Идентификация вирусов и диагностика вирусных инфекций с помощью электронномикроскопических методов исследования

Идентификация вирусов и диагностика вирусных инфекций с помощью электронномикроскопических методов исследования

Автор: Королев, Михаил Борисович

Шифр специальности: 03.00.06

Научная степень: Докторская

Год защиты: 1984

Место защиты: Москва

Количество страниц: 411 c. ил

Артикул: 4027858

Автор: Королев, Михаил Борисович

Стоимость: 250 руб.

Королев, Михаил Борисович
Идентификация вирусов и диагностика вирусных инфекций с помощью электронномикроскопических методов исследования Электронный ресурс Дис. . дра биологические науки . М. РГБ, . Из фондов Российской государственной библиотеки
Вирусология
Текст воспроизводится по экземпляру, находящемуся в фонде РГБ
Королев, Михаил Борисович
Идентификация вирусов и диагностика вирусных инфекций с помощью электронномикроскопических методов исследования
Москва,
Российская государственная библиотека, электронный текст
ПРЕЗИДИУМ ЖТ
xоилщ
г.рыотл ь см
, ДОКТ Нач.
У Мые
АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР ИНСТИТУТ ПОЛИОМИЕЛИТА И ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ
На правах рукописи УДК 6.8.8 8.
КОРОЛЕВ МИХАИЛ БОРИСОВИЧ
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ И ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВИРУСОЛОГИЯ
Диссертация на соискание учной степени доктора биологических наук
I
Москва 1
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
ГЛАВА I. ИСТОРИЯ ВОПРОСА И ПРЕДМЕТ ОБСУЖДЕНИЯ
ГЛАВА П. СТРУКТУРА И МОРФОГЕНЕЗ ВИРУСОВ КАК ОСНОВА ИХ
ВЫЯВЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ
ГЛАВА Ш. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ МЕТОДОМ НЕГАТИВНОГО
КОНТРАСТИРОВАНИЯ.
3.1.0. Технические основы негативного контрастирования. Способы подготовки материала. . .
3.2.0. Выявление и идентификация вирусов методом негативного контрастирования .
ГЛАВА 1У. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ МЕТОДОМ ИММУНОЭЛЕК
ТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ
4.1.0. Иммуноэлектроннаямикроскопия вирусных суспензий . .
4.1.1. Антигены и антисыворотки .
4.1.2. Прямой метод иммуноэлектронной микроскопии
4.1.3. Методы иммуноэлектронной микроскопии с использованием техники фильтрации в агар . .
4.1.4. Методы иммуносорбентной электронной микроскопии .
4.1.5. Техника декорирования.
4.1.6. Применение ИЭМ в вирусологии .
4.2.0. Иммуноэлектронномикроскопическое выявление внутриклеточных антигенов
ГЛАВА У. ВЫЯВЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ МЕТОДОМ
УЛЬТРАТОНКИХ СРЕЗОВ .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ
ЧАСТЬ П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ .
ГЛАВА У1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .
6.1.0. Метод негативного контрастирования
6.1.1. Контрастирующие вещества
Стр.
6.1.2. Способы негативного контрастирования препаратов
6.1.3. Подготовка материала для анализа методом негативного контрастирования .
6.2.0. МеТОДЫ ИММуНОЭЛеКТрОННОЙ МИ1фОСКОПИИ .
6.2.1. Прямой метод иммуноэлектронной микроско
6.2.2. Методы иммуноэлектронной микроскопии с использованием техники фильтрации в агар. .
6.2.3. Метод имцуносорбентной микроскопии
6.2.4. Техника декорирования
6.2.5. Способ иммуноэлектронномикроскошгаеской индикации внутриклеточного вируса
6.2.6. Оценка результатов иммгуноэлектронномикроскопических исследований .
6.3.0. Фиксация, обезвоживание, заливочные материалы, приготовление и контрастирование ультратонких срезов
6.4.0. Способ ускоренной заливки . .
6.5.0. Методы плоскопараллельных заливок
6.6.0. Иммунопероксидазный метод выявления внутриклеточных антигенов.
6.7.0. Метод электронной микроскопии с применением флуоресцирующих антител
6.8.0. Микроскопирование, фотоматериалы и техника фоторабот. Статистическая обработка материалов .
ГЛАВА УП.МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ГЕРПЕСВИРУСОВ
В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ И КЛИНИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛАХ
7.1.0. Морфогенез вируса простого герпеса тип I
и 2 в клетках УЕЕЮ
7.2.0. Электронномикроскопическая идентификация вируса герпеса при острых менингоэнцефа литах.
7.3.0. Электронномикроскопическое изучение материалов при экспериментальной герпетической инфекции гениталий мышей и рака шейки матки человека.
Стр.
7.4.0. Заключение
ГЛАВА УШ. ВЫЯВЛЕНИЕ, ИДЕНТИФИКАЦИЯ, МОРФОЛОГИЯ И МОРФОГЕНЕЗ РОТАВИРУСОВ.
8.1.0. Вирусологическое и серологическое изучение случаев ротавирусных гастроэнтеритов
8.2.0. Иммуноэлектронномикроскопические исследования наличия и количества антител
8.3.0. Сравнительное изучение различных электронномикроскопических методов выявления ротавирусов.
