Новые бактериоцины лактококков и их практическое использование

Новые бактериоцины лактококков и их практическое использование

Автор: Стоянова, Лидия Григорьевна

Шифр специальности: 03.00.07

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2008

Место защиты: Москва

Количество страниц: 399 с. ил.

Артикул: 4057216

Автор: Стоянова, Лидия Григорьевна

Стоимость: 250 руб.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение стр.
I. Обзор литературы стр.
I Общая характеристика лактококков i
i и их распространенность. стр.
1.1.1. Морфология и культуральные свойства стр.
1.1.2. Физиологобиохимические особенности лактококков стр.
1.2. Бактериоцины лактококков i стр.
1.2.1. Свойства бактсриоцинов стр.
1.2.2. Классификация бактериоцинов стр.
1.2.3. Формирование биологически активных молекул стр.
1.2.4. Механизм действия бактериоцинов стр.
1.2.5. Система иммунности продуцентов к бактериоцинам стр.
1.2.6. Методы выделения и определения бактериоцинов стр. 5
1.2.7. Условия образования бактериоцинов стр.
1.3. Селекция бактериоцинобразующих лактококков i
i стр.
1.3.1. Выделение бактериоцинобразующих лактококков i
i из природных источников стр.
1.3.1.2. Дифференцирующие среды для выделения i
i стр.
1.З.1.З. Идентификация бактериоцинобразующих лактококков стр.
1.3.2. Слияние протопластов как метод селекции молочнокислых бактерий схр.
1.3.2.1. Получение протопластов стр.
1.З.2.2. Слияние протопластов стр.
1.3.2.3. Регенерация протопластов стр.
1.3.2.4. Селекция рекомбинантов стр.
1.3.3. Г енноинженерные методы стр.
1.3.4. Индуцированный мутагенез . i стр.
1.3.4.1. Действие физических мутагенов стр.
1.З.4.2. Химические мутагены стр.
1.4. Хранение молочнокислых бактерй стр.
1.5. Применение молочнокислых бактерий и их бактериоцинов в качестве
биологических консервантов стр.
Заключение стр.
II. Экспериментальная часть стр.
I1. Объекты и методы исследования стр. 5.
II Выделение и идентификация бактериоцинобразующих лактококков
i . i стр.
II.1.1.2 Изучение морфологии выделенных штаммов стр.
П.1.1.3 Культуральные признаки стр.
П.1.1.4. Физиологобиохимические свойства . i стр.
П.1.1.4.1. Изучение ферментативной активности в отношении сбраживания
углеводов стр.
II.4.2. Определение потребности штаммов i . i в стр.
ростовых компонентах
II. 1Л .4.3. Определение количества молочной кислоты. стр.
.1.1.4.4. Качественная реакция на молочную кислоту. стр.
П.1.1.4.4. Определение бактсриоциногенной активности стр.
П. 1.1.4.6. Определение низннобразующей активности СТр
II. 1.1.4.7. Определение спектра ингибирующей активности штаммов
i . i стр.
И. 1.1.4.8 Определение чувствительности штаммов . i . i к
антибиотикам стр.
II. 1.1.4.9. Молекулярнобиологические методы идентификации СТр
П.2.2. Слияние протопластов бактериоцинобразующих лактококков
i . i как метод селекции. стр.
П.2.2.1. Получение протопластов С1р
.2.2.2. Регенерация протопластов стр.
П.2.2.3. Слияние протопластов сгр.
П.2.3. Индуцированный мутагенез лактококков i .
i. стр.
П.2.3.1. Влияние ультрафиолетовых лучей на i . i
П.2.3.2. Обработка химическими мутагенами стр.
П.З. Использование в качестве ферментационных субстратов для синтеза
бактсриоцинов i . i отходов
биотехнологических производств. стр.
4. Синтез бактериоцина штаммами i . i
4.1. Определение влияния компонентов ферментационной среды на синтез
бактериоцина перспективными штаммами стр.
.4.2. Влияние рНстатирования на синтез бактсриоцинов СТр
5. Изучение условий диссоциации штаммов i .
i стр.
