Механизм вирусспецифического действия препарата Арбидол

Механизм вирусспецифического действия препарата Арбидол

Автор: Ленева, Ирина Анатольевна

Шифр специальности: 03.00.06

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2005

Место защиты: Москва

Количество страниц: 303 с. ил.

Артикул: 2900949

Автор: Ленева, Ирина Анатольевна

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА I. Структура и репродукция вируса гриппа
ГЛАВА II. Противогриппозные химиопрепараты этиотропного действия
II. ГАмантадин и ремантадин
И.2.3анамивир и озельтамивир
ГЛАВА Ш.Арбидол.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА IV. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1У.1 .Клетки.
1У.2. Вирусы.
1У.З. Химиотерапевтические препараты и химические соединения
1У.4. Определение цитотоксического действия соединений
IV. 5. Изучение противовирусной активности препаратов с
использованием метода ингибирования цитопатического действия
вирусов
1У.6.Изучение противовирусной активности препаратов с использованием метода ингибирования бляшкоообразующей
активности БОА вируса гриппа.
1У.7.Изучение противовирусной активности соединений методом иммуноферментного анализа ИФА в культуре клеток МОСК в
отношении вирусов гриппа А, В и С
1У.8.Изучение противовирусной активности препаратов методом
ИФА в культуре клеток Ыер2 в отношении РСВ.
IV.9. Изучение противовирусной активности препаратов методом ИФА в культуре клеток в отношении
аденовируса человека.типа 5.
IV. . Изучение противовирусной активности арбидола методом
ИФА в зависимости от времени добавления препарата.
IV Определение содержания арбидола в клетках, клеточных
мембранах и внеклеточной среде
IV. . Концентрирование и очистка вирионов вируса гриппа
IV. . Изучение транскриптазной активности рибонуклео
протеида РНП вируса гриппа
IV. . Анализ геномных РНК вРНК вируса гриппа в
полиакриламидном геле ПААГ
IV. . Анализ вирусспецифических белков вируса гриппа в
полиакриламидном геле ПААГ
IV Определение действия препаратов на нейраминидазную
активность вируса гриппа
IV. . Определение действия арбидола на гемолиз эритроцитов,
индуцируемый вирусом гриппа при рН5,
IV. . Определение действия арбидола на ранние стадии
вирусной репродукции вируса гриппа с использованием метода.
рассвечивания флуоресценции РФ
Синтез флуоресцентного зонда
БМечение вируса.
Измерение связывания вируса с клетками
Г Измерение слияния вирусной липидной мембраны с мембранами клеток
IV. . Изучение гемолиза эритроцитов, индуцируемого вирусом
дикого типа и арбидолрезистентными мутантами
IV Определение конформационного перехода НА из нативного состояния в состояние при низком
с использованием конформационных антител КАТ
1V Определение конформационных изменений НА с
использованием конформационных антител КАТ
IVОпределение конформационных изменений НА в
зависимости от времени инкубации клеток с препаратом.
IVОпределение первичной последовательности генов,
кодирующих НА и М белки.
IV Изучение комбинированного действия противогриппозных препаратов методом ИФА
IV Статистическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ
ГЛАВА V. Изучение противовирусной активности арбидола с использованием метода ИФА.
V Изучение цитотоксического действия арбидола в культурах
клеток различного происхождения.
V.2. Отработка условий детекции репродукции вируса гриппа А и В
в культуре клеток
V.3. Определение возможности вирулицидного действия
арбидола
V.4. Влияние арбидола на репродукцию вируса гриппа А, В и С в
культуре клеток
V.5. Влияние различных концентраций арбидола на репродукцию вирусов гриппа ЛПуэртоРико8 , ЛЯпония5 и ВЛи
в культуре клеток
V.6. Влияние арбидола на репродукцию различных антигенных серотипов вируса гриппа А человека в культуре клеток
V.7. Влияние арбидола на репродукцию в культуре клеток
вирусов гриппа птиц А подтипов НА Н5,Н6,Н9.
V.8. Влияние арбидола на репродукцию ремантадинчувствительного и ремантадинрезистентных вирусов
гриппа А в культуре клеток
V. 9. Сравнение действия арбидола на репродукцию вируса
гриппа ААичи2 в клетках и V.
V Влияние арбидола на различные стадии репродукции
вирусов гриппа А и В в культуре клеток
V. .Сравнительное изучение влияния арбидола и других противовирусных препаратов на репродукцию вирусов
гриппа А в культуре клеток .
V Отработка детекции экспрессии РСВ и аденовируса типа 5 в
культурах клеток.
V Изучение влияния арбидола, рибавирина и рибамидила
на репродукцию и аденовируса в культурах клеток.
V.Н.Заключение .
ГЛАВА VI. Изучение противовирусной активности соединений в
ряду индолов
VI. 1. Влияние аналогов арбидола на репродукцию вируса гриппа
АЯпония5 в культуре клеток
VI.2. Влияние аналогов арбидола на репродукцию РСВ в
Культуре клеток Нер2.
VI.3. Заключение
ГЛАВА VII. Изучение зависимости эффекта арбидола от времени контакта с клеточной культурой до инфицирования
VII. 1. Изучение кинетики действия арбидола на вирусную
репродукцию
VII.2. Изучение распределения арбидола в клетках, клеточных мембранах и внеклеточной среде.
VII.3. Заключение
