Свойства и регуляция активности НАД- и НАДФ-малатдегидрогеназ в условиях оксидативного стресса в миокарде крыс при ишемии

Свойства и регуляция активности НАД- и НАДФ-малатдегидрогеназ в условиях оксидативного стресса в миокарде крыс при ишемии

Автор: Сафонова, Ольга Анатольевна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2004

Место защиты: Воронеж

Количество страниц: 264 с. ил.

Артикул: 2741679

Автор: Сафонова, Ольга Анатольевна

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Свободнорадикальное окисление и
антиоксидантные системы организма
1.1.1. Свободнорадикальное окисление биомолекул
1.1.2. Пероксидное окисление липидов и его роль в
живых организмах
1.1.3. Активные формы кислорода
1.1.4. Антиоксидантные системы организма
1.1.4.1. Ферментативные антиоксиданты
1.1.4.2. Макромолекулярные неферментативные антиоксиданты
1.1.4.3. Низкомолекулярные неферментативные антиоксиданты
1.1.5. Роль ионов некоторых металлов в протекании
свободнорадикальных процессов
1.2. Ишемия миокарда
1.2.1. Понятие об ишемической болезни сердца
1.2.2. Изменение метаболизма кардиомиоцитов
в условиях ишемии
1.2.3. Роль пероксидного окисления липидов и активных форм кислорода в патогенезе ишемического повреждения сердца
1.2.4. Роль апоптоза в ишемическом повреждении ткани сердца
1.2.5. Диагностика инфаркта миокарда
1.3. Характеристика НАД и НАДФзависимых
малатдегидрогеназ
1.3.1. Ферменты, участвующие в метаболизме малата
1.3.2. Характеристика НАДФмалатдегидрогеназы
из различных организмов
1.3.2.1. Реакция, катализируемая ферментом
1.3.2.2. Внутриклеточное распределение НАДФзависимой малатдегидрогеназы и ее участие в физиологобиохимических процессах
1.3.2.3. Очистка фермента
1.3.2.4. Структурная организация и молекулярная масса НАДФзависимой малатдегидрогеназы. Исследование активного центра фермента
1.3.2.5. Кинетическое поведение и регуляция активности НАДФмалатдегидрогеназы
1.3.2.5.1. Сродство к субстрату и кофакторам.
Влияние температуры и среды на активность фермента
1.3.2.5.2. Регуляция активности НАДФмалатдегидрогеназы
1.3.3. НАДзависимая малатдегидрогеназа локализация, очистка, структурная организация, свойства
1.3.3.1. Реакция, катализируемая ферментом
1.3.3.2. Распространение и участие в физиологобиохимических процессах
1.3.3.3. Изоформы и внутриклеточная локализация НАДзависимой малатдегидрогеназы
1.3.3.4. Очистка НАДзависимой МДГ из различных объектов
1.3.3.5. Структурная организация и молекулярная масса НАДмалатдегидрогеназы из различных объектов
1.3.3.6. Исследование активного центра фермента
1.3.3.7. Кинетическое поведение и регуляция активности НАДмалатдегидрогеназы
1.3.3.7.1. Сродство к субстратам и кофакторам.
Субстратная специфичность
1.3.3.7.2. Влияние температуры и среды на активность НАДмалатдегидрогеназы
1.3.3.7.3. Регуляция активности
НАДзависимой малатдегидрогеназы
1.3.3.7.4. Аллостерические свойства НАДмалатдегидрогеназы
1.3.3.8. Перспективы практического применения
НАДзависимой малатдегидрогеназы
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования
2.2. Создание модели экспериментальной ишемии миокарда
2.3. Получение субклеточных фракций кардиомиоцитов
2.4. Определение интенсивности процессов СРО
методом биохемилюминесценции
2.5. Определение содержания малонового диальдегида
2.6. Определение содержания диеновых конъюгатов
2.7. Определение активности ферментов
2.8. Определение количества белка
2.9. Выделение и очистка ферментов
2.9.1. Экстракция
2.9.2. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония
2.9.3. Гельфильтрация
2.9.4. Ионообменная хроматография
2 Исследование кинетических характеристик
и регуляции активности ферментов
2 Электрофорез в полиакриламидном геле
2 Определение молекулярной массы
