Развитие сAMP-и Ca2+-сигнальных систем при дифференцировке бурых адипоцитов

Развитие сAMP-и Ca2+-сигнальных систем при дифференцировке бурых адипоцитов

Автор: Бронников, Геннадий Ефремович

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Докторская

Год защиты: 2004

Место защиты: Пущино

Количество страниц: 260 с. ил.

Артикул: 2638277

Автор: Бронников, Геннадий Ефремович

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ
Список сокращений
Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Физиолотя бурого жира
Глава 2. Адренергические рецепторы в физиологии адипоцитов
Глава 3. Сигнальные пути, сопряженные с активацией адренергических рецепторов
3.1. ЗРсцспторы и сАМР
3.2. Устройство Са2сигнальной системы
3.3. Роль р и агадренорецепторов в инициации Са2сигнализации
3.4. МАРКсигналышй путь
Глава 4. Белокразобщитель иСР1 функция и регуляция экспрессии
Глава 5. Бурая жировая ткань как эндокринный орган
Часть II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Г лава 1. Выделение и культивирование бурых адипоцитов
1.1. Выделение бурых преадипоцитов
1.2. Культивирование бурых адипоцитов
1.3. Рост клеток в бсссывороточной среде
1.4. Постановка экспериментов и сбор клеток
Глава 2. Изучение процесса аккумуляции сАМР
2.1. Определение количества с АМР
2.2. Измерение аденилатциклазной и фосфодиэсгеразной активностей
2.3. Анализ данных
2.4. Статистический анализ.
Глава 3. Изучение экспрессии генов
3.1. Выделение и электрофорез РНК
3.2. Нозернблот
3.3. р и РзАдренорецепторы
3.4. Белокразобщитель 1СР 1
3.5. Фактор роста эндотелия сосудов УЕОР
Глава 4. Вестернблот
4.1. Определение содержания митохондриальных антигенов
4.2. Анализ уровня фосфорилирования киназы Кгк 1 2
Глава 5. Исследование внутриклеточной кальциевой сигнализации
5.1. Культивируемые клетки.
5.2. Клеточная суспензия Глава 6. Исследование радиолигандных характеристик адренергических рецепторов
6.1. Выделение плазматических мембран
6.2. Исследование радиолигандного связывания НСОР7
6.3. Исследование радиолигандного связывания 3Нпразоцина
6.4. Проверка возможного связывания пептидов с адренорецепторами.
6.5. Анализ данных
Глава 7. Регистрация дыхания зрелых бурых адипоцитов
7.1. Выделение зрелых бурых адипоцитов
7.2. Измерение поглощения кислорода клетками
7.3. Метод использования халотана
7.4. Метод выделения митохондрий и измерение их дыхания
Глава 8. Другие аналитические методы
8.1. Определение ДИК
8.2. Определение 1Рз
8.3. Определение белка
8.4. Определение включения 3Нтимидина
Г лава 9. Опыты на животных
9.1. Тестирование действия киоторфина на мышах
9.2. Эффект хладоадаптации на агадренорецеиторы в БЖТ
9.3. Акклимированные к холоду хомяки.
Часть Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ
Глава 1. Роль радренорецепторов и сАМР в регуляции развития бурых адипоцитов
в культуре
1.1. Норадреналин как митоген
1.2. В трансдукции сигнала на ускорение пролиферации бурых адипоцитов участвуют ррецепторы и сАМР
1.3. Корреляция между уровнем сАМР и амплитудой физиологических ответов бурых адипоцитов на норадреналин
1.4. Переключение регуляции физиологии бурых адипоцитов с на рзадренорецептор обусловлено дифференцировкой клеток
1.5. Роль агадренорсцепторов в регуляции уровня сАМР на разных стадиях
дифференцировки бурых адипоцитов
Глава 2. сцЛдрснорсцепторы и Са2сигнализация в культивируемых зрелых бурых
адипоцитах
2.1. Демонстрация участия арецепторов в ингибировании
накопления сАМР
2.2. Доказательство участия арецепторов в ингибировании
накопления с АМР
2.3. Протсинкиназа С или ионы Сал участвуют в подавление аