Основы аттенуации вируса гриппа

Основы аттенуации вируса гриппа

Автор: Киселева, Ирина Васильевна

Шифр специальности: 03.00.06

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2001

Место защиты: Санкт-Петербург

Количество страниц: 226 с. ил

Артикул: 321783

Автор: Киселева, Ирина Васильевна

Стоимость: 250 руб.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1. ЖИВЫЕ ГРИППОЗНЫЕ ВАКЦИНЫ .
1.1. История создания живой гриппозной вакцины. Вакцины прошлых лет .
1.2. Современная реассортантная ЖГВ. Требования, предъявляемые
к вакцинным штаммам. ЖГВ для разных групп населения
1.3. Гриппозные вакцины будущего
1.3.1. Расширение спектра потенциальных вакцинных штаммов .
1.3.2. Вирус гриппа как вектор .
1.3.3. ДНКвакцины
1.3.4. РНКиммунизация .
1.3.5. Универсальные вакцины .
1.4. Субстраты для культивирования гриппозных вакцин
1.4.1. Экспериментальные животные .
1.4.2. Развивающиеся куриные эмбрионы .
3. Клеточные культуры .
ГЛАВА 2. АТТЕНУАЦИЯ ВИРУСОВ ПРИ КОНСТРУИРОВАНИИ
ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ ДЛЯ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ .
2.1. Традиционные пассажные методы аттенуации путем переадаптации от основного хозяина в гетерологичной системе культивирования
получение Ьг мутантов
2.1.1. Адаптация вируса гриппа к репродукции
в легких мышей и хорьков .
2.1.2. Адаптация вируса гриппа к репродукции в РКЭ
при оптимальной температуре
2.1.3. Пассирование при пониженной температуре
холодовая адаптация
2.2. Аттенуация вируса гриппа с помощью метода генетической рекомбинации .
2.3. Характеристика существующих доноров аттенуации
2.3.1. Мутанты с измененным кругом хозяев Лг .
2.3.2. Температурочувствительные й мутанты .
2.3.3. Холодоадаптированные доноры аттенуации
2.4. Маркеры аттенуации вакцинных штаммов вируса гриппа
2.4.1. Маркеры аттенуации холодоадаптированных
вакцинных штаммов
ГЛАВА 3. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ ПАТОГЕННОСТИ
И АТТЕНУАЦИИ ВИРУСА ГРИППА
3.1. Функциональная роль отдельных генов в проявлении
биологических свойств вируса гриппа
3.1.1. Гемагглютинин и вирулентность
3.1.2. Роль нейраминидазы в определении круга
чувствительных клеток .
3.1.3. Роль белков полимеразного комплекса в вирулентности
3.1.4. Участие гена, кодирующего белок . в проявлении вирулентности .
3.1.5. М ген и биологические свойства вируса гриппа .
3.1.6. Вклад неструктурных белков 1 и 2
в проявление биологических свойств вируса гриппа
3.2. Роль отдельных генов в аттенуации вируса гриппа
3.2.1. Роль гена в аттенуации
3.2.2. Роль М гена в аттенуации .
3.2.3. Роль гена в аттенуации
3.2.4. Роль РА гена в аттенуации
3.2.5. Роль РВ1 гена в аттенуации .
3.2.6 Роль РВ2 гена в аттенуации
3.2.7. Роль комбинации внутренних генов в аттенуации
Заключение
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .
4.1. Вирусы .
4.2. Методы работы с развивающимися куриными эмбрионами .
4.3. Методы работы с культурой клеток .
4.4. Методы работы с лабораторными животными
4.5. Реизоляция вакцинных вирусов от привитых лиц .
4.6. Оценка реактогенности вакцинных штаммов
4.7. Методология получения реассортантов между
эпидемическими вирусами и донорами аттенуации .
4.7.1. Получение реассортантов между эпидемическими вирусами и донорами аттенуации в развивающихся
куриных эмбрионах .
4.7 2. Получение реассортантов между эпидемическими
вирусами и донорами аттенуации в культуре клеток .
4 8. Методология изучения состава генома реассортантных
вакцинных штаммов рестрикционный анализ ДНКкопий генов .
4.9. Секвенирование .
4 Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 5. ПОДГОТОВКА И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕАССОРТАНТНЫХ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННЫХ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ
ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КОММЕРЧЕСКОЙ ЖГВ .