2 Статистическая обработка экспериментальных данных ГЛАВА 3. ОЦЕНКА ОКСИДАТИВНОГО СТАТУСА И АКТИВНОСТЕЙ НАД И НАДФМАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗ
В МИОКАРДЕ КРЫС В НОРМЕ И
ПРИ ЭКСПРИМЕНТАЛЬНОЙ ИШЕМИИ
3.1. Измерение параметров биохемилюминесценции
в субклеточных фракциях кардиомиоцитов крысы в норме и при ишемии различной длительности
3.2. Определение содержания первичных и вторичных продуктов пероксидного окисления липидов
в субклеточных фракциях кардиомиоцитов крысы в норме и при ишемии
3.3. Активности и субклеточная локализация НАД и НАДФмалатдегидрогеназ в кардиомиоцитах крысы в норме и при патологии
ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ КИНЕТИЧЕСКИХ И РЕГУЛЯТОРНЫХ СВОЙСТВ НАДЗАВИСИМОЙ МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ СЕРДЦА КРЫСЫ В НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИШЕМИИ
4.1. Очистка митохондриальной и цитоплазматической НАДмалатдегидрогеназы из нормального и ишемизированного миокарда крысы
4.2. Исследование некоторых кинетических свойств изоформ НАДзависимой малатдегидрогеназы
из нормального и ишемизированного миокарда крысы
4.3. Молекулярная масса изоформ НАДмалатдегидрогеназы из сердца крысы в норме и при патологии
4.4. Влияние среды на активность различно локализованных форм НАДзависимой малатдегидрогеназы из нормального и подвергшегося ишемии сердца
4.5. Влияние температуры на функционирование НАДмалатдегидрогеназы из сердца крысы в норме и при ишемии
4.6. Регуляторные свойства изоформ НАДмалатдегидрогеназы из сердечной мышцы крысы в норме и при патологии
4.6.1. Влияние ионов некоторых металлов на
активность НАДмалатдегидрогеназы
4.6.2. Влияние пероксида водорода на функционирование НАДмалатдегидрогеназы в норме и при патологии
4.6.3. Регуляция НАДзависимой малатдегидрогеназы под действием глутатиона
4.6.4. Регуляция активности НАДмалатдегидрогеназы из миокарда крысы в норме и при ишемии под действием интермедиатов цикла Кребса
4.6.5. Исследование регуляции активности НАДмалатдегидрогеназы из кардиомиоцитов крысы адениннуклеотидами
ГЛАВА 5. КИНЕТИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ КАТАЛИТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ И
РЕГУЛЯТОРНЫЕ СВОЙСТВА НАДФМАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ СЕРДЦА КРЫСЫ В НОРМЕ И ПРИ ИШЕМИИ
5.1. Очистка НАДФмалатдегидрогеназы из нормального и ишемизированного миокарда
5.2. Кинетические параметры НАДФмалатдегидрогеназы из кардиомиоцитов крысы в норме и при ишемии
5.3. Молекулярная масса НАДФзависимой малатдегидрогеназы из нормального и ишемизированного миокарда
5.4. Влияние среды на функционирование фермента в норме и при патологии
5.5. Исследование влияния температуры на активность НАДФмалатдегидрогеназы из нормального и ишемизированного сердца крысы
5.6. Исследование регуляции активности НАДФмалатдегидрогеназы
5.6.1. Регуляция активности НАДФмалатдегидрогеназы под действием ионов некоторых металлов
5.6.2. Влияние пероксида водорода на активность фермента
5.6.3. Регуляция НАДФмалатдегидрогеназы
под действием глутатиона
5.6.4. Исследование влияния интермедиатов цикла трикарбоновых кислот на активность НАДФмалатдегидрогеназы из сердца крысы
в норме и при ишемии
5.6.5. Исследование функционирования НАДФзависимой малатдегидрогеназы из кардиомиоцитов крысы в норме и при патологии в присутствии адениннуклеотидов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Одноэлектронное восстановление приводит к образованию супероксидного анионрадикапа или его протонированной формы гидропероксидного радикала Н Осипов, . Время жизни супероксидного анионрадикала составляет с Зенков, . Его биологическое действие заключается в индукции ПОЛ, разрушении мембран эритроцитов, образовании гидроксильного и пергидроксильного радикалов Артюхов, . СОД, аскорбиновая кислота, церулоплазмин Гусев, . Пероксид водорода стабильный продукт, легко проникает через мембрану. Образуется за счт двухэлектронного восстановления кислорода в ксантиноксидазной реакции, в реакции дисмутации супероксидного радикала с участием или без участия СОД. Н2 оказывает цитотоксическое и сосудосуживающее действие, участвует в образовании гидроксильного радикала, ингибировании пролиферации лимфоцитов. Концентрацию Н2 снижают внутриклеточная катапаза и глутатионпероксидаза, церулоплазмин Воскресенский, . Гидроксильный радикал является наиболее реакционноспособным из АФК, образующихся в биологических системах он может разрывать любую СН или ССсвязь Зенков, . Продолжительность жизни гидроксильного радикала 9 с. Н2 Н ОН Муравьев, . В реактиве Фентона содержатся все АФК свободные радикалы супероксида, гидроксила, пероксида водорода, а также синглснтный кислород, образующийся при спонтанном пропорционировании супероксидных радикалов Кулинский, . Также гидроксильный радикал образуется под действием ионизирующей радиации на воду, при микросомальном окислении. Гидроксильный радикал является сильным окислителем, вызывает повреждение ДНК и других клеточных структур, индуцирует ПОЛ, обладает сильным цитотоксическим, мутагенным действием. Тушителями являются одно и многоатомные спирты, диметилсульфоксид, тиомочевина, мочевая кислота Зенков, . Синглетный кислород образуется при спонтанной дисмутации супероксидного анионрадикала, в фотоиндуцированных реакциях. Его биологическое действие заключается в том, что он индуцирует процессы ПОЛ, окисляет белки, обладает цитотоксическим и мутагенным действием. В утилизации синглетного кислорода участвуют аскорбиновая кислота, каротиноиды, мочевая кислота, атокоферол. Существенно, что при диспропорционировании супероксидных радикалов, катализируемом СОД, образуется не агрессивный синглентный кислород, а обычный триплстный Красновский, . Осипов, , спектрофотометрию, хемилюминесценцию Владимиров, , хроматографические Осипов, , химические Осипов, и биохимические методы Абрамова, . В нормальных условиях процесс СРО находится под строгим контролем ферментативных и неферментативных систем клетки. Принято делить химические соединения и физические воздействия, влияющие на скорость свободнорадикального окисления биомолекул, на прооксиданты усиливают свободнорадикальные процессы и антиоксиданты тормозят СРО. Антиоксиданты, обрывающие цепь Липидная фаза Водная фаза . Рис. Антиоксидантная защита против действия свободных радикалов. Защита организма от АФК осуществляется двумя принципиально различными механизмами вопервых, снижением образования первой АФК путм уменьшения в клетке или его более быстрого использования дыхательной цепью ввиду снятия е контроля ДрЬГ Скулачев, вовторых, функционированием антиоксидантных систем АОС, которые включают как низкомолекулярные антиоксиданты, так и антиоксидантные ферменты Воскресенский, Зайцев, Кулинский, Храпова, . Основные АОС организма представлены на рис. К группе высокомолекулярных соединений ферментов антиоксидантной защиты и белков, связывающих катализаторы свободнорадикальных процессов ионы и Си, относят соответственно супероксиддисмутазу, церулоплазмин, пероксидазу, каталазу, глутатионзависимые ферменты и альбумин крови, трансферрин, ферритин. Супероксиддисмутаза СОД КФ . Ю2 2Н Н2 . Супероксиддисмутазы являются металлоферментами. СОД присутствует во всех основных тканях аэробов Турков, Поберзкина, Дубинина, . Известно несколько дисмутаз, отличающихся по содержанию в них металлического компонента медьцинк, медь, марганец, железо, первичной структуре и по распределению в тканях и клетках животных, растений и микроорганизмов ivi, . СОД найдена в цитоплазме и органеллах практически всех клеток млекопитающих i, . Си и .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.251, запросов: 145