Получение и характеристика штаммов Listeria monocytogenes, аттенуированных в результате сайт-специфического мутагенеза гена, кодирующего L,D-карбоксипептидазу

Получение и характеристика штаммов Listeria monocytogenes, аттенуированных в результате сайт-специфического мутагенеза гена, кодирующего L,D-карбоксипептидазу

Автор: Юров, Дмитрий Сергеевич

Шифр специальности: 03.00.07

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2008

Место защиты: Москва

Количество страниц: 110 с. 9 ил.

Артикул: 4068888

Автор: Юров, Дмитрий Сергеевич

Стоимость: 250 руб.



Более того, в настоящее время проводятся значительные исследования возможности использования аттенуированных штаммов бактерий, способных размножаться внутри эукариотической клетки, для разработки векторных систем для доставки в антигенпрезентирующие клетки рекомбинантных антигенов, в том числе опухолевых бактериофекция. Основной моделью для разработки систем бактериофекции является грамположительная бактерия ii . Шлыгина, , V . Тартаковский и др. В связи с высокой легальностью до от числа госпитализированных больных с диагнозом листериоз листериоз является серьезной проблемой для медицины Тартаковский и др. Зайцева и др. Кроме того, листериоз является важной проблемой для ветеринарии, что связано с убикитарностыо листерий, активно размножающихся во внешней среде, характерной для агропромышленного комплекса, например, в силосе, и приводящих к развитию эпидемий среди мелкого и крупного рогатого скота Бакулов и др. В процессе инфекции . Попавшая в фагосому бактерия разрушает фагосомальную мембрану и выходит в цитоплазму, где размножается с высокой эффективностью . V . Тартаковский и др. Гены факторов патогенности, необходимые для процесса внутриклеточного размножения, координировано регулируются фактором транскрипции Ермолаева, V , . Транскриптомный анализ экспрессии генов . Помимо генов уже изученных факторов патогенности, таких как листериолизин О, фосфолипазы, фактор полимеризации актина и т. Для некоторых из последних, например, для участвующего в импорте глюкозо1 фосфата белка , продукта гена , доказана роль в адаптации к размножению внутри цитоплазмы и в вирулентности i . Однако, в большинстве своем, роль в инфекционном процессе кодируемых этими генами белков общего метаболизма не изучалась. В целом, адаптационные механизмы, позволяющие бактериям колонизировать макроорганизм, эффективно используя его ресурсы и приспосабливаясь к встречающемуся в процессе инфекции микроокружению, во многом остаются неизученными. Целыо данной работы явилась выявление и идентификация белков, обеспечивающих адаптацию к размножению в макроорганизме, и оценка возможности аттенуации путем делеции кодирующих их генов. ОРС для выявления мутаций, приводящих к уменьшению вирулентности . Научная новизна. Разработаны критерии биоинформационного поиска, позволившие выявить ОРС, нарушение целостности которых в результате инсерции приводит к изменениям вирулентности . Впервые на модели экспериментального листериоза у лабораторных мышей показано, что инсерции в генах 1то и 1то приводят к уменьшению степени поражения внутренних органов при экспериментальном листериозе лабораторных мышей линии ВАГ,Вс, а инсерции в генах 1то и 1то увеличивают степень поражения. Установлено, что инсерция в опероне 1то 1то приводит к увеличению вирулентности мутантных бактерий i viv, но снижает способность . Показано, что мутации в гене 1то, кодирующем ,карбоксипептидазу, приводят к появлению удлиненных до раз по сравнению с бактериями дикого типа бактериальных клеток при выращивании листерий i vi на твердых питательных средах, но не в бульоне. Показано, что удлинение бактериальных клеток, мутантных по гену 1то, коррелирует с увеличением количества генетического материала, содержащегося в одной колониеобразующей единице, что свидетельствует о присутствии нескольких копий генома в одной бактериальной клетке. Таким образом, впервые для грамположительных бактерий доказано участие . Показано, что мутация в гене 1то, кодирующем ,карбоксипептидазу, нарушает процесс бактериального деления при размножении листерий внутри цитоплазмы эпителиальных клеток. Показано, что инактивация гена 1то приводит к снижению вирулентности . При этом аттенуация не связана с изменением уровня продукции основных факторов патогенности и Р1сА иили цитотоксичности, и, повидимому, связана с ролью кодируемой геном 1то Ь,0карбоксинеитидазы в бактериальном делении в процессе внутриклеточного размножения. Практическая значимость. Полученные результаты могут быть использованы для получения аттенуированных штаммов других видов бактерий путем введения сайтсиецифических мутаций в гены, кодирующие Ь,0карбоксипепгидазы, как предложено нами в методических рекомендациях .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.186, запросов: 145