Скелетные структуры клеточного ядра. Особенности белков ядерного матрикса в норме и патологии

Скелетные структуры клеточного ядра. Особенности белков ядерного матрикса в норме и патологии

Автор: Кузьмина, Светлана Николаевна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Докторская

Год защиты: 1983

Место защиты: Москва

Количество страниц: 341 c. ил

Артикул: 4028094

Автор: Кузьмина, Светлана Николаевна

Стоимость: 250 руб.

СОДЕРЖАНИЕ
Справка по диссертации.
Сокращения, принятые в работе
Общее введение. II
РАЗДЕЛ I. Обзор литературы.
Введение.
Глава I. Морфология ядерного матрикса соматических
клеток.
1.1. Немембранные компоненты ядерной оболочки, входящие в состав ядерного матрикса.
1.2. Интерхроматиновые фибриллярногранулярные компоненты ядерного матрикса
1.3. Остатки ядрыпка,входящие в состав ядерно
го матрикса .
1.4. Гранулярные структуры ядерного матрикса
1.5. Влияние метода изоляции на структуры ядерного матрикса.
1.6. Заключение
Глава 2. Химический и ферментный состав ядерного
матрикса
2.1. Введение
2.2. Химический состав ядерного матрикса.
2.3. Белки ядерного матрикса, изолированного
из разных клеток и тканей.
2.3.1. Полипептиды ламины или триплета ядерного матрикса
2.3.2. Тиоловые группы белков ядерного матрикса.
2.3.3. Металлопротеиды ядерного матрикса.
2.3.4. Фосфорилирование белков ядерного матрикса
2.4. Ферментный состав ядерного матрикса.
2.5.Заключение
Глава 3. Биологическая роль ядерного матрикса.
3.1. Введение.
3.2. К вопросу о биогенезе белков ядерного матрикса
3.3. Ассоциация ядерного матрикса с ДНК
3.3.1. Краткая историческая справка.
3.3.2. Ассоциация новореплицированной ДНК
с ядерным матриксом
3.3.3. Фракция ДНК, сохраняющаяся в составе ядерного матрикса
3.3.4. Белковый компонент комплекса ДНКбелок ядерного матрикса
3.4. Ассоциация ядерных рибонуклеопротеидов
с ядерным матриксом.
3.4.1. Ассоциация с ядерным матриксом ДНКподобной РНК
3.4.2. К вопросу об ассоциации рибосомных
РНК с ядерным матриксом.
3.4.3. Заключение.
3.5. Ассоциация стероидных гормонов с ядерным матриксом
3.6, Ядерноцитоплазматический транспорт и
его связь со скелетными структурами едра 3.7 Заключение
Глава 4. Ядерный матрикс гамет
Глава 5 Скелетные структуры хромосом.
Глава 6. Скелетные структуры ядра в течение митоза и
клеточного цикла
Глава 7. Ядерный матрикс при опухолевом росте.
Глава 8. Ядерный матрикс при вирусной инфекции клеток
Общее заключение по литературному обзору.
РАЗДЕЛ П. Экспериментальная часть
Глава 9, Материал и методы исследования
9Л. Материал исследований.
9.2. Метод ввделения ядер из клеток печени
9.3. Изоляция ядер из опухолевых клеток.
9.4. Изоляция ядер из клеток культуры фибробластов китайского хомячка
9.5. Контроль чистоты и морфологической сохранности изолированных ядер
9.5.1. Световая микроскопия
9.5.2. Электронная микроскопия.
9.5.3. Отношение РНКДНК в препарате ядер.
9.6. Метод изоляции дцерного матрикса.
9.7. Фракционирование дцерного матрикса.
9.8. Изоляция ядерной оболочки
9.9. Получение ядерных белковых фракций.
9 Электрофорез белков ядерного матрикса в полиакриламидном геле, содержащем додецилсульфат натрия
9 Инкубация клеток с мечеными аминокислотамиНО
9 Инкубация клеток с мечеными аминокислотами в присутствии антибиотиков.
9 Определение радиоактивности в жидкостном сцинтиллятореIII
9 Определение радиоактивности на фильтровальных бумажках.
9 Определение радиоактивности во фракциях геля после электрофоретического разделения белков.
9 Определение концентрации белкаИЗ
9 Элюирование белка из полиакриламидного
9 Иммунологические методы исследования.
. Получение антигенов и иммунизация.
. Преципитация по Приру
. Титрование антител.
. Анализ антител двойной радиальной иммунодиффузией по Ухтерлони
. Электроиммунный анализ по Лореллу.
. Электрофоретический перенос белков с полиакриламидного геля на нитроцеллюлозную мембрану с последующей окраской их антителами
. Непрямая имыунофлуоресцентная микроскопия.
. Иммунопероксидазная окраска
. Дополнительная обработка клеток при непрямой иммунофлуоресцентной микроскопии
9 Определение транспорта белка, меченого
Нфенилаланином, из ядра в бесклеточной системе.
9 Техника электронномикроскопического исследования
. Метод ультратонких срезов
. Метод негативного контрастирования
. Метод сканирующей электронной микроскопии.
. Метод замораживаниятравления
9 Список реактивов, использованных в работе
Глава . Морфология изолированного ядерного матрикса
Глава II. Фракционирование ядерного матрикса
Глава . Химический состав ядерного матрикса печени
крысы.
.1. Химический состав ядерного матрикса.
.2. Белковый состав четырех фракций ядерного матрикса.
Глава . Иммунологическая характеристика белков
ядерного матрикса печени крысы
З.I. Иммунологический анализ белков
антигенов адерного матрикса
.2. Исследование локализации антигенов непрямой иммунофлуоресцентной микроскопией с антителами к щелоченерастворимым белкам ядерного матрикса печени крысы.
.3. Влияние химических реагентов на локализацию антигенов ядерного матрикса
.4. Локализация антигенов ядерного матрикса
в митотической клетке
Глава . Ядерный матрикс регенерирующей печени крысы
Глава . Ядерный матрикс опухолевых клеток.
.1. Введение.
.2. Особенности белкового состава ядерного матрикса опухолевых клеток.
.3. Фракционирование дцерного матрикса опухолевых клеток
Глава . Биогенез белков ядерного матрикса.
.1. Введение.
.2. Включение меченых аминокислот тотальным белком ядерного матрикса и его фракциями.
.3. Включение меченых аминокислот электрофоретическими фракциями ядерного матрикса
.4. Влияние ингибиторов белкового синтеза на включение меченых аминокислот в белки ядерного матрикса
.5. Заключение.
Глава . Биогенез поровых комплексов.
Л. Введение .
.2. Изменение плотности поровых комплексов
на поверхности ядра
.3. Автономность поровых комплексов от мембран ядерной оболочки.
.4. Разнообразие поровых комплексов, наблюдаемое на поверхности ядерного матрикса
и интактного ядра
.5. Биохимические и иммунологические данные исследования поровых комплексов.
.6. Заключение.
Глава . Обсуждение
.1. Введение.
.2. Исследование структурных компонентов ядерного матрикса.
.2.1. Морфологические исследования ядерного матрикса различных клеток и тканей
.2.2. Биогенез поровых комплексов.
.2.3. Иммуноцитохимические исследования
фракции фиброзного слоя и ассоциированных с ним поровых комплексов
.3. Белковый состав ядерного матрикса различных клеток и тканей.
.3.1. Белки ядерного матрикса печени крысы и его фракций.
.3.2. Белковый состав адерного матрикса в клетках с различной метаболической и пролиферативной активностью.
.3.3. Биогенез белков ядерного матрикса.
.3.3.1. Включение меченых аминокислот в тотальные
белки ядерного матрикса.
.3.3.2. Распределение меченых аминокислот между белками ядерного матрикса, разделенными электрофорезом
.3.3.3. Влияние ингибиторов белкового синтеза на включение меченых аминокислот в полипептиды едер
ного матрикса
.4. Белки ядерного матрикса в митотической
Выводы.
Список литературы


