Рекомбинантные геномы вакцинно-родственных штаммов полиовируса

Рекомбинантные геномы вакцинно-родственных штаммов полиовируса

Автор: Короткова, Екатерина Александровна

Шифр специальности: 03.00.06

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2006

Место защиты: Москва

Количество страниц: 186 с. ил.

Артикул: 3306325

Автор: Короткова, Екатерина Александровна

Стоимость: 250 руб.

Оглавление
Список сокращений
Введение
Цели и задачи исследования
Научная новизна и практическая значимость работы
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Таксономическое положение нолновируса и краткая
систематика семейства ivii
1.2. Молекулярнобиологическая характеристика полиовируса
1.2.1. Структура и состав полиовирусной частицы
1.2.2. Строение генома полиовируса
1.2.3. Жизненный цикл полиовируса
1.2 3.1 Проникновение вируса в клетку
1 2 3.2. Трансляция геномной цепи РНК
1.2 3 3. Образование зрелых вирусных белков
I 2 3.4 Переключение с трансляции на репликацию РНК
1.2.3.5 Образование пуклеотидбелковой затравки для
синтеза РНК
1.2.3.6 Синтез цепей РНК
. 2.3.7. Синтез цепей РНК
1.2.3.8 Сборка вирусных частиц
1.2.4. Функции неструктурных вирусных белков
1.2.5. Цисэлементы РНК полиовируса
1.2.5.1. i
1.2.5. I
1.2.5 1. i
1.2.5.1. i
1.3. Основные механизмы изменчивости генома полиовируса
1.3.1. Мутационная изменчивость
1.3.2. Рекомбинационная изменчивость
1.3.2.1. Репликативная модель рекомбинации
1.3.2 2. Нерепликативная модель реко мбииации
1.4. Эволюция полновируса
1.4.1. Гетерогенность вирусной популяции
1.4.2. Негативная и позитивная селекции
1.4.3. Нейтральная эволюция
1.4.4. Скорость фиксации мутаций
1.5. Паралитический полиомиелит
1.5.1. Патогенез
1.5.2. История полиомиелита
1.5.3. Создание полиовирусной вакцины
1.5.4. Вакцинноассоциированный паралитический полиомиелит
1.6. Вакциинородственные штаммы полновируса
1.6.1. Фенотипические и генетические особенности вакцинных штаммов
1.6.2. Мутационная изменчивость вакцинных штаммов полновируса
1.6 2.1. Накопление мутаций штаммами Сэбина i vi
1.6 2.2. Накопление мутаций штаммами Сэбина i viv
1.6.3. Рекомбинационная изменчивость вакцинных штаммов полновируса
1.6 3.1. Методы вынвзения рекомбинантов
1.6 3.2 Частота выделения межтиповых
рекомбинантных штаммов
1.6 3 3. Организация геномов рекомбинантных штаммов
1.6 3 4. Рекомбинация между вакциннородственными и дикими штаммами полиовируса или энтеровируса кластера С
1.6.4. Сильно измененные штаммы полиовируса вакцинного происхождения
. iVV
1.6 4.2. VV
1.7. Программа ВОЗ глобальной ликвидации полиомиелита в мире
Постановка задачи
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Штаммы полиовнруса
2.2. Молекулярные методы исследования полиовирусных
штаммов
2.2.1. Подтверждение вакцинного происхождения с помощью ПЦР
2.2.2. Выделение РЫК
2.2.3. Обратная транскрипция
2.2.4. Полимеразная цепная реакция
2.2.5. ПДРФ анализ
2.2.6. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.3. Методы молекулярного клонирования
.1. Г и дрол из ДНК эндонуклеазами
.2. Аналитический и препаративный электрофорез в агарозном геле
2 Очистка фрагментов ДНК
2.3.4. Лигирование
2.3.5. Трансформация культуры клеток плазмидной ДНК
2.3.6. Размножение бактериальных колоний и выделение
плазмидной ДНК
2.4. Получение рекомбинантного и мутантных полиовирусов
2.4.1. Получение рекомбинантной плазмидной конструкции
2.4.2. Внесение мутаций в плазмиду рТавЗ
2.4.3. Внесение мутаций в плазмиду рУБ 1 Т7 1С0Т
2.5. Получение полноразмерных транскриптов
2.6. Трансфекция и заражение первичной культуры клегок Усго
2.7. Использованные компьютерные программы
Глава 3. Результаты
3.1. Исследование эпидемиологических ситуаций, связанных с рекомбинантными штаммами полиовнруса вакцинного происхождения
3.1.1. Независимая эволюция полиовирусных популяций
в одном организме
3.1.2. Рекомбинация показатель родства между штаммами полиовнруса
3 Длительная циркуляция вакциннородственных
рекомбинантных штаммов полиовнруса
3.1.4. Циркуляция вакциннородственных штаммов полиовируса
в период временного прекращения вакцинации от полиомиелита
3.1.5. Рекомбинанты между штаммами вакцинного и дикого
происхождения
3.2. Анализ вакциннородственных рекомбинантных штаммов
полиовируса, исследование причины их селекции
3.2.1. Выявление рекомбинантов среди природных изолятов
полиовируса
3.2.2. Определение районов рекомбинации
3.2.3. Предпочтительные схемы рекомбинации
3.2.4. Горячие и холодные районы рекомбинации
3.2.5. Вторичная структура РНК вакцинных штаммов полиовируса
в районах рекомбинации
3 2.5 1. Вторичная структура РНК в районах
горячих точек перекреста
3.2.5 2 Положение точно определенных точек перекреста
на элементах вторичной структуры
3.2.6. Возможная причина селекции рекомбинантов
3.2.7. Проверка гипотезы о селективном преимуществе рекомбинантов
и о селекции против аргинина в м положении белка ЗА
Глава 4. Обсуждение результатов
4.1. Значение эпидемиологического исследования
природных рекомбинантов
4.1.1. Одинаковая рекомбинантная организация геномов
показатель родства между изолятами
4.1.2. Фрагменты разного возраста и происхождения в составе геномов вакциннородственных рекомбинантных штаммов полиовируса
4.1.3. Неопределенные УЭРУ
4.1.4. Рекомбинантная организация геномов дериватов вакцины
4.2. Частота выявления рекомбинантов среди природных вакциннородственных изолятов полновнрусов трех серотнпов
4.3. Роль рекомбинации в эволюции полиовирусных популяций
4.3.1. Влияние рекомбинации на фенотип полиовируса
4.3.2. Возможность влияния рекомбинационных перестроек генома
на скорость и точность репликации
4.3.3. Вероятность количественного преобладания рекомбинантов
в популяциях полиовирусов
4.3.4. Возможное влияние особенностей механизма рекомбинации
на организацию геномов рекомбинантных штаммов
Выводы
Список литературы