8.3.1. Сравнение двух методов прямого электронно микроскопического выявления ротавирусов в негативноконтрастированных препаратах
8.3.2. Сравнение эффективности выявления ротавирусов методами прямой и иммуноэлектронной микроскопии.
8.3.3. Сравнение чувствительности различных вариантов метода иммуноэлектронной микроскопии с использованием техники фильтрации в агар . Иммуносорбентная электронная микроскопия . .
8.4.0. Морфология и антигенная специфичность ротавирусов. Их дифференциация от других виру сов и структур, присутствующих в фекальном материале.
8.5.0. Электронномикроскопический анализ материалов от больных при вспышках и спорадических случаях небактериального гастроэнтерита
8.6.0. Вццеление и пассирование ротавируса человека в культуре клеток. Электронномикроскопичес кий контроль размножения ротавируса в кле точной культуре .
8.7.0. Морфогенез ротавируса человека в культуре клеток
8.8.0. Морфологическая дифференциация ротавирусов
от рео и орбивирусов .
8.9.0. Заключение.
Стр.
ГЛАВА IX. МОРФОЛОГИЯ, МОРФОГЕНЕЗ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ СЕМЕЙСТВА VII
9.1.0. Строение и основные морфологические проявления репродукции вируса клещевого энцефалита в культуре клеток млекопитающих и ЦНС экспериментальных животных
9.2.0. Иммуноэлектронномикроскопический анализ штаммов вируса клещевого энцефалита .
9.3.0. Изучение антигенных взаимосвязей вирусов японского энцефалита, Западного Нила и клона ЗНЯЭ методом иммуноэлектронной микроскопии
9.4.0. Электронномикроскопическое изучение пер вичной культуры мышиных фибробластов при заражении вирусом Синдбис в условиях мо
но и смешанной инфекции
9.5.0. Морфологические проявления репродукции тогавирусов в культуре клеток комаров .
9.5.1. Изучение альфавирусной инфекции в культуре комариных клеток
9.5.2. Изучение флавивирусной инфекции вирус Западного Нила в культуре комариных клеток.
9.5.3. Электронномикроскопическое изучение культуры клеток комара при смешанной инфекции вирусами Гета и Западного Нила.
9.6.0. Морфология и морфогенез вируса краснухи в клетках тканевых культур.
9.6.1. Ультраструктура клеток I2 , инфицированных вирусом краснухи .
9.6.2. Ультраструктура клеток БНК2, инфициро ванных вирусом краснухи . .
9.6.3. Ультраструктура клеток V , инфицированных вирусом фасцухи
9.7.0. Заключение
ГЛАВА X. ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ МОРФОГЕНЕЗА ВИРУСА КОРИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ТИПАХ ЦИТОПАТОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ .
Стр.
Заключение.
ГЛАВА XI. МОРФОЛОГИЯ, МОРФОГЕНЕЗ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСА БЕШЕНСТВА
.1.0. Морфологические проявления рабической инфекции в клеточной культуре
.1.1. Морфология и морфогенез фиксированного вируса бешенства в культуре клеток почки сирийского хомяка.
.1.2. Влияние длительных серийных пассажей в культуре клеток на структуру и морфогенез фиксированного вируса бешенства
.2.0. Морфологические проявления рабической инфекции в клетках центральной нервной системы экспериментальных животных
.2.1. Ультраструктурные изменения в ЦНС животных
при острой рабической инфекции
.2.2. Морфологические особенности репродукции уличного вируса бешенства в ЦНС белых мышей при хронической форме рабической инфекции .
.3.0. Морфологическая идентификация штаммов вируса бешенства, выделенных в природных
очагах бешенства.
.4.0. Заключение
ГЛАВА ХП. ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКАЯ ВДЕНТИФИКАЦИЯ,
СТРУКТУРА И МОРФОГЕНЕЗ ВИРУСОВ СЕМЕЙСТВА втггАУлаюАЕ
.1.0. Морфология и морфогенез вируса крымской геморрагической лихорадки КГЛ
.2.0. Электронномикроскопическое изучение морфологии и морфогенеза вируса Дхори
.3.0. Заключение
ГЛАВА ХШ. ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГИИ И РАЗМНОЙЕНИЯ АРЕНАВИРУСОВ В КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ.
Стр.
.1.0. Электронномикроскопическое изучение размножения аренавирусов в культуре клеток .
.2.0. Структура и морфогенез вируса Амалари в клетках уеео
.3.0. Сравнительное электронномикроскопическое изучение штаммов вируса хориоэнцефалита и лимфоцитарного хориоменингита
.4.0. Электронномикроскопическое изучение вируса
ЛХМ, вьделенного из крови больного . зоз
.5.0. Иммуноэлектронномикроскопическое изучение антигенных взаимосвязей аренавирусов
.6.0. ЗаключениеЗП
ГЛАВА Х1У. ВЫЯВЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА А
.1.0. Характеристика вирусоподобных частиц из фекалий больных гепатитом типа А .
.2.0. Количественное определение антител с помощью метода иммуноэлектронной микроскопии
.3.0. Использование техники иммуноэлектронной микроскопии при изучении экспериментальной гепатитной А инфекции у шимпанзе .
.4.0. Сравнительная эффективность различных вариантов метода иммуноэлектронной микроскопии при выявлении вируса гепатита А