ГЛАВА VIII. Изучение действия арбидола на различные стадии вирусной репродукции
VIII. 1. Изучение действия арбидола на вирусспецифические
синтезы.
А Действие арбидола на транскриптазную активность
РНП вируса гриппа i vi
Б . Действие арбидола на транскрипцию вирионных РНК.
В. Действие арбидола на вирусную трансляцию.
УШ.2. Изучение действия арбидола на нейраминидазную
активность вируса гриппа
УШ.З.Изучение действия арбидола на ранние стадии
вирусной репродукции
А. Изучение влияния арбидола на адсорбцию вируса
гриппа.
Б. Изучение влияния арбидола на процесс проникновения вируса гриппа внутрь клеток.
а Изучение действия арбидола на слияние липидной оболочки вируса с эритроцитами при 5,5.
б. Использование флуоресцентной метки для
количественной оценки слияния липидной оболочки
вируса с плазматической мембраной клеток
при рН5,0 и мембранами эндосом внутри клеток при
вИзучение действия арбидола на слияние липидной оболочки вируса с плазматическими мембранами клеток
при рН5,0 и мембранами эндосом при рН7,4.
УШ.4. Изучение действия аналогов арбидола, обладающих
различной противовирусной активностью, на эндоцитоз
вируса гриппа.
А. Изучение действия метаболитов арбидола на эндоцитоз вируса гриппа и сравнение с их противовирусной
активностью в культуре клеток.
Б. Изучение действия некоторых аналогов арбидола на эндоцитоз вируса гриппа и сравнение с их противо
вирусной активностью в культуре клеток
VIII.5. Заключение
ГЛАВА IX. Изучение влияния арбидола на репродукцию реассортантов, имеющих различный набор генов, и мутантов АВЧПВейбридж, имеющих мутации в НА.
IX. 1. Влияние арбидола на вирусную репродукцию
реассортантов между вирусами АВЧПВейбридж и
АСингапур1
IX.2. Влияние арбидола на вирусную репродукцию мутантов, резистентных к различным ингибиторам вируса хрипла и обладающих НА А ВЧП Вейбридж Н7.
IX.3. Заключение
ГЛАВА X. Изучение возможности получения мутантов, резистентных к арбидолу, и изучение их свойств
X. 1. Получение арбидолрезистентных мутантов
Х.2. Характеристика арбидолрезистентных мутантов
Изучение действия арбидола на репродукцию арбидолрезистентных мутантов и гемолиз эритроцитов, индуцируемый этими мутантами
а с использованием метода клеточного ИФА
б с использованием метода ингибирования БОА вирусов
в с использованием метода ингибирования гемолиза эритроцитов
Х.З. Изучение зависимости слияния вирусной липидной мембраны с клеточными мембранами, индуцированного вирусом дикого типа 7а и арбидолрезистентными мутантами.
Х.4. Изучение рНзависимости гемолитической активности вируса
дикого типа 7а и арбидолрезистентных мутантов.
Х.5. Изучение зависимости конформационных изменений НА вируса дикого типа 7а и арбидолрезистентных
мутантов.
Х.б.Определение первичной последовательности гена,
кодирующего НА арбидолрезистентных мутантов и вируса дикого типа 7а.
X.7. Заключение
ГЛАВА XI. Изучение влияния арбидола на конформационные изменения НА вируса гриппа.
XI. 1.Изучение влияния арбидола на конформационные
изменения НА вируса дикого типа и арбидолрезистентных
мутантов
Х1.2. Влияние арбидола на конформационные изменения НА
амантадинрезистентных мутантов
Х1.3. Влияние времени инкубации арбидола с НА вируса гриппа на его конформационные изменения.
XI. 4. Заключение.
ГЛАВА XII. Изучение влияния арбидола на репродукцию вируса гриппа при сочетании с другими препаратами в культуры клеток МБСК
XII. 1. Изучение действия арбидола в сочетании с амантадином
и ремантадином в культуре клеток с использованием
ХП.2. Изучение эффекта арбидола в сочетании с занамивиром и
карбоксилатом озельтамивира.
А.Изучение влияния времени экспозиции занамивира и карбоксилата озельтамивира с клетками МОСК. на
репродукцию вируса гриппа АСингапур1
Б.Влияния времени добавления препаратов при изучении комбинированного действия арбидола с карбоксилатом
озельтамивира в культуре клеток МОСК
ХП.З. Изучение эффекта арбидола в сочетании с рибавирином и
рибамидилом
ХНА Изучение эффекта арбидола в сочетании с анальгином и
ацетилсалициловой кислотой
XII.5. Заключение
ГЛАВА ХШ.ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВНА гемагглютинин, обработанный бромелайном ИФА иммуноферментный анализ НА гемагглютинин
НА1 большая субъединица гемагглютинина
НА2 малая субъединица гемагглютинина
нейраминидаза
и М2 мембранные белки
ИФН интерферон
РНП рибонуклеопротеид
иРНК информационная РНК
вРНК вирионная РНК
кРНК комплементарная РНК
ИЭ индекс эффективности
ОРВИ острые респираторные вирусный инфекции
ОП оптическая плотность
МКА моноклональные антитела
КАТ конформационные антитела
РСВ респираторносинцитиальный вирус
фосфатносолевой буфер
ПААГ полиакриламидный гель
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
МЕМ минимальная среда Игла
ЦПД цитопатическое действие
МИК минимальная ингибирующая концентрация
ЦТД цитотоксическая доза
БОА бляшкообразующая активность
ХТИ химиотерапевтический индекс
ХТТ 2,3бис2метокси4нитро5сульфофенил2Нтетразолий5карбоксианимид
ТЦЦ5о тканевая цитопатическая доза РФ рассвечивание флуоресценции мкгмл микрограмм милилитр обмин. обороты минута мкМ микромоль
ВВЕДЕНИЕ


