Неиммунное взаимодействие компонента комплемента ClQ CO Streptococcus pyogenes

Неиммунное взаимодействие компонента комплемента ClQ CO Streptococcus pyogenes

Автор: Королева, Ирина Владимировна

Шифр специальности: 03.00.07

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2000

Место защиты: Санкт-Петербург

Количество страниц: 181 с.

Артикул: 273009

Автор: Королева, Ирина Владимировна

Стоимость: 250 руб.

Неиммунное взаимодействие компонента комплемента ClQ CO Streptococcus pyogenes  Неиммунное взаимодействие компонента комплемента ClQ CO Streptococcus pyogenes 

СОДЕРЖАНИЕ
Список сокращений и условных обозначений .
ВВЕДЕНИЕ .
1. ОБЗОР НАУЧНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общая характеристика стрептококков группы А .
1.2. Семейство Мподобных белков .
1.3. Взаимодействие стрептококков фуппы А СТА с белками организма
человека .
1.3.1. Адгезия и инвазия СГА клеток организма хозяина
1.3.2. Взаимодействие СТА с иммунной системой организма хозяина
1.3.3. Взаимодействие СТА с компонентами системы комплемента человека
1.4. и система комплемента человека
1.5. Неиммунные активаторы .
1.6. рецепторы клеток организма человека .
1.7. Взаимодействие с бакгериями .
1.8. Заключение обзора .
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Используемые штаммы и культуральные среды .
2. 2. Связывание радиоактивного клетками бактерий .
2. 2.1. Связывание радиоактивного клетками СТА на разных фазах роста
культуры .
2. 2.2. Обработка СГА клеток КЗСЫ и ферментами
2. 2.3. Эшоция КБСК и ИаС1 связанного с клетками радиоактивного С1я
2. 3. Метод конъюгирования иероксидазы хрена с белками
2. 4. Электрофорез и электроперенос белков
2. 5. Вестерн и Дот блот
2. 6. Определение молекулярной массы белков .
2. 7. Определение концентрации белков .
2. 8. Приготовление аффинных колонок
2. 9. Очистка С1ц из плазмы человека
2 Получение коллагеноподобного и глобулярного фрагментов С1я .
2 Способы экстракций поверхностных белков СГА .
2 Очистка СЦсвязывающих белков из экстрактов СГА .
2 Выделение и очистка рекомбинантного белка М5
2 Прямой метод иммуноферментного анализа ИФА для определения
связывания СЦ рекомбинантным белком М5
2 Метод конкурентного связывания с применением иммуноферментного
анализа .
. Определение равновесной константы связывания Ка С1 я с
рекомбинантным белком М5
. Ингибирование С фрагментами связывания С1 я рекомбинантным белком М5
. Конкурентное связывание фибриногена и С1 я рекомбинантным белком
2 Определение С4сдепозиции, вызванной активацией системы
комплемента по классическому пути, с использованием двухслойного метода иммуноферментного анализа
2 Преинкубация поликлонального I человека с рекомбинантным
белком М5, адсорбированным на иммуноферментных платах .
2 Ингибирование рекомбинантным белком М5 экспериментально
вызванной активации СК но классическому пути
2 Преинкубация с рекомбинантным белком М5
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ .
3.1. Изучение неиммунного связывания клетками бактерий
3.1.1. Связывание радиоактивного С1 грамположительными и грам
отрицательными бактериями .
3.1.2. Связывание радиоактивного клетками
3.1.3. Стабильность связывания клетками
3.1.4. Действие ферментов на связывание С1 клетками

3.2. Экстракция связывающего материала из
3.3. Очистка и частичная характеристика С1 связывающих белков из

