Поверхностные структуры и антигены холерного вибриона, бруцелл и туляремийного микроба

Поверхностные структуры и антигены холерного вибриона, бруцелл и туляремийного микроба

Автор: Марков, Евгений Юрьевич

Шифр специальности: 03.00.07

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2000

Место защиты: Иркутск

Количество страниц: 313 с. ил.

Артикул: 306956

Автор: Марков, Евгений Юрьевич

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ, ТЕРМИНОВ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Современные представления о поверхностных структурах возбудителей холеры, бруцеллеза, туляремии
1.2. Перспективные направления и способы повышения иммуногенности бактериальных антигенов
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Штаммы
2.2. Микробиологические методы получение бактериальной массы
2.3. Методы препаративной биохимии
2.4. Электронная микроскопия ,
2.5. Химические и физикохимические методы
2.6. Приготовление искусственных антигенных комплексов
2.7. Иммунохимические и иммунологические методы
2.7.1.олучение антисывороток, выделение иммуноглобулинов
2.7.2. Гемагглютинационные методы
2.7.3. Иммуноферментный метод
2.7.4. Иммуноблотинг
2.7.5. Иммуноэритроадсорбционный метод ИЭАМ
2.7.6. Дотиммуноанализ с использованием антител и антигенов, меченных частицами коллоидного золота
2.8. Радиоизотопные методы
2.9. Биологические методы исследования определение токсичности и протективной активности
2 Статистическая обработка
Глава 3. ПОЛУЧЕНИЕ, ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РАЗЛИЧНЫХ ФРАКЦИЙ КЛЕТОК ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА, БРУЦЕЛЛ И ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА
3.1. Получение, физикохимические и иммунобиологические свойства различных фракций клеток холерного вибриона
3.1.1. Получение и свойства фракций лизата, образующегося при обработке мочевиной живых клеток холерного вибриона
3.1.2. Выделение, очистка и характеристика белков фенолрастворимой фракции и пориноподобного белка холерного вибриона
3.2. Физикохимические и протективные свойства антигенных фракций бруцелл и их искусственных антигенных комплексов
3.2.1. Иммуногенные свойства клеточных оболочек бруцелл в исходном и модифицированном виде
3.3. Получение и физикохимические, антигенные и протективные свойства поверхностных антигенов туляремийного микроба
Глава 4. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЛИПОПОЛИСАХАРИДОВ
4.1. Метахроматическая активность холерного, бруцеллезного и туляремийного ЛПС и усовершенствование колориметрического метода их определения
4.2. Разработка новых методов очистки бактериальных ЛПС с использованием иммобилизованного полимиксина В и Тритона Х
4.3. Применение метода фазового разделения для фракционирования химической холерной вакцины и определение содержания в ней ЛПС колориметрическим методом
Глава 5. ПОЛУЧЕНИЕ И НЕКОТОРЫЕ СВОЙСТВА ЛИПОПОЛИСАХАРИДОВ И БЕЛКОВОЛИПОПОЛИСАХРИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА, БРУЦЕЛЛ И ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА
5.1. Получение ЛПС холерного вибриона и его различных фрагментов и оценка их пригодности для конструирования полусинтетической химической вакцины
5.1.1. Выделение ЛПС из клеток холерных вибрионов, очистка и характеристика его свойств
5.1.2. Получение, очистка и характеристика Ополисахарида и деацилированного ЛПС
5.1.3. Протективные свойства конъюгатов нетоксичных дериватов ЛПС с синтетическими полиэлектролитами
5.2. Физикохимические, антигенные и иммунобиологические свойства нолисахаридсодержащих антигенов бруцелл
5.3. Получение и физикохимические, антигенные свойства ЛИС туляремийного микроба
Глава 6. ПОЛУЧЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛАБОРАТОРНОЙ ПРАКТИКЕ
