Мобильные генетические элементы Bordetella pertussis и их роль в регуляции генов вирулентности возбудителя коклюша.

Мобильные генетические элементы Bordetella pertussis и их роль в регуляции генов вирулентности возбудителя коклюша.

Автор: Каратаев, Геннадий Иванович

Шифр специальности: 03.00.07

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2008

Место защиты: Москва

Количество страниц: 292 с. ил.

Артикул: 4057509

Автор: Каратаев, Геннадий Иванович

Стоимость: 250 руб.

1.1.Факторы патогенности бактерий рода ,
их молекулярная структура и регуляция экспрессии
генов вирулентности.
1.1.1. Лдгезины бактерий рода
1.1.1.1 .Филаментозный гемагглютинин
1.1.1.2.Фимбрии или агпнотиногены.
1.1.1.3. Пертактин
1.1.1.4. Белок устойчивости к сыворотке
1.1.1.5.Трахеальный колонизирующий фактор.
1.1.2. Токсины бактерий рода .
1.1.2.1. Коклюшный токсин.
1.1.2.2. Аденилатциклазный токсин.
1.1.2.3. Термолабильный токсин ТЛТ
1.1.2.4. Трахеальный цитотоксин.
1.1.2.5. Липополисахаридный эндотоксин .i
1.1.3. Третий тип системы секреции бактерий рода
1. 2. Регуляция вирулентности бактерий рода .
1.3. Персистенция возбудителя коклюша в эукариотических
клетках, как возможный механизм сохранения популяции бактерий
в организме человека.
1.4. Повторяющиеся последовательности микроорганизмов.
рода .
1.5. Бактериофаги и плазмиды микроорганизмов рода
1.6. Лабораторная диагностика микроорганизмов рода
с помощью полимеразной цепной реакции ПЦР.
1.7. Мобильные генетические элементы прокариот.
1.7.1. Структурам свойства мобильных генетических элементов
1.7.2. Генетический контроль транспозиции МГЭ
1.7.2.1. Регуляция экспрессии транспозазы
1.7.2.2. Контроль транспозиции МГЭ факторами клетки хозяина
1.7.3. Механизмы транспозиции МГЭ
1.7.4.Систематика Iэлементов прокариот.
1.7.5. Ферменты транспозиции, кодируемые МГЭ прокариот.
1.8. Краткая характеристика фосфоенолпируватзависимой
фосфотрансферазной системы и двухкомпонентных сенсорных регуляторных систем бактерий.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. Материалы и методы
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение
3.1. Повторяющиеся последовательности и транспозоноподобные
элементы В.i
3.1.1. Клонирование повторяющейся последовательности
хромосомы В.i 5.
3.1.1.1. индуцируемая нестабильность рекомбинантных плазмид
в клетках гссЛ .i НВ1.
3.1.1.2. В.i 5 стимулирует гесА независимую
рекомбинацию плазмиды с хромосомой .i НВ
3.1.2. Структурная организация участка хромосомы .i 5,.
содержащего v оперон. Клонирование Тп подобного элемента .i 5.
3.1.3 Конструирование генетически маркированных и
ТпВР элеменов .i.
3.1.4. Свойства и ТпВР элементов В.i. Картирование открытой рамки считывания, ответственной за синтез транспозазы
3.1.4.1. Транспозиция .i 5 и индуцируемая.
коинтеграция между плазмидами и плазмидой и хромосомой в клетках .i.
3.1.4.1.1. Транспозиция ТпВР в хромосому .i 1.
3.1.4.1.2. индуцированная интеграция плазмиды рККЗ.
в хромосому .i.
3.1.4.2. Перемещение и интеграция и ТпВР В. i в
клетках .i, мутантных по белку Нрг фосфоенолпируватзависимой фосфотрансферазной системы .
3.1.4.2.1. Интеграция плазмиды рККЗ с хромосомой в клетках
дикого типа и мутантах I . i.
3.1.4.2.2. Исключение и внутримолекулярное перемещение
интегрированной плазмиды рККЗ в клетках дикого типа и
мутантах I . i.
3.1.4.2.3. Нестабильность рекомбинантных плазмид, содержащих
и ТпВР .i, в бактериях .i. Бактерии
.i предпочтительный хозяин для клонирования повторяющихся последовательностей .i.
3.1.4.3. Картирование открытой рамки считывания,
ответственной за синтез транспозазы.
3.1.4.3.1 Коинтеграция плазмид рМи, рМи5 и рМиб.
с хромосомой .i.
3.1.4.3.2. Коинтеграция плазмид рККЗ, рМи, рМи5 и рМиб с
плазмидой рОХ в ь и бактериях .i.
3.1.4.4. Особенности разрешения межплазмидных .
индуцируемых коинтегратов в бактериях .i.
3.1.4.4.1. Структура межплазмидных индуцируемых
коинтегратов, в клетках .i.
3.1.4.4.2. Структура продуктов разрешения межплазмидных
индуцируемых коинтегратов в клетках .i.
3.1.5. Функциональная активность транспозазы I элемента
.i в бактериях .i.
3.1.5.1 Клонирование и экспрессия 1 в составе рекомбинантной плазмиды 0 в клетках .i
3.1.5.2. Выживаемость бактерий рекомбинантных штаммов
.i 0 в условиях индукции I.
3.1.5.3. Транспозиция дефектного в клетках .i.
продуцен тах транспозазы .i .
3.1.6 Очистка транспозазы из бактерий .i рЕТ
3.1.7. Неопределенность границ повторяющейся.
последовательности i.
3.1.7.1. Приграничные последовательности
в плазмиде рМК2.
3.1.7.2. Приграничные последовательности
в плазмиде .
3.1.7.3. Особенности последовательности участка интеграции
рККЗ в ген хромосомы .i.
3.2. I индуцируемая изменчивость i
3.2.1. Разработка метода идентификации транспозиции
в клетках .i.
3.2.2. Перемещение в онерон v .i зависит.
от присутствия i в среде культивирования бактерий
возбудителя коклюша.
3.2.3. Выделение I индуцируемых фазовых вариантов .i
3.2.4. Оперон v влияет на транспозицию
в мутантах .i.
3.2.5. Биологическое значение событий инсерционой инактивации
оперона v в бактериях i. Новый подход к регистрации изменчивости возбудителя коклюша i vi и i viv.
3.3. Выделение и характери етика бактериофагов микроорганизмов
рода
3.3.1. Выделение и характеристика бактериофагов В.i и.
В. ii.
3.3.2. Выделение и характеристика бактериофагов из бактерий
В. i, резистентных к бактериофагу 4 В.i.
3.4. Конструирование тестсистем для идентификации возбудителя.
коклюша и его фазовых вариантов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Список литературы
ВВЕДЕНИЕ