Области связывания находятся не только в глубине каньона, но также граничат и даже частично пересекаются с антигенными сайтами , а. Возможно, благодаря большей по сравнению с некоторыми другими пикорнавирусами площади взаимодействия полиовирусной частицы с рецептором, затрагивающей и районы связывания антител, существуют только три серотипа полиовируса, а не сотня, как, например, у риновируса Существенное изменение структуры антигенного сайта, которое позволило бы полиовирусу уйти от иммунного ответа, скорее всего, отразилось бы и на его способности взаимодействовать с рецептором 5 . Геном полиовируса представлен одноцепочечной РНК позитивной соответствующей мРНК полярности, состоящей примерно из нуклеотидов, в выпрямленном состоянии имеющей длину около 2,5 мкм. Да i . Кодирующая часть нуклеотидов с 5 и Зконцов фланкирована нетранслируемыми районами 5НТР и ЗНТР, содержащими примерно 0 и нуклеотидов, соответственно. К 5концу РНК ковалентно присоединн небольшой вирусный белок V, кэпструктура отсутствует . Зконец генома полиаденилирован . Рис. Структура генома полиовируса и схема расщепления полипротеина. В результате полиовирусной протеолитической активности полипротеинпредшественник в конечном итоге разрезается на зрелых белков Напесак е1 а1. Х а1. Рис. Кроме того, некоторые промежуточные белковые формы также являются отдельными функциональными единицами. Кодирующую область генома подразделяют на 3 части. Район Р1, соответствующий Ыконцевому фрагменту полипротеина, кодирует структурные компоненты вирусного капсида белки УР4, УР2, УРЗ и УР1. Районы Р2 и РЗ кодируют, соответственно, неструктурные белки 2А, 2В, 2С и ЗА, ЗВ, ЗС, ЗЭ, которые выполняют множество функций, прямо или косвенно обеспечивающих эффективную репродукцию полиовируса. В настоящее время известен единственный естественный хозяин полиовируса человек. В экспериментальных условиях полиовирусом можно заразить шимпанзе и представителей некоторых других видов обезьян i, . Также были обнаружены штаммы полиовируса, после внутрицеребрально о введения которых развивался паралич у мышей i ,
Репродукция полиовнруса происходит в клеточной цитоплазме Жизненный цикл вируса полиомиелита от заражения клетки до ее лизиса один из наиболее коротких в экспериментальных условиях при С длится около часов . Однако лизис не единственно возможный результат заражения полиовирусом клетки. Было показано, что полиовирусная инфекция может провоцировать клеточный апоптоз . Кроме того, некоторые штаммы полиовируса способны персистировать в клетках, не вызывая их гибель i . Взаимодействие полиовирусной частицы с поверхностным клеточным белком 5 приводит к конформационной перестройке капсидных белков вириона отделяется внутренний структурный белок V4, вытесняется наружу находившийся внутри частицы конец белка V1 i , Предполагается, что при помощи V4 конец белка V1 внедряется в клеточную мембрану, формируя тоннель, через который вирусная РНК попадает в цитоплазму клетки . После проникновения в клетку вирусная РНК транслируется с использованием клеточного трансляционною аппарата. Инициация трансляции происходит по кэпнезависимому механизму. I i i i, образованным несколькими шпилечными структурами доменами с одноцепочечными и двуцепочечными участками РНК i . После посадки малой субъединицы рибосомы на 1, к ней присоединяется большая субъединица, и далее рибосома сканирует матрицу до инициаторного кодона или сразу переносится на него Роугу . Для успешной инициации трансляции вирусной РНК необходим еще целый ряд клеточных белков почти все канонические факторы инициации трансляции эукариот . Да полипиримидинсвязывающий белок РТВ или р . Да белок автоантиген vi . Да полицитидилсвязывающий белок РСВР 2 . С Ii . I . V1, V3 и V0 предшественник белков V4 и V2 . Р2 и РЗ в равной степени способны осуществлять протеазы ЗС и
3 . Считается, что каждая геномная молекула РНК полиовируса должна быть протранслирована, и только после этого возможна ее репликация. Было показано, что для репликации полиовирусной РНК необходимы вирусные белки, синтезированные i i, чем, возможно, и объясняется требование предварительной трансляции цепи i .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.402, запросов: 145