6.1. Получение кроличьих холерных ангисыворогок против изолированных антигенов холерного вибриона и оценка их пригодности для постановки реакции агглютинации
6.2. Получение гипериммунных кроличьих антисывороток против изолированных антигенов бруцелл и оценка их пригодности для получения диагностических тестсистем
6.2.1. Разработка и апробация иммуноэритроадсорбционного метода обнаружения антигенов бруцелл
6.2.2. Разработка тестсистем с использованием в качестве метки иммунохимических реагентов частиц коллоидного золота
6.2.2.1. Использование специфических антител, меченных частицами коллоидного золота, для обнаружения антигенов бруцелл методом догиммуноанализа
6.2.2.2. Выявление антигенов бруцелл методом дотиммуноанализа с использованием стафилококкового белка А, меченного частицами коллоидного золота
6.2.2.3. Использование белковополисахаридного антигена бруцелл, меченного частицами коллоидного золота, для обнаружения специфических антител методом дотммуноанализа
6.3. Получения эритроцитарного туляремийного антигенного диагностикума ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ БЛАГОДАРНОСТИ
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ,
БСА ТЕРМИНОВ бычий сывороточный альбумин
БНМ белки наружной мембраны
Ы1А белковополисахаридный антиген
БФФ белки фенолрастворимой фракции
дЛПС деацилированный ЛПС
дох дезоксихолат натрия
ДПС деградированный полисахарид
ДСП додецилсульфат натрия
ДСНПАГЭ дискэлектрофорез в полиакриламидном геле, содержаще
ЗФР забуференный физиологический раствор
ИИ индекс инфицированности
ими. импульс
ИСКОМ иммуностимулирующий комплекс
ИФА иммуноферментный анализ
ИЭАМ иммуноэри гроадсорбционный метод
КДО КЮО кетодезоксиоктонат 2кетоЗдеоксиоктоиовая кислота
КЗ коллоидное золото
кк карбоцианиновый краситель
ко клеточная оболочка
КОЕ колонисобразующая единица
КонА конканавалин А
КРС крупный рогатый скот
КС клеточная стенка
ЛПС ипополисахарид
м. к. микробные клетки
МКА моноклональные антитела
мкг микрограмм КГ6 г
МО микролитр 6 г
Мклетка м икроскладчатая тсгоос клетка
мол. масса молекулярная масса
НАДН никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма
НАФ неполный адъювант Фрейнда
нг нанограмм 9 г
II.к. нуклеиновые кислоты
нЛПС неочищенный ЛПС
НМ наружная мембрана
ООН особо опасные инфекционные заболевания
0с Оспецифический полисахарид
ПААГ полиакриламидный гель
ПАФ полный адъювант Фрейнда
ПГ пептидогликан
Г пикофамм г
ПС протаминсульфат
ПЭГ нолиэтиленгликоль
Р реакция
РА реакция агглютинации
РДСК реакция длительного связывания комплемента
РСК реакция связывания комплемента
РТНГА реакция торможения непрямой гемагглютинации
РХ реакция Хсддльсона
Трис триегидроксиметил аминометан
ТХУ трихлоруксусная кислота
XI холерный токсин
хтв субъединица холерного токсина
чЛПС чистый Л С
цАМФ циклический аденозинмонофосфат
ЦМ цитоплазматическая мембрана
ЦГАН цетилтриметиламмонийбромид
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
Иа, кОа единицы измерения мол. массы дальтон и килодальтои
Ес1 доза бактерий, вызывающая гибель всех взятых в опыт животных
0,1М иммуноглобулины класса ОиМ
1т о доза антигена, вызывающая защитный эффект у взятых в опыт животных
ЬАЬтест тест копирования лизата амебоцитов ПтииБ ро1уркети.ч
Ы5о доза испытуемого агента, вызывающая гибель взятых в опыт животных
я1А секреторный иммуноглобулин А
ТСР токсинкорегулирусмые пили
