 Оптимизация условий РНКлигазной реакции
растворимый фермент.1.
2 Оптимизация условий РНКлигазной реакции
иммобилизованный фермент3.
2 Оптимизация условий реакци фосфорилирования олигорибонуклеотидов
иммобилизованная полинуклсотидкиназа.
2 Препаративный синтез гетероолигорибонуклеотидов растворимая РНКлигаза.
2 Препаративный синтез гстсроолигорибо
нуклеотидов иммобилизованная РНКлигаза
2 Препаративное фосфорилирование олигодсзоксирибонуклеотидов иммобилизованная полинуклсотидкиназа.
2 Твердофазный ферментативный синтез олигорибонуклеотидов
Глава 1. Ферменты, гомогенные
олигорибонуклеотиды, хроматографический носитель.
1. РНКлигаза бактериофага Т
1.1. Тестирование фермента.
1.2. Выделение фермента
2. Полннуклеотидкиназа бактериофага Т4.
2.1 Тестирование фермента
2.2. Выделение фермента
3. Нуклеазы из яда кобры.
3.1 Тестирование эндонуклеазы
3.2. Выделение ферментов.
4. Получение терминированных 5фосфатом гомоолигорибонуклеотидов
5. Хроматографический носитель с обращенной фазой
Глава IV. Синтез олигорибонуклеотидов с помощью
растворимой РНКлигазы.
1. Оптимизация условий РПКлигазной реакции
2. Синтез гетероолигорибонуклеотидов с помощью растворимой
РНКлигазы.
Глава V. Синтез олигорибонуклеотидов с помощью
иммобилизованных РНКлигазы и подинуклсотидкииазы
1. Иммобилизация РНКлигазы и полинуклеотидкиназы
2. Применение иммобилизованных ферментов.
Глава VI. Твердофазный синтез олигорибонуклеотидов
с помощью РНКлигазы и полинуклеотидкиназы.
Заключение.
Выводы.
Использованная литература
ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
А, С, и, 0,1, Т рибонуклеозиды но общепринятой системе обозначения
рЫ рибонуклеозидмонофосфат
Ыр рибонуклеозид3монофосфат
сК 2дезоксирибонуклеозид
Ст метилцигидин
еС 3, М4этеноцитидин
сА I, Ы6 этеноаденозин
ев I, Ы2 этеногуанозин
рС I, Ы2 2метилаллилиденгуанозин
ПпА 1р1рибофураиозил8аминоимидазо4,5хиназолин
8 никотииамид1, этеноадениндинуклеотид
3 никотииамид 3, Ы4 этеноцитозиндииуклеотид
Трис трисоксиметиламинометан
НЕРЕЬ Ы2гидроксиэтилпиперазинЫ2этансульфокислота
Вклпе ЫД4бис2гидроксиэтилглицин
БЭТА этилендиаминтетрауксусная кислота
ТХУ трихлоруксусная кислота
ЭЕА Ецелл ю лоза диэтил а ми ноэтил целлюлоза
АЕсефадекс диэтил2оксипропиламиноэтилсефадекс
ЬРссфадекс сульфопропилсефадекс
КРС7 полихлортрифторэтиленовый порошок с нанесенным
на него тетраоктиламмонийбромидом МКХ микроколоночная хроматография
ОЕ0 оптическая единица при длине волны 0 нм
ВВЕДЕНИЕ


Кт дя донора и акцептора в реакции сшивания 4 с при постоянной концентрации одного из компонентов, равной 0. М. Полученные значения 0,7 мМ для донора и 2,1 мМ для акцептора имеют тот же порядок величины, что и в работе . Близкие к этим значения для донора 1. М и акцептора 1. М получены также при сшивании 4 с 5 . Таким образом, для достижения высоких скоростей, сравнимых со скоростью реакции циклизации, необходимо проводить межмолекулярную РНКлигазную реакцию при относительно высоких миллимолярных концентрациях сшиваемых олигонуклеотидов. РНКлигазной реакции Бобразно зависит от концентрации фермента. При низких концентрациях РНКлигазы наблюдается характерная потеря активности ,, далее следует довольно протяженный линейный участок ,. Специфичность РНКлигазы по отношению к молекулам донора и акцептора в АТРзависимой межмолекулярной реакции исследовалась в ряде работ как на олигорибо ,,,,,,,,,,, так и на олигодезоксирибонуклеотидах ,,,,,. При этом было установлено, что сродство фермента к акцептору зависит от его нуклеотидного состава и длины цепи. Олигодезоксирибонуклеотиды на порядка менее реакционносмособные акцепторы, чем олигорибонуклеотиды ,,. Присоединение рибонуклеотида на 3конец олигодезоксирибонуклеотидного акцептора значительно стимулирует акцепторную активность молекулы, хотя и не делает ее таким же хорошим акцептором, как олигорибонуклеотид . Аналогично, присоединение дсзоксирибонуклсотида на 3конец рибонуклеотидного акцептора уменьшает его реакционную способность по сравнению с рибоакцепторами, но все еще оставляет его лучшим акцептором но сравнению с чистыми олиго дезоксирибонуклеотидами 1. Так что, вероятнее всего, все нуклеотидсвязывающие субсайты акцепторного сайта предпочитают рибонуклеотиды . Минимальная длина акцептора любого типа тринуклеозиддифосфат, динуклеозидмонофосфаты нереакционноспособны ,,,,. В одной из ранних работ были приведены экспериментальные данные, из которых следует, что динуклеотид рАрА является акцептором в межмолекулярной реакции. Более подробно акцепторные свойства динуклеогидов не исследовались. Однако в ряде работ, ориентированных на синтез конкретных последовательностей, имеются данные, что при переходе от три и тетрамерных к гекса и гептамерным акцепторам, сохраняющим структуру 3концевых нуклеотидов, при сшивании с одним и тем же донором выходы целевых олигонуклеотидов снижались ,. В ранних экспериментах с олигорибонуклеотидами было установлено, что сродство РНКлигазы к основаниям акцептора уменьшается в ряду А I С и ,,,, при этом наибольшее значение для взаимодействия с ферментом имеют три ближайших к 3концу акцептора нуклеотида . Так, если в любом из этих трех положений находится уридин, сродство РНКлигазы к такому акцептору существенно уменьшается . Последующие исследования эффективности гетерогенных три ну клеозидди фосфатов в качестве акцепторов показали, что эффект нуклеотидного состава и последовательности в значительной степени снижается при использовании высоких концентраций фермента 0 ед. Эффективность различных тринуклеозиддифосфатов, имеющих одиночные изменения в одном из грех положений нуклеотидной последовательности, была тщательно исследована в реакциях с мононуклеотидными и некоторыми более длинными донорными молекулами , При этом было обнаружено, что реакционная способность различных акцепторов с одним и тем же донором в значительной мере зависит не только от состава, но и от нуклеотидной последовательности акцептора. Порядок предпочтительности меняется в зависимости от двух других нуклеотидов, так что влияние изменений в одном положении акцептора на эффективность межмолекулярного лигирования нельзя проследить независимо от остальных нуклеотидных остатков 2. Кроме того, эффективность акцептора может меняться в зависимости от используемого в реакции межмолекулярного лигирования донора 2,,,. Итак, в работах ,, была получена уникальная информация о реакционной способности практически всех основных тринуклеозиддифосфатов, однако общей закономерности в отношении предпочтительной структуры минимального акцептора установлено не было.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.265, запросов: 145