Генетические механизмы лекарственной устойчивости Mycobacterium Tuberculosis

Генетические механизмы лекарственной устойчивости Mycobacterium Tuberculosis

Автор: Липин, Михаил Юрьевич

Шифр специальности: 03.00.07

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2004

Место защиты: Оболенск

Количество страниц: 141 с. ил.

Артикул: 2626288

Автор: Липин, Михаил Юрьевич

Стоимость: 250 руб.

Генетические механизмы лекарственной устойчивости Mycobacterium Tuberculosis  Генетические механизмы лекарственной устойчивости Mycobacterium Tuberculosis 

СОДЕРЖАНИЕ
ПРИНЯТЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ.
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Эпидемиология лекарственноустойчивого туберкулза
в России и за рубежом
1.2. Методы видовой идентификации М. i
1.3. Противотуберкулзные средства.
1.4. Фенотипические методы определения
лекарственной устойчивости М. i.
1.5. Генотипические методы определения
лекарственной устойчивости М. i.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Источники клинических штаммов М. i.
2.2. Определение видовой принадлежности микроорганизмов
2.2.1. Рост на среде с салицилатом натрия
2.2.2. Тест на наличие термолабильной каталазы.
2.2.3. Ниациновый тест.
2.3. Определение лекарственной устойчивости i vi.
2.4. Определение вирулентности штаммов М. i для мышей.
2.5. ПЦР секвенирование генов , i, , , и .
2.6. Статистические методы.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Характеристика пациентов источников микобактериальных культур.
3.2. Видовая принадлежность микобактериальных культур
3.3. Лекарственная устойчивость клинических штаммов М. i
3.3.1. Распространнность лекарственноустойчивого туберкулза среди городского населения г. Тула, г. Богородицк, г. Павлово, г. Дзержинск
3.3.2. Сравнение распространнности лекарственноустойчивого туберкулза среди городского населения г. Тула и заключнных бывших жителей г. Тула
3.3.3. Лекарственная устойчивость штаммов М. i
от впервые выявленных больных в г. Тула, г. Богородицк и п. Озерки.
3.3.4. Сравнение лекарственной чувствительности штаммов М. i
от впервые выявленных и хронических больных г. Тула, г. Богородицк.
3.3.5. Приобретение дополнительной лекарственной устойчивости
возбудителем туберкулза в результате лечения больных
3.4. ПЦРсеквенирование генов , i, гроВ, рпсА, и .
3.4.1. Фильтрация изображения данных секвенирования
3.4.2. Секвенирование генов и i
3.4.3. Секвенирование гена гроВ
3.4.4. Секвенирование гена рпсА
3.4.5. Секвенирование генов кодоны и
3.4.6. Секвенирование гена кодоны
3.5. Связь мутаций с уровнями лекарственной устойчивости
клинических штаммов М. i
3.6. Оценка количества штаммов М. i с неспецифической МЛУ.
3.7. Связь лекарственной устойчивости клинических штаммов
М. i с вирулентностью для мышей линии
3.8. Разработка метода определения мутаций в ДНК М. i блокированием ПЦР полипегттидными нуклеиновыми кислотами.
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Характеристика пациентов источников микобактериальных культур.
V 4.2. Лекарственная устойчивость клинических штаммов М. i
4.3. Генетические механизмы устойчивости М. i к изониазиду,
рифампицину, пиразинамиду, стрептомицину и канамицину.
4.4. Связь лекарственной устойчивости с вирулентностью
клинических штаммов М. i.
4.5. Метод определения мутаций в геномной ДНК М. i блокированием ПЦР полипептидными нуклеиновыми кислотами.
4.6. Метод фильтрации изображения данных секвенирования
I СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ 2