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Повышенная температура индуцирует появление у холерного вибриона, бруцелл и туляремийного микроба новых белков так называемых белков теплового шока БТШ , 2, 7, 7, 2, в том числе локализованных в НМ, которые могут играть в патогенезе и защите от инфекции очень большую роль 1, 7. В КС В. Тем не менее, в НМ бруцелл выделяют три основные группы белков с мол. Вторая группа мажорных БНМ у В. В. ii и В. Е. i 4, 7, 8. По своим функциональным характеристикам эти БНМ являются поринами 3, 4, 4. БПМ 3ей группы бруцелл, судя по аминокислотному составу, прочному связыванию с ПГ и модификации их свойств при нагревании, скорее всего, являются аналогами Е. Более того, для первичной структуры всех основных БНМ бруцелл характерно наличие гомологичных аминокислотных последовательностей с БНМ ii i или , что указывает на близкое генетическое родство с представителями i 3, 3. Обследование спектра белков НМ штаммов В. С помощью электрофоретического анализа показано, что относительное содержание одного из мажорных БНМ порина в клетках В. В. i и В. В. 3. У . НМ содержат белки с мол. Один из мажорных белков модифицируется при нагревании и имеет мол. Как правило, все поверхностные белки иммуногенны при иммунизации лабораторных животных препаратами изолированных НМ. В процессе естественного или экспериментального инфекционного процесса также происходит образование антител против многих из этих белков. Судя по результатам перекрестного иммуноэлектрофореза и иммуноблотинга 8, такие антитела реагируют с солюбилизированными и денатурированными под действием детергентов формами белков. Обычно БНМ, выделенные из разных штаммов различных серотипов и близкородственных видов патогенных бактерий, обладают общими антигенными детерминантами. Перекрестное реагирование было обнаружено между БНМ различных серогрупп . V независимо от их биотипа или серовара 5, 1, 6, 1, 8, видов ii . На большое сходство физикохимических свойств БНМ бактерий разных таксономических групп указывает способность поринов . В. vi образовывать i vi агрегаты с ЛПС гетерологичных видов бактерий 2. Анализ сывороток инфицированных V. БИМ холерного вибриона обладают способностью индуцировать синтез антител, перекрестно реагирующих с вибрионами разных серогрупп 4, 1, 6. Судя по результатам радиоактивного мечения целых клеток и V части молекул девяти БНМ расположены на поверхности клеток холерного вибриона 8. Мажорные БНМ, включая порины, разных видов бруцелл В. В. ii, В. В. i обладают общими антигенными детерминантами 4, 7, 3, часть из которых 3ья группа БНМ и белки с мол. В. vi и форм В. В. ii 9. Установлено, что БНМ более доступны для МКА у штаммов В. В. , В. В. i в сравнении с формами, что связано с экранирующим действием Оспецифических боковых цепей форм ЛПС 4. Наиболее доступными для МКА оказались БНМ штаммов В. В. i с мол. БНМ В. В. , В. В. i и В. Более того, в иммуноферментном анализе ИФЛ при использовании в качестве антигена основных БНМ бруцелл было обнаружено перекрестное реагирование с антителами против возбудителя туляремии 7. У . НМ являются белки с мол. В составе мембранной фракции бескапсульного мутанта вакцинного штамма i было обнаружено несколько специфических антигенов белковой природы 9, 1, среди которых иммунодоминантным антигеном оказался белок с мол. В многочисленных экспериментах по активной и пассивной защите лабораторных животных было продемонстрировано участие в формировании иммунитета поринов и других БНМ грамотрицательных бактерий 1, 6, 8, 9, включая холерный вибрион 6, 4, 7, 8, 5, 6, 8 и бруцеллы , 2. БНМ туляреминного микроба, повидимому, проявляют протективную активность только в ассоциированном с ЛПС виде 9. Среди БНМ холерного вибриона своей высокой иммуногснностыо выделяются пориноподобный белок V с мол. БНМ с мол. Антисыворотки против БНМ V. V. 4. Поликлональные и моноклональные антитела МКА против некоторых БНМ холерного вибриона обладали ярко выраженными превентивными свойствами, повидимому, за счет ингибирования колонизации слизистой тонкого кишечника мышейсосунков 2, 0, 1. Смесь МКА против БНМ бруцелл с мол.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.219, запросов: 145