II.6. Хранение штаммов молочнокислых бактерий стр
П.7. Изучение плазмидного профиля штаммов i СТр
.8. Выделение бактериоцина и изучение его физикохимических свойств стр
.8.1 Изучение свойств препаратов бактериоцинов стр
.8.2. Изучение влияния левомицетина на синтез белка и бактериоцина СТр
П.8.3. Определение белка по методу Лоури стр
.9. Изучение токсичности новых бактсриоцин образующих штаммов
i . i стр.
II. . Применение гибридного штамма . i . i 6 и его
бактериоцина ЛГС в качестве биоконсерванта пищевого сырья стр.
П. . Применение бактсриоцин образующих штаммов i
. i 4 для хранения колбасных изделий стр.
II. Статистическая обработка результатов исследований СТр
III. Результаты исследований и их обсуждение СТр
III. 1. Селекция бактериоцинобразующих лактококков i
. i стр.
Ш.1.1. Выделение природных активных бактериоцинобразующих штаммов
мезофилъных лактококков и их идентификация стр.
III. 1.2. Слияние протопластов как метод селекции лактококков СТр
Щ.1.2.1. Ш. 1.2.2.
Ш. 1.2.3. I. 1.3.
Ш.1.3.1. Ш. 1.3.2. Ш.2. Ш.2.1.
Ш.2.3.
III.4.
Ш.5.1.
1.5.3. Ш.5.4.
Ш.6.1.
I.6.3.
2.
4.
Разработка способа получения протопластов
Протопластированис как метод селекции низинпродуцирующих
лактококков . i . i
Слияние протопластов i . i
Индуцированный мутагенез бактериоцинобразующих штаммов i . i Действие ультрафиолетовых лучей
Действие химических мутагенов
Синтез бактериоцинов лактококками
Синтез бактериоцинов в зависимости от компонентного состава среды
Влияние рНстатирования на рост продуцентов i .i и синтез бактериоцинов
Диссоциация продуцентов бактериоцинов i . i
Использование в качестве ферментационных субстратов отходов ферментных производств
Оптимизация способов хранения молочнокислых бактерий
Выделение, очистка и идентификация бактериоцинов, синтезируемых перспективными штаммами . i . i Выделение и очистка бактериоцинов
Идентификация бактериоцинов, синтезируемых перспективными штаммами . i . i Физикохимические свойства бактериоцинов
Характеристика препарата ЛГС, синтезируемого гибридным штаммом i . i .
Практическое использование бактериоцинобразующего штамма i . i .и его бактериоцина ЛГС в качестве биологических консервантов
Изучение действия бактериоцина ЛГС на стабильность пищевого сырья в процессе хранения
Применение бактериоцинобразующего штамма i . i .и его бактериоцина ЛГС в качестве биологических для увеличения сроков хранения яичного белка.
Использование активного бактериоцинобразующего штамма i . i 4 как биологического консерванта Заключение
Список литературы Приложения
Определение нуклеотидных последовательностей гена I I для уточнения видовой принадлежности штаммов молочнокислых бактерий
Лабораторный регламент на процесс синтеза бактериоцина природным штаммом i . i 4 Лабораторный регламент на синтез бактериоцина гибридным штаммом i . i .
Акт о проведении испытаний на токсичность штамма i . i 9x
Акт о проведении испытаний на токсичность штамма
стр. 4 стр.
стр.
стр.
стр.
стр.
стр.
стр.
стр.
стр.
стр.5 стр.8 стр. 4 стр.6 стр.
асй БиЬэр. асЙ Р6.
6. Акт о проведении испытаний на токсичность мутантного штамма
Ьасюсоссиэ асй БиЬэр. i IО
7. Акт о проведении испытаний штамма ЬасЮсосст асй яиЬБр. 1асИз
4 для хранения колбас Микояновского мясокомбината
8. Акт о проведении испытаний препарата ЛГС в качестве
биоконсерванта на Пензенском мясокомбинате.
9. Протокол исследования Центра биологической безопасности ФСО
России бактериоцина ЛГС
. Расчет экономической эффективности от внедрения в производство
колбас штамма Ьас1ососсиз асй Бибэр.асй 4
ВВЕДЕНИЕ