I
I

ВВЕДЕНИЕ
Распространение туберкулза является одной из самых острых проблем здравоохранения как в экономически развитых, так и развивающихся странах. У одной трети населения Земли обнаруживаются признаки инфицирования М. i 2. Каждый год у 8 миллионов человек развивается активная форма туберкулза, почти 3 миллиона человек умирают от этой болезни, а в развивающихся странах каждый пятый случай смерти связан с туберкулзом 6.
Особую опасность представляет повсеместное распространение лекарственноустойчивого ЛУ туберкулза. Возникновение лекарственноустойчивого туберкулза является одновременно причиной и следствием неэффективного лечения больных 5. Эффективность лечения больных туберкулзом с множественной лекарственной устойчивостью МЛУ не превышает , а стоимость почти на два порядка выше стоимости лечения лекарственночувствительного туберкулза. В экономически развитых странах распространение лекарственноустойчивого туберкулза достаточно эффективно сдерживается продуманными противотуберкулзными мерами. Например, в Япониизаболеваемость туберкулзом с множественной лекарственной устойчивостью составляет 0,8 3. Основную угрозу для развитых стран представляет иммиграция больных туберкулзом из развивающихся стран 4, 9 и широкое распространение ВИЧ , 1. Напротив, в социально неблагополучных странах наблюдается тенденция вытеснения штаммов лекарственно чувствительного туберкулза штаммами лекарственноустойчивого туберкулза. Например, распространнность туберкулза с множественной лекарственной устойчивостью в Непале составляет , а в Гуджарате Индия ,8 7. Такая тенденция обусловлена наличием в социально неблагополучных странах следующих факторов
1 лечение больных ограниченным количеством противотуберкулзных препаратов так, например, назначение только одного препарата при лечении впервые выявленных больных
2 назначение противотуберкулзных препаратов без учта лекарственной устойчивости штаммов, что допускается даже в программе для впервые выявленных больных, если отсутствуют данные по лекарственной чувствительности штаммов
3 отсутствие контроля со стороны лечащего персонала за примом препаратов пациентами, что часто приводит к досрочному прекращению курса лечения, а также широко практикующееся самолечение
4 недостаточное материальнотехническое обеспечение клинических лабораторий, что затрудняет не только определение лекарственной устойчивости штаммов, но и раннюю постановку диагноза ,
5 недостаточное финансирование закупки дорогих и эффективных противотуберкулзных препаратов
6 наличие огромной системы исправительных учреждений, заболеваемость в которых зачастую в раз превышает среднестатистическую, и которые служат резервуаром туберкулзной инфекции для всего населения
7 отсутствие в некоторых странах эффективной и разумной единой противотуберкулзной стратегии в системе здравоохранения 4, что делает борьбу с туберкулзом неэффективной даже при наличии достаточного финансирования.
8 низкий жизненный уровень населения, и, как следствие, пониженный иммунитет к туберкулзной инфекции, что сильно облегчает селекцию и распространение лекарственноустойчивых штаммов .
9 применение некачественного рифампицина с низкой биологической доступностью, произведнного в развивающихся странах 7.
система льгот пациентам, получившим инвалидность по туберкулзу, не связанная с соблюдением предписаний врачей, что часто приводит к прекращению лечения сразу же после подтверждения группы инвалидности .
В случае с лечением туберкулза лучше не делать ничего, чем гдето допустить небрежность, поскольку результатами просчтов в лечении являются не только невылеченные больные с интоксикациями от противотуберкулзных средств и потраченные впустую средства налогоплательщиков, но и появление штаммов М. i с множественной лекарственной устойчивостью 3.
Общепринятые к настоящему времени методы определения лекарственной устойчивости М. i включают процедуры выделения штаммов и выращивания их на среде, содержащей противотуберкулзное средство, и занимают от 3 до недель 7, в течение которых больному не может быть назначен обоснованный режим химиотерапии. В то же время устойчивость к основным противотуберкулзным препаратам большинства клинических штаммов М. i обусловлена мутациями в ДНК, выявить которые можно в течение нескольких часов.
Распространнность лекарственноустойчивого туберкулза имеет свои региональные особенности. Несмотря на то, что к настоящему времени в литературе имеются многочисленные данные по вкладу различных мутаций в формирование лекарственноустойчивого туберкулза за рубежом, аналогичных данных по регионам России нет. А такие данные важны не только для выяснения молекулярных механизмов устойчивости микобактерий к противотуберкулзным препаратам, но и для разработки диагностических тестов с использованием
полимеразной цепной реакции ПЦР, способных выявлять точечные мутации в геномной ДНК микобактерий, выделенных непосредственно из мокроты больных.
Актуальность