Сниженная способность Р мутанта взаимодействовать с клетками млекопитающих i vi не привела к утрате их способности колонизировать респираторный факт мышей i viv. Клетки, несущие мутации иили Р, были способны колонизировать и размножаться в респираторном тракте мышей, в отличие от v бактерий ,5. Псртактин участвует во взаимодействии бактериальной клетки с интегринами макрофагов и лейкоцитов 4. Многочисленные исследования показали, что белок Р является протективным антигеном, который индуцирует образование специфических антител и защищает животных от заражения вирулентными штаммами . Добавление пертактина в бесклеточные коклюшные вакцины приводит к повышению е эффективности 9, , 5. Белок устойчивости к сыворотке . Следующим автотранспортером является белок , обеспечивающий устойчивость микроорганизмов рода к комплементу сыворотки ,. Механизм устойчивости не известен. Он содержит две , последовательности и два потенциальных сайта связывания для сульфатированного глюкоконыогата эукариотической клетки. У мутантов нарушено взаимодействие с эукариотической клеткой i vi и снижена вирулентность в опытах на животных , . Д. Считается, что секретируется, аналогично пертактину и другим автотранспортерам , . Гены Ьгк присутствуют в хромосомах всех представителей рода . Трахеальный колонизирующий фактор. Третий белок автотранспортной системы микроорганизмов рода получил название трахеальный колонизирующий фактор . Этот белок продуцируется клетками В. Получены экспериментальные результаты, указывающие на участие в колонизации клеток трахеи . Так же как и другие авготранспортирующиеся белки микроорганизмов рода ФГА, Р, , содержит последовательность и автотранспортный домен на Сконце . Экспрессия и Ьгк генов активируется на уровне транскрипции при участии v локуса , однако детали этого процесса не изучены. Трахеальный колонизирующий фактор и белок не входят в состав используемых бесклеточных вакцинных препаратов. Их протективньте свойства практически не изучены. Коклюшный токсин КТ сложный пяти компонентный токсин, состоит из Апротомера, обладающего АДФрибозилирующей активностью и Волигомера, который связывается с рецепторами эукариотической клетки и способствует прохождению Асубъединицы в цитозоль. Субъединицы 2 ,0 кДа, 3 ,0 кДа, 4 ,0 кДа и 5 ,0 кДа в молярном соотношении формируют Волигомер и вместе с Апротомером 1 субъединица ,0 кДа образуют молекулу нативного КТ 7. Определена последовательность оперона КТ и изучена его кристаллическая структура . КТ отводится ведущая роль в пато и иммуногенезе коклюша. Роль КТ в патогенезе обусловлена главным образом его ферментативной активностью. КТ катализирует АДФрибозилирование и инактивацию регуляторных ГТФсвязывающих белков бслков эукариотической клетки 7, 2, ИЗ. Когда КТ инактивирует белок, ингибируется аденилатциклаза и активируются К каналы. ГМФ фосфодиэстеразу в специфических фоторецепторах, 0 активирует К каналы, инактивирует Са2 каналы и активирует фосфолипазу 4. Биологический эффект, связанный с нарушением этих сигнальных путей, зависит от типа эукариотических клеток мишеней, и может проявляться в гистаминсенеибилизации, активации инсулиновой секреции и лимфоцитозе одному из синдромов коклюша 5. Несмотря на то, что с активностью КТ связывают проявления почти всех основных симптомов коклюша, полноценных доказательств, демонстрирующих функции КТ i vi и i viv в опытах на животных и при опосредованных исследованиях при заболевании людей до сих пор не получено. В конце х годов несколькими коллективами авторов было осуществлено клонирование и определение последовательности нуклеотидов оперона КТ, названного x 9,0 Установлено, что транскрипция всех пяти генов КТ i, 2, 3, 4 и 5 контролируется одним промотором, расположенным перед геном i. Геи каждой из субъединиц КТ содержит на 5конце сигнальную последовательность, что указывает на независимую секрецию субъединиц КТ в периплазму клетки 9,0. Гены, кодирующие КТ, присутствуют в геномах практически всех микроорганизмов рода , но КТ синтезируется только в клетках . Исключение составляют некоторые природные штаммы, так называемого комплекс IV . КТ 8. Коклюшный токсин секретируется через мембрану .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.200, запросов: 145