Анализируя эффект действия ДНКазы и хлористого натрия на скелетные структуры макронуклеусов Волфе i, показал, что ДНКаза вызывает сжатие,сокращение ядра, но скелетная основа хроматина этих ядер хроматиновые тельца сохраняется, хотя и в сжатом состоянии. Последующая обработка препарата 2 М яаС1 не оказывает влияния на эти образования. Напротив, при солевой экстракции ядер до ДНКазного переваривания скелетные структуры сохраняют форму и размер ядра, но хроматиновые тельца разрушаются. Волфе приходит к заключению, что ДНКаза не только экстрагирует хроматин, но и защищает нехроматиновые структуры от разрушающего эффекта концентрированного раствора хлористого натрия , . Однако можно высказать альтернативное предположение, что ДНКаза, понижая вязкость раствора дезоксирибонуклеопротеида в концентрированной соли, предохраняет деформацию скелетных структур ядра. Хорошо сохраненные хроматиновые тельца можно получить из макронуклеусов после обработки их цитратным буфером и тритоном Х0 , . В этих условиях ядерные оболочки и многочисленные ядрышки по периферии ядра вымываются, но хроматиновые тельца диаметром 0,,2 мкм сохраняются и при электронной микроскопии видны как электроннопрозрачные, не связанные друг с другом образования. Оболочка хроматиновых телец состоит из гранулярных субъединиц, внутри просматривается фибриллы. Скелетные структуры ядра видоизменяется в присутствии двухвалентных катионов магния и кальция. Показаны существенные изменения морфологии ядрышкового матрикса в присутствии
катионов магния . О . Са или 5 мМ при соотношении размеры ядерного матрикса макронуклеуса резко сокращаются, при понижении концентрации катионов восстанавливаются на i, , i ,, i, i, . Процесс обратимого расширения или сокращения ядерного матрикса не зависит от экзогенной АТФ и не связан, повидимому, с актинмиозин сократительной системой. В этих условиях получены электронноплотные, компактные хроматиновые тельца. По периферии ядерного матрикса видны многочисленные ядрышки. На скелетные структуры ядра оказывают влияние, повидимому, не все двухвалентные катионы. С и образует неспецифические связи, вызывая необратимые изменения. Авторы высказывают предположение,что двухвалентные катионы меди и, в меньшей степени, кальция имеют биологическое значение при комплексировании металлопротеидов ядерного скелета, которые связывают ДНК с внутриядерными структурами см. Таким образом, в зависимости от условий изоляции препарата можно получить некоторые модификации скелетных структур ядра. Из изолированных ядер различных клеток и тканей при последовательном действии детергентов, концентрированного раствора хлористого натрия и нуклеаз получен скелет или остов, включающий остатки трех ультраструктурных компонентов ядра ядерной оболочки, компонентов интерхроматиновой области ядра и ядрышек. Морфологические исследования показали, что скелетные структуры всех трех ядерных субфракций представлены фибриллярногранулярными структурами, имеющими общие свойства устойчивы в концентрированных растворах хлористого натрия, в присутствии детергентов и нуклеаз, что позволяет объединить их в единую систему ядерного матрикса. Кроме перечисленных общих характеристик белковый остов отдельных ультраструктур ядерного матрикса имеет и специфические особенности. Например, ядрыпковый матрикс не стабилизируется дисульфидными связями, тогда как фиброгранулярные интерхроматиновые структуры ядерного матрикса стабилизируется ими. Показаны также некоторые особенности в полипептидном
составе индивидуальных субфракций ядерного матрикса см. Морфология и химический состав скелетных структур ядра зависят от условий получения препарата от последовательности действия реагентов изоляции, от концентрации солевых растворов, двухвалентных катионов и т. Используемые в различных лабораториях модификации позволили получить препараты скелетных структур ядра несколько отличающиеся друг от друга. Получены, описанные выше, препараты ядерного матрикса, препараты ЦЦерных теней i . Последовательным действием ДНКазы, концентрированного раствора хлористого натрия и тритона Х0 получена относительно чистая фракция фиброзного слоя и ассоциированных с ним поровых комплексов , , , .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.207, запросов: 145