Свойства новых сайт-специфических эндонуклеаз Bme 2161 из Bacillus megaterium 216, BbvII из Bacillus brevis 80 и RshII из Rhodopseudomonas sphaeroides 2.4.1

Свойства новых сайт-специфических эндонуклеаз Bme 2161 из Bacillus megaterium 216, BbvII из Bacillus brevis 80 и RshII из Rhodopseudomonas sphaeroides 2.4.1

Автор: Пачкунов, Дмитрий Михайлович

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 1984

Место защиты: Оболенск

Количество страниц: 127 c. ил

Артикул: 3430304

Автор: Пачкунов, Дмитрий Михайлович

Стоимость: 250 руб.



Кроме того, среди новых штаммов бактерий найдены более активные продуценты сайтспецифических эндонуклеаз с известной специфичностью, что позволяет получить фермент в большом количестве с высокой удельной активностью, применяя при этом небольшое количество стадии очистки, так как многоступенчатая и длительная процедура очистки неблагоприятно сказывается на активности фермента. Для более успешного выделения и применения сайтспецифических эндонуклеаз имеет также большое значение исследование их свойств
и свойств штахлмовпродуцентов этих ферментов. В настоящее время, несмотря на большое количество сайтспецифических эндонуклеаз, применяемых в исследованиях, их свойства недостаточно изучены, а также мало сведений о факторах, влияющих на их биосинтез в клетке. Получение этих данных представляется интересным не только в прикладном, но и в теоретическом аспекте, так как эти ферменты привлекают внимание в качестве удобной модели для изучения механизма белокнуклеинового узнавания. Изучение механизма генной регуляции их биосинтеза помогло бы выяснить до сих пор неясную биологическую роль этих ферментов. Целью настоящей работы было I выделение в гомогенном состоянии новой сайтспецифической эндонуклеазы Вше из i i 6, определение узнаваемой ею последовательности нуклеотидов и точек разрыва ДЕЖ, определение некоторых физикохимических свойств этого фермента 2 выделение сайтспещкфической метилазы Вше ИЗ . И определение природы метилированного нуклеотида в составе узнаваемой последовательности нуклеотидов 3 выделение новой сайтспецифической эндонуклеазы vii из i vi , определение участка узнавания ею последовательности нуклеотидов и точек разрыва ДНК, определение некоторых физикохимических свойств сайтспецифической эндонуклеазы vii 4 выделение сайтспецифических метилаз v и vII из в. ДНК этими метилазами 5 выделение второй сайтспецифической эндонуклеазы ИЗ i 2. II определение узнаваемой ею последовательности нуклеотидов. В работе были выделены сайтспецифические эндонуклеазы Вше , vii и и изучены их свойства определен молекулярный вес, число субъединиц в нативном состоянии, оптимальные условия эндонуклеазной реакции. Установлены последовательности нуклеоти
дов, узнаваемые Вше , vii и , установлено место разрыва ДНК эндонуклеазой Вше в сайте узнавания и эндонуклеазой vii вне сайта узнавания. Выделены сайтспецифические метилазы Вше , vi и vii и определена природа метилированных оснований ДНК данными метилазаш. Сайтспецифические эндонуклеазы являются ферментами, узнающими на молекуле ДНК специфические последовательности нуклеотидов и расщепляющие ДНК на фрагменты, если узнаваемые последовательности нуклеотидов, за одним исключением, не несут метильной группы на определенном основании. Первые сайтспецифические эндонуклеазы были выделены из штаммов, в которых наблюдали явление модификации и рестрикции бактериофагов I. Явление ограничения роста фагов различными штаммами бактерий было обнаружено в начале х годов Луриа и его сотрудниками 2. Отмечалось, что после посева фага на одном штамме бактериихозяина эффективность заражения другого штамма резко падала. Это явление получило название рестрикции бактериофага. С максимальной эффективностью фаг размножается на том штамме, на котором он был выращен в последний раз. Другими словами, фаговые частицы могут успешно заражать хозяйские клетки только того типа, в которых образовалась их ДНК, то есть при росте на данном штамме фаг получил модификацию, которая определяет способность фага эффективно размножаться на данном штамме. Если ДНК фага чужеродна для клеткихозяина, то продуктивная инфекция не возникает. Неспособность чужеродного соага продуктивно заражать клеткухозяина обусловлена действием специфической эндонуклеазы, расщепляющей чужеродную ДНК. Таким образом, явление рестрикции и модификации определяется клеткойхозяином фага 3. Позднее Арбер и Дуссуа 4 предположили, что в основе этого явления находится рестрикция и модификация двумя отдельными ферментами. Исследования рестрикции и модификации фага несколькими штаммами .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.207, запросов: 145