Аминокислотная последовательность лидирующего пептида . Примечание темным отмечены консервативные области. Лидерным пептидам приписывают различные функции проведение транспортного сигнала, поддержание молекулы лантибиотика в неактивной форме и образование сигнала опознавания при процессинге и модификации. Хотя исследованиями и была доказана важность аминокислот лидерного пептида в процессе созревания и транспорта некоторых лантибиотиков и др. Продукты генов и типа I и 1апМ лантибиотиков типа I не проявляют никакого сходства с описанными ранее белками. Повреждение этих генов ингибирует синтез большинства лантибиотиков. Используя двугибридную систему и соосаждение исследователи показали наличие мембранассоциированного мультиферментного комплекса, состоящего из двух молекул i, двух молекул i и одной молекулы i для образования низина. Посггрансляниоипан модификация тина лантибиотика низина . Для лантибиотиков структура и функции сопряжены иначе. Полная потеря антибактериальной активности при разрыве лантиониновых мостиков с заменой серина, треонина и цистеина другими аминокислотами доказывает необходимость кольцевых структур рис. А, В, С. Лаитиониновые мостики служат в качестве стабилизаторов конформации, важной для биологической активности и устойчивости лантибиотиков к протеазам. Недавно было получено строгое доказательство роли как бифункционального фермента, катализирующего дегидратацию и циклизацию лактицина 1 Xi . Долгое время не удавалось точно установить ферментативную активность и i vi в присутствии субстрата, препептида 1апА. Тем не менее, был сделан рентгенострукту рный анализ кристаллической структуры . Хотя при этом не было найдено сходство с описанными ранее последовательностями, струкгурный анализ показал сворачивание лантибнотика похожее на конформацию фарнезилтрансфсразы млекопитающих. В дальнейшем было показано, что i цинксодсржащий металлопротеин с гистидиновыми и цистеиновыми остатками, консервативными для и . Эти конститутивные остатки функционируют как лиганды для связывания цинка. Предполагается вероятный механизм, где цинк способен активировать тиоловую группу цистеина в реакции нуклеофильного присоединения к дегидроаланину и дегидромасляной кислоте в прспептиде. Фермент , найденный у лантибиотиков типа АН, отвечает за оба процесса дегидратацию и циклизацию аминокислот. Сконец содержит идентичных последовательностей Сконца , включая предполагаемые металлсвязывающие лиганды. В то же время не было зафиксировано никакой гомологии с . Реконструкция i vi фермента лактицина 1 продуцент i позволила понять его субстратную специфичность. Отрезание девяти аминоклслот лидерного пептида формирует полностью модифицированный продукт, однако отщепление лидерного пептида полностью подавляет и ферментативную активность. Таким образом, лидерный пептид является важным фактором узнавания препептида ферментом . Отщепление же части Стерминального пропептида не влияет на активность , что свидетельствует о гибкой субстратной специфичности модификациониого фермента в отношении иропептида. Изучение показало необходимость присутствия ионов 2 и АТФ для его функционирования. АТФ превращается в АДФ при одновременном фосфорилировапии остатков, затем 2 и АДФ участвуют в дефосфорилировании с получением и . Результаты анализов взаимодействия ферментов биосинтеза нукацина I. В связи с этим была показана модифицирующая функция фермента в коэкспрессии гистидинсвязанного препептида. После дегидратации циклитизации протеаза отщепляет лидирующий пептид рис. Рис. Посттранслнционная модификация лантибиотика нукацина I1 а. Примечание А подчеркнуты сериновые и треониновые остатки. Некоторые лантибиотики подвергаются дальнейшим ностграпсляциониым модификациям. Лантибиотики группы I эпидермин и мерсацидин содержат необычные аминокислоты на Сконцах, а именно 2шшюътшлцистсин vi у эпидерина и 8гТ2аминовинил3метил цистеин vi у мерсацидина. Ферменты, ответственные за образование этих аминокислот, кодируются геном . Стерминального цистсинового остатка, формируя vi и vi.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.187, запросов: 145