5.1. Подготовка актуальных вакцинных штаммов для ЖГВ
5.2. Маркеры аттенуации
5.2.1. Показатели репродукции в РКЭ при непермиссивмой повышенной температуре маркер
5.2.2. Показатели репродукции в РКЭ при пониженной
температуре са маркер
5.2.3. Разработка маркера цитопатической активности
вируса в культуре клеток
5.2.4. Разработка маркера токсичности вируса
для лабораторных животных
5.3. Структура генома вакцинных штаммов
5.4. Результаты клинических испытаний вакцинных штаммов
Заключение .
ГЛАВА 6 ГЕНЕТИЧЕСКАЯ СТАБИЛЬНОСТЬ
ХОЛОДОАДАПТИРОВАННОГО ВИРУСА АЛЕНИНГРАД4 И РЕАССОРТАНТОВ,
ПОЛУЧЕННЫХ НА ЕГО ОСНОВЕ
6.1 Модификация метода определения мутаций в генах.
кодирующих негликозилированные белки холодоадаптированных
штаммов вируса гриппа
6.2. Генетическая стабильность донора аттенуации
АЛенинград4 .
6.2.1. Генетическая стабильность изолятов от детей.
привитых ЖГВ .
6.2.2. Ретроспективный анализ состава мутаций во внутренних генах реассортантных вакцинных штаммов, подготовленных
на основе донора аттенуации АЛенинград4
6.3. Клонирование вируса АЛенинград4 .
6.3.1. Получение дериватов вируса АЛенинград4 , отличающихся от исходного штамма отсутствием или
наличием дополнительных мутаций во внутренних генах.
6.3.2. Молекулярногенетический анализ и биологические свойства
ХА вируса АЛенинград4
6.3.3. Сравнительное изучение биологических свойств базовых и
модифицированных доноров аттенуации
6.3 4 Изучение генетической стабильности мутаций в геноме
базовых и модифицированных доноров в опытах на РКЭ
и в экспериментах на хорьках .
Заключение .
ГЛАВА 7. МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ АТТЕНУАЦИИ
ХОЛОДОАДАПТИРОВАННОГО ВИРУСА
АЛЕНИНГРАД4 .
7.1. Методика получения одногенных и полигенных мутантов
вируса гриппа
7.2. Роль отдельных мутаций в аттенуации одногенных мутантов .
7.3. Генетическая стабильность одногенных мутантов после их
репродукции в организме хорьков .
7.4. Роль комбинации мутантных генов в аттенуации полигенных
мутантов
Заключение
ГЛАВА 8. МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ
АТТЕНУАЦИИ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННЫХ РЕАССОРТАНТНЫХ ШТАММОВ
8.1. Роль отдельных мутаций в аттенуации одногенных реассортантов современных эпидемических штаммов вируса гриппа с базовыми
донорами аттенуации .
8.2. Роль отдельных мутаций в формировании э фенотипа полигенных реассортантов между современными эпидемическими штаммами
вируса гриппа и базовыми или модифицированными донорами
Заключение
ГЛАВА 9. КЛЕТОЧНЫЙ СУБСТРАТ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ И
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННЫХ
РЕАССОРТАНТНЫХ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ
9.1 Культивирование холодоадаптированных штаммов в системе
первичной культуры клеток СЕБ
9.2. Культивирование холодоадаптированных и эпидемических вирусов в культуре клеток МОСК Получение реассортантов в
культуре клеток МОСК .
9.2.1. Культивирование в клетках МОСК доноров аттенуации, эпидемических вирусов и их реассортантов. полученных в РКЭ
9.2.2. Получение реассортантов в культуре клеток МОСК на
основе куриных вариантов вируса гриппа .
9.2.3. Получение реассортантов в культуре клеток МОСК на основе куриного донора аттенуации и эпидемического вируса.
выделенного в культуре клеток МОСК
Заключение
ГЛАВА . ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Начиная с года в мире проводятся интенсивные исследования по созданию вакцин против таких новых пандемически потенциально опасных вирусов, как вирусы птичьего происхождения А и А . За последние три года в Гонконге были зарегистрированы два исключительно важных случая передачи птичьих вирусов человеку. В марте года от двух детей был выделен вирус , и, по неподтвержденным данным, произошло еще 5 подобных случаев в Южном Китае. Появление в циркуляции подобных вирусов чревато самыми непредсказуемыми последствиями, так как у людей нет к ним иммунитета и результаты эпидемии пандемии могут быть катастрофическими 5. Поэтому остро встал вопрос о подготовке новых вакцинных штаммов, способных защитить население от потенциальной опасности. Однако, поскольку сам вирус АГонконг высокопатогенен не только для цыплят и РКЭ, но и для человека, группа английских ученых в эксперименте на мышах провела изучение иммуногенности и защитных свойств инактивированной вакцины, приготовленной из близкого ему по антигенной структуре вируса АуткаСингапур . Авторы получили убедительное доказательство того, что иммунизация вирусом АуткаСингапур защищает от летальной инфекции, вызванной вирусом АГонконг . Опираясь на эти данные, итальянские ученые из фирмы i Vi, используя стандартные методики, подготовили инактивированную вакцину, содержащую поверхностный антиген I, которая была испытана в Англии и продемонстрировала ареактогенность и хорошую иммуногенность 8. Объединенными усилиями ученых из Центра по контролю за заболеваемостью Атланта. США и фирмы vi США генноинженерным путем были сконструированы две рекомбинантные вакцины, содержащие 6 внутренних генов от донора аттенуации ААА. АГонконг6 или АГонконг3 8. НА1НА2 каждого из изолятов предварительно был модифицирован методами обратной генетики для придания ему сходства со слабопатогенными птичьими вирусами из него была вырезана последовательность из 6 аминокислот, после чего добавлен треонин рядом с аргинином. Такой модифицированный кливеджсайт привел к формированию трипсинзависимого фенотипа, не изменив при этом антигенный профиль вируса. Оба реассортанта характеризовались и са фенотипом, высокой репродукционной активностью в РКЭ ЭИДкмл. Аналогичные исследования были проведены группой японских ученых 0. АГонконг6 и остальные семь генов от авирулентного птичьего вируса АуткаГонконг6 . Кпиведжсайт гемагглютинина вирулентного вируса был модифицирован в кливеджсайт, характерный для авирулентных птичьих вирусов. Полученный реассортантный вирус оказался высоко аттенуированным для цыплят и мышей. При этом мыши, иммунизированные этим вирусом, были устойчивы к челленджинфекции. АГонконг6 и АГонконг3 методический прием, с помощью которого проверяются протективные свойства первичной иммунизации. Ученые высказывают опасения о существовании пандемических потенций не только у вируса , но и , который, хотя и не вызвал зарегистрированных случаев с летальным исходом, тем не менее был выделен от детей с гриппоподобными заболеваниями. Поэтому разработка вакцинных штаммов против также является весьма актуальной. Изучение иммуногенности и протективной активности живых и инактивированных вирусов в опытах на мышах показало перспективность такого рода исследований 4. Успехи в области обратной генетики вируса гриппа и генной инженерии стимулировали интенсивное развитие работ в области направленного получения векторных вирусов, несущих в составе своего генома чужеродные встроенные последовательности 2, 3, 1. Привлекательность вируса гриппа как виротерапевтического агента и вектора определяется целым рядом факторов 4, к числу которых относится безопасность, связанная с отсутствием у вируса гриппа ДНКвой фазы и способности встраивания в геном человека, наличие потенциально безвредных для организма человека векторов хорошо апробированных живых гриппозных вакцин, и некоторые другие. Существующие природные штаммы вируса фиппа применялись в эксперименте 0 и клинике для лечения некоторых опухолей и лейкозов . Создание рекомбинантных штаммов вируса гриппа, презентирующих опухолевые антигены или экспрессирующие иммуноактивирующие молекулы, может явиться важным шагом в реализации идеи виротерапии рака.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.191, запросов: 145