В случае с лечением туберкулза лучше не делать ничего, чем гдето допустить небрежность, поскольку результатами просчтов в лечении являются не только невылеченные больные с интоксикациями от противотуберкулзных средств и потраченные впустую средства налогоплательщиков, но и появление штаммов М. Общепринятые к настоящему времени методы определения лекарственной устойчивости М. В то же время устойчивость к основным противотуберкулзным препаратам большинства клинических штаммов М. ДНК, выявить которые можно в течение нескольких часов. Распространнность лекарственноустойчивого туберкулза имеет свои региональные особенности. Несмотря на то, что к настоящему времени в литературе имеются многочисленные данные по вкладу различных мутаций в формирование лекарственноустойчивого туберкулза за рубежом, аналогичных данных по регионам России нет. ПЦР, способных выявлять точечные мутации в геномной ДНК микобактерий, выделенных непосредственно из мокроты больных. Актуальность. Актуальность работы определяется исключительной важностью наличия данных о распространнности лекарственноустойчивого туберкулза и генетических механизмах лекарственной устойчивости М. ДНК микобактерий для разработки и реализации эффективных противотуберкулзных программ. Цель диссертационной работы определение геномных мутаций у изониазид, рифампицин, пиразинамид и стрептомицин устойчивых клинических штаммов М. ДНК М. Анализ распространнности лекарственноустойчивого туберкулза среди городского населения Тула, Богородицк, Дзержинск, Павлово и заключнных Озерки. Определение вклада мутаций в генах , гроВ, рпсА, и М. Разработка метода быстрого определения точечных мутаций в ДНК М. ПЦР полипептидными нуклеиновыми кислотами ПНК. Научная новизна результатов. Выявлена высокая распространнность лекарственноустойчивого возбудителя туберкулза среди больных туберкулзом лгких средней полосы России количество клинических штаммов М. Выявлены не описанные ранее мутации в генах , гроВ и рпсА М. Показано наличие общих механизмов устойчивости у 1,8 штаммов М. Разработан алгоритм фильтрации изображений секвенирования ДНК на рентгеновской плнке. Выявлено отсутствие пониженной вирулентности у лекарственноустойчивых клинических штаммов М. Разработан оригинальный метод быстрого выявления точечных мутаций в ДНК М. Научнопрактическая значимость работы. Полученные данные о вкладе отдельных мутаций в формирование лекарственноустойчивого туберкулза необходимы для разработки и применения любых диагностических систем по определению мутаций, вызывающих лекарственную устойчивость у М. Выявление не описанных ранее мутаций в генах , гроВ и рпсА и штаммов с неспецифической множественной лекарственной устойчивостью дополняет известный набор механизмов возникновения лекарственной устойчивости у М. Разработанный метод фильтрации изображений может быть применн в системах обработки информации в разных областях науки и техники. Полученные данные о распространении лекарственноустойчивого туберкулза путм инфицирования людей штаммами М. М. i в процессе лечения могут служить основанием для разработки более эффективной противотуберкулзной программы. Разработанный метод выявления точечных мутаций в геноме М. ПНКблокирования ПЦР может применяться в клинической практике. Положения, выносимые на защиту. Установлено, что основным генетическим механизмом устойчивости клинических штаммов М. России к изониазиду являются мутации в 5 кодоне гена ,,6, к рифампицину мутации в 6, 6 или 1 кодонах гена гроВ ,,8, к стрептомицину мутации в кодоне гена или 6 нуклеотиде гена . Разработанный метод фильтрации изображений повышает разрешающую способность ПЦР секвенирования по Сэнгеру. Разработанный метод блокирования ПЦР полипегттидными нуклеиновыми кислотами позволяет быстро выявлять мутации в ДНК М. Аннотация диссертационной работы по главам. В первой главе представлен литературный обзор по эпидемиологии лекарственноустойчивого туберкулза, противотуберкулзным средствам, механизмам лекарственной устойчивости М. М. i. Во второй главе описаны использованные в работе материалы клинические штаммы М. ПЦРсеквенирование генов , i, гроВ, рпсА, и , определение вирулентности клинических штаммов М.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.175, запросов: 145