.5.0. Обследование больных инфекционным гепатитом с применением иммуноэлектронномикроскопического метода обнаружения вируса.
.6.0. Заключение .
ГЛАВА ХУ. ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСОВ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ И КЛИНИЧЕСКИХ МАТЕ РИАЛАХ.
ОБСУЖДЕНИЕ.
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Необходимо подчеркнуть,однако, что патология и метаморфоз клеточных структур, равно как и особенности морфогенеза вирусов могут значительно варьировать в зависимости от ряда причин чувствительности клеток к вирусу, степени адаптации штамма, условий культивирования и т. Весьма вероятно, что в будущем, по мере накопления данных, результаты электронномикроскопического изучения смогут служить в качестве основы для дифференциации штаммов вирусов или суждения о характере вызываемого ими инфекционного процесса. В качестве одного из примеров подобного рода можно привести обнаружение достаточно четких различий в морфологическом проявлении рабической инфекции, вызванной уличным или фиксированным вирусом бешенства в ЦНС экспериментально зараженных грызунов 7, 0. По мнению ряда авторов, совокупность выявленных ультраструктурных особенностей рабической инфекции на уровне отдельных нейронов позволяет в настоящее время проводить относительно уверенную дифференциацию уличных и фиксированных штаммов 4, 2. ГЛАВА Ш. Технические основы негативного контрастирования. Техника негативного контрастирования, введенная в практику вирусологической работы . Негативное контрастирование используется, как пра
вило, для анализа суспензионного материала с размером частиц менее 0 нм, но может быть применено также при изучении ультратонких срезов 8 или клеточных органелл 0. Сведения по истории развития и перспективам применения техники негативного контрастирования в вирусологии опубликованы в обзоре 5. Для негативного контрастирования используются растворы различных солей тяжелых металлов. Контрастирующее вещество проникает в гидрофильные участки объекта, замещая в них воду. Поскольку контрастер высыхает быстрее, чем биологический объект в его гидрофильных участках образуется пленка аморфного электронноплотного материала, окружающая гидрофобные структуры объекта, включая липидные компоненты. Скорость и степень проникновения контрастера в полости объекта зависят от размеров и заряда ионов контрастирующего вещества. Свойства различных контрастирующих веществ были рассмотрены рядом авторов 4, 6, 9, 5. Большая часть этих веществ используется в виде водных растворов при приблизительно нейтральном . Наиболее распространенными контрас терами являются фосфорновольфрамовая кислота ФВК, молибденовокислый аммоний и кремневольфрамовокислый натрий. Весьма популярными контрастирующими веществами являются также растворы солей уранила. В отличии от других контрастирующих агентов растворы солей уранила используются при кислом около 4,5, т. Соли уранила оказывают менее деструктивное действие на ряд вирусов и клеточных компонентов, структура которых частично разрушается при использовании других контрастеров, например,
ФВК вирус огуречной мозаики, рабдовирусы, рибосомы и др Кроме того, малые размеры молекул контрастирующего вещества позволяют добиваться лучшего разрешения структуры объекта. В настоящее время в практике работы вирусологических лабораторий обычно используют три вида контрастирующих веществ на основе ураниловых солей уксуснокислый уранил уранил ацетат, щавелевокислый уранил уранил оксалат и му равьинокислый уранил уранил формиат. Наибольшее практическое значение имеет первый из них уранилацетат. В каждом конкретном случае необходим выбор оптимального контрастирующего агента и раствора. Такой подход, будучи оправданным при детальном анализе объекта, неприемлем для обычной диагностической работы, поскольку подбор соответст вующих условий контрастирования занял бы слитком много времени. С большинством вирусов, однако, вполне удовлетвори тельные результаты могут быть получены при использовании раствора ФВК с приблизительно нейтральным . Существуют различные способы и модификации негативного контрастирования препаратов , 6, 9. Основными и наиболее широко используемыми являются капельный способ, способ флотации и распыления. За последнее время особенно в связи с широким использованием электронной микроскопии в целях индикации вирусов завоевал популярность так называемый метод псевдореплик. Сущность метода заключается в осаждении вирусных частиц на агаровые пластинки с последующим снятием с них псевдореплик. За счет фильтрации вирусной суспензии в агар или агарозу достигается частичная очистка и концентрация исследуемого материала.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.191, запросов: 145