3.3.1. Очистка С1 связывающих белков из щелочных экстрактов штаммов
М5 и М
3.3.2. Очистка связывающих белков из экстракта штамма Т
3.3.3. Частичная характеристика связывающих белков
3.4. Очистка из плазмы человека и получение фрагментов
3.4.1. Очистка С1 из плазмы человека
3.4.2. Получение коллагеноподобного и глобулярного фрагментов С1я .
3.5. Очистка рекомбинантного белка М5 .
3.5.1. Частичная характеристика рекомбинантного белка М5
3.6. Взаимодействие рекомбинантного белка М5 с компонентом
комплемента СЦ .
3.6.1. Определение равновесной константы связывания Ка С1 я с
рекомбинантным белком М5 .
3.6.2. Определение фрагмента С1я, взаимодействующего с рекомбинантным
белком М5
3.7. Взаимодействие рекомбинантного белка М5 с системой комплемента
человека .
3.7.1. Депозиция компонента комплемента С4с на иммуноферментных платах
с адсорбированным рекомбинантным белком М5 .
3.7.2. Преинкубация поликлонального человека с рекомбинантным
белком М5, адсорбированным на иммуноферментных платах
3.8. Ингибирование экспериментально вызванной активации системы
комплемента по классическому пути рекомбинантным белком М5
3.9. Эффект неиммунного связывания С1 рекомбинантным белком М5
3 Влияние фибриногена человека на неиммунное связывание С1 я
рекомбинантным белком М5 .
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ .
5. ВЫВОДЫ .
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
БСА бычий сывороточный альбумин
ИФА иммуноферментный анализ
кД тысячи дальтон
КФЕ колониеформирующая единица
М.М. молекулярная масса
ПМЯл полиморфноядерные лейкоциты
рМ5 рекомбинантный белок М
СГА стрептококки группы А
СК система комплемента
ЧГС человеческая гипогаммаглобулиновая сыворотка
ЧНС человеческая нормальная сыворотка
ЧСА человеческий сывороточный альбумин
ЧСА антиЧСА антитело иммунный комплекс
С4ВР 4ii i С4Ьсвязьшающий белок
этилендиаминтетрауксусная кислота
обозначение гена
I иммуноглобулин
I иммуноглобулин М
I иммуноглобулин А
i i коммерческая жидкая питательная среда для выращивания . i i фактор опалесценции алопротсиназа
забуференный физиологический раствор
, содержащий 0.
додецил сульфат натрия
электрофорез белков в полиакриламидном геле
i гидроксимстиламинометан солянокислый
V 0. М вероналовый буфер, содержащий 0. М , 7.
V2 V, содержащий 1.5 х 4 М Са и 5 х 5 М
V V, содержащий 0.
V V, содержащий 0.
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Способность стрептококков продуцировать гемолизины, вызывающие гемолиз бараньих эритроцитов, дала возможность подразделить эти микробы по степени гемолиза на средах с кровяным агаром. Для агемолитических стрептококков характерен неполный гемолиз с зоной зеленения ргемолитические стрептококки характеризуются полным гемолизом, образуя зону полного просветления, и угемолитические стрептококки характеризуются отсутствием гемолиза. В настоящее время известно, что гемолиз эритроцитов вызывается О и стрептолизинами, продукция которых зависит от условий внешней среды. В связи с этим выше упомянугая классификация в настоящее время признается условной. Все стрептококки . А Н и от К до Т в соответствии с группоспецифическими полисахаридами их клеточной стенки 3. Стрептококки, обладающие общим группоспецифическим полисахаридом А, по классификации относятся к группе А видовое название . К кожным заболеваниям, вызываемым СТА, относятся импетиго, васкулиты, гнойные иостгравматические и постожоговые поражения тканей, рожистое воспаление. В ряде случаев инфекции, вызванные СГА, переходят в более генерализованные формы некротический фасцит, стрептококковый сепсис и токсический шоковый синдром. Эти заболевания характеризуются высоким процентом летальных исходов вследствие быстрого развития шока на фоне общей недостаточности работы органов человеческого организма. Многие стрептококковые штаммы в зависимости от среды обитания продуцируют капсулу, образованную гиалуроновой кислотой, которую относят к факторам вирулентности 1, , 6, 0, Предполагается, что гиалуроновая капсула маскирует сайты клеточной стенки, доступные для опсонизации микроба, тем самым защищает микроб от фагоцитоза полиморфноядерными лейкоцитами ПМЯл . Подобно другим грамположительным бактериям СГА обладают мощной клеточной стенкой мозаичной структуры, основу которой составляет пептидогликан и тейхоевые кислоты. Клеточная стенка СГА содержит полисахарид и многочисленные белки, с которыми связаны важнейшие функции жизнедеятельности микроба. Одними из первых антигенов клеточной стенки были определены Т, М и белки 2, . Трипсин устойчивые Т белки позволили разработать систему иммунологического типирования СГА в реакции агглютинации с помощью антиТ сывороток, предложенную ii в году . В настоящее время Ттипированис используется как первый шаг при диагностике клинических изолятов. Типирование по М белку оказалось более точным, поскольку в ряде случаев штаммы СГА, содержащие одинаковый Т белок, отличались но М белку. Серотипирование, основанное на идентификации М белка, было предложено в году i и успешно применяется до сих пор, несмотря на быстрое развитие молекулярных методов типирования. М сыворотками экстрактов исследуемых штаммов 2, 2. Благодаря серотипированию по М белку было идентифицировано более 0 М серотипов среди . В конце х годов было обнаружено, что СГЛ продуцируют белок, вызывающий опалесценцию сывороток некоторых млекопитающих и человека 7, 8. Этот белок получил название фактора опалесценции фактора. Часто фактор упоминается как липо или алопротеиназа, благодаря своей способности специфически расщеплять апопротеин А1, основной белковый компонент сывороточных липопротеинов высокой плотности, что приводит к агрегации липопротеинов и опалесценции сыворотки 4. Долгое время ученые считали, что М и белки тесно связаны и кодируются общим геном , . Благодаря работам с соавторами в году было продемонстрировано, что каждый из этих белков кодируется своим геном . Тесная корреляция между фактором и определенным типом М белка позволила использовать этот признак для типирования. Было показано, что из всех М типов СГА лишь по другим данным штаммов являются ОРиоложительными. М типов , М3, М5, Мб, 2. Однако наблюдались случаи, когда за фарингеальной инфекцией, вызванной отрицательным штаммом , Мб, 2, следовал острый постстрептококковый гломерулонефрит. Кожные инфекции, сопровождающиеся острым постстрептококковым гломерулонефритом, ассоциируют с положительными штаммами М4, М, М, М и др Тем не менее, хорошо известны примеры, когда некоторые отрицательиые штаммы М, М вызывали кожные инфекции с последующим острым гломерулонефритом , ,8, 9.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.188, запросов: 145