Кроме того, вакцинация не всегда эффективна и безопасна для лиц пожилого возраста и пациентов с нарушениями функций иммунной системы 2,0,9,7. В связи с вышеизложенным особую важность и актуальность приобретает проблема разработки и применения препаратов для лечения и профилактики гриппа. Арсенал средств, используемых для облегчения течения гриппозной инфекции, охватывает практически все возможные способы влияния на инфекционный процесс и включает в себя химиопрепараты этиотропного действия, вирулицидные препараты, средства иммунокоррегирующей, патогенетической и симптоматической терапии. К средствам патогенетической и симптоматической терапии, применяемым при комплексном лечении гриппа, относятся препараты, оказывающие жаропонижающее и противовоспалительное действия, улучшающие функции легких и бронхов, а также десенсилибилизирующие препараты аспирин, эффералган, панадол, колдрекс, бутадион, метиндол, бронхолитин, солутан, тавегил, диазолин и др В основе действия вирулицидных препаратов лежит инактивация внеклеточного вируса. К известным вирулицидным препаратам, применяемым для лечения и профилактики гриппозной инфекции, относятся теброфен, флореналь, оксолиновая мазь и другие ,,. Особенно широкое распространение получила оксолиновая мазь, обладающая вирулицидной активностью в отношении миксо и риновирусов, а также вируса герпеса. Для профилактики гриппа используют 0, мазь оксолина. ИФН второе поколение и гибридные , синтетические или мутантные ИФН третье поколение . Механизм действия ИФН заключается в индукции синтеза протеинкиназы, фосфорилирующей один из инициирующих факторов трансляции, после чего этот фактор не может обеспечить образование инициирующего комплекса. Избирательное подавление трансляции вирусных матриц обусловлено либо большей чувствительностью вирусной системы трансляции к фосфорилированию инициирующего фактора, либо специфическим выключением трансляции в зараженных клетках. В обработанных интерфероном клетках индуцируется синтез фермента, синтезирующего олигоадениловую кислоту Асинтетазы, которая вызывает активизацию латентных нуклеаз, разрушающих свободные вирусные иРНК. В результате те вирусные РНК, которые не смогли связаться с рибосомами, подвергаются разрушению нуклеазами. Подавление ИФН стадии инициации трансляции и разрушение иРНК вируса обуславливают его универсальный механизм действия при инфекциях, вызванных различными вирусами ,,. Клинический эффект получен при применении как моновалентных препаратов интерферона бетаинтерферон, реаферон, реальдирон, роферон А, нитрон А, человеческий лейкоцитарный интерферон, так и комбинированных с полимерами или витаминами препаратов гриппферон, виферон. Параллельно с исследованиями препаратов экзогенного ИФН проводились работы по созданию и испытанию индукторов интерферона, способных индуцировать в организме человека продукцию эндогенного интерферона. Все они обладают широким диапозоном противовирусной активности и иммуномодулирующими свойствами. При введении в организм индукторы интерферона вызывают ряд неспецифических и специфических эффектов. Неспецифические эффекты связаны с ингибированием роста клеток, модуляцией их дифференцировки и синтезом мембранных рецепторов, специфические с действием на различные звенья системы иммунитета, что выражается в активации макрофогов, цитотоксических Тклеток, антителообразующих Вклеток, естественных киллеров и др. Одним из свойств индукторов интерферона является формирование в организме неспецифической резистентности на длительный период времени. Несмотря на общность свойств, каждый из индукторов интерферона имеет свои особенности. Так, например, амиксин вызывает медленную продукцию ИФН Тлимфоцитами, в то время как циклоферон быструю продукцию ИФН Влимфоцитами. Циклоферон вызывает образование ряда противовоспалительных цитокинов, что позволяет рассматривать его как регулятор цитокиновой сети , ,,. Особое место среди перечисленных препаратов занимает комплексный препарат цитовир3. В основе действия входящих в него веществ лежит активация синтеза эндогенного интерферона и предотвращение формирования вторичного иммунодефицитного состояния.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.179, запросов: 145