Гидролазы Bacillus intermedius : Выделение, свойства, локализация

Гидролазы Bacillus intermedius : Выделение, свойства, локализация

Автор: Шарипова, Маргарита Рашидовна

Год защиты: 2000

Место защиты: Казань

Количество страниц: 223 с. ил.

Артикул: 292819

Автор: Шарипова, Маргарита Рашидовна

Шифр специальности: 03.00.07

Научная степень: Докторская

Стоимость: 250 руб.

Содержание
Список сокращений.
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
I. Гидролитические ферменты бацилл.
1. Гуанилспецнфичные рибонуклеазы. КФ 3.1.4..
2. Щелочные фосфатазы. КФ 3.1.3..
3. Сериповые протеиназы. КФ 3.4..
II. Особенности белковою синтеза, секреции и спорообразования
у бацилл.
1. Секреция. Общие сведения
1.1. Сигнальные пептиды
1.2. Липопротеиновые сигнальные пептиды
1.3. Пропонтиды
1.4. Роль зрелой последовательности в секреции.
2. Компоненты аппарата секреции
2.1. Сигналузнающая частица.
2.2. Транслокация
2.3. Процессинг
2.4. Роль белка в секреции.
2.5. Роль РгеА белка в секреции
3. Освобождение белков в среду у бацилл. Роль клеточной стенки.
4. Синтез секретирусмых белков, связь с общим метаболизмом
и спорообразованием у бацилл
5. Роль полиаденилирования мРНК у бацилл.
Заключение.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
I. Выделение и характеристика внеклеточных гидролаз
1.1. Отбор штаммов .ii с высоким уровнем активности гидролаз и изучение оптимальных условий для продукции ферментов.
1.2. Выделение и характеристика секретнруемой щелочной фосфатазы
1.3. Выделение и характеристика секретируемой протенназы
II. Изучение клеточного топогенеза секретируемых гидролаз .ii
2.1. Внеклеточные гидролазы В. ii их соотношение
в клеточных фракциях и культуральной жидкости
2.2. Влияние условий культивирования на локализацию РНКазы
2.3. Влияние мутаций в структуре РНКазы на локализацию и
секрецию фермента
2.4. Влияние условий культивирования на локализацию
щелочной фосфатазы.
2.5. Влияние условий культивирования на локализацию протеиназы
III. Изучение физиологической функции гидролаз В. ii
3.1. Синтез гидролаз и спорообразование у В. ii
3.2. Получение мРНК из клеток В. ii и ее изучение
3.3. Взаимосвязь синтеза мРНК и синтеза гидролитических
ферментов Я ii
3.4. Изучение продуктов трансляции бактериальной полиАРНК
ОБСУЖДН1 1ИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
1. Сравнительная характеристика структуры, каталитических и физикохимических свойств исследуемых гидролаз В. ii
2. Особенности локализации и секреции гидролитических
ферментов В. ii
3. Физиологическая роль секретируемых гидролитических ферментов
В. ii.
Заключение.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Фосфатазы и с молекулярной массой . Да состояли из 0 и 9 аминокислот соответственно. В составе обоих белков превалировал лизин моль. Тем не менее, фосфатаза была более положительно заряженной в силу более высокого содержания аргинина и более низкого аспарагиновой и глутаминовой кислоты. Особенностью состава аминокислот являлось отсутствие цистеиновых остатков у этих фосфатаз. На основании кристаллической структуры фосфатазы К. i , , был проведен сравнительный анализ структуры фосфатаз бацилл, дрожжей и человека, которые показали ю гомологию . Важные для каталитической активности сайты связывания металлов, фосфатсвязывания являлись высоко консервативными для этих фосфатаз. Среди фосфатаз бацилл особый интерес представляют фосфатазы В. i . Эти бактерии имеют мультигенное семейство фосфатаз, аналогично В. . В присутствии Со2 В. продуцирует в среду в раз больше фосфатазы, чем другие бациллы, фермента эффективно секретируется в культуральную жидкость . Установлено, что молекула фосфатазы содержит Со3, который способен эффективно реактивировать апофермент. Тем не менее, фосфатаза В. Да, чем другие бактериальные фосфатазы кДа, и размеры е близки к размерам эукариотических фосфатаз. Эти данные могут указывать на путь эволюции бактериальных фосфатаз i . Секвеннрование гена щелочной фосфатазы В. фосфатаза показало, что он кодирует белок из 3 аминокислот с молекулярной массой кДа i . Последовательность обнаружила идентичности с фосфатазами и В. Сконцевая последовательность фосфатазы 1 увеличивала размеры молекулы фермента по сравнению с другими прокариотическими фосфатазами, не обнаруживала никакой гомологии с Сконцевыми участками эукариотических фосфатаз. Его функция пока не ясна. Предполагается, тем не менее, что Сконец может быть вовлечен в активацию белка. Сравнение аминокислотного состава этого фермента i . В. iii показало наибольшее сходство с мембраносвязанной фосфатазой, очищенной путем экстракции 1 М с клеточной мембраны. Аминокислотный анализ других изоферментов В. . Исходя из последовательности ДНК, соответствующая ей фосфатаза I содержит такое же количество пролина. В последовательности белка отсутствовали остатки цистсина, аналогично другим фосфатазам бацилл. концевая последовательность была более гидрофильна. . Различия домсна по размерам и последовательности могут отвечать за определенные свойства, например, белокбелковое взаимодействие. Показано, что поверхностная петля, соответствующая домену, определяла общую стабильность и конформацию изоферментов щелочной фосфатазы у млекопитающих i . Другим ферментом, представляющим интерес среди класса фосфатаз бацилл, является фосфатаза В. , ,. Особенностью этого фермента является присутствие фосфомоноэстеразной ФМЭ и фосфодиэстеразной ФДЭ активности. Авторы выделили белок ВС6 из фракции мембран клеток В. ВС6 мембраносвязанная фосфатаза. Второй белок, 1, был изолирован из культуральной жидкости мутанта В. ВС6, 1, который, в отличие от исходного штамма секретировал фосфатазу в среду. Обе фосфатазы, ВС6 и 1, обладали ФМЭ и ФДЭ активностями, которые были максимальны при 9. , а. Молекулярная масса ВС6 и 1 составляла кДа и каждый из ферментов состоял из единственной полипептидной цепи. Соотношение двух активностей на этапах очистки было постоянным. Обе активности полностью ингибировались Фн и арсеналом, активировались ионами Са2. Диапазон стабильности 6. ЭДТА, условия хранения фермента одинаковы для ФМЭ и ФДЭ. Авторы заключили, что белок обладает двумя активностями и имеет в структуре один или разные активные центры , а. Антитела к I давали реакцию в отношении ВС6, подтверждая, что белки идентичны , 6. Точечная мутация в локусе приводила к одновременной потере ФМЭ и ФДЭ активностей.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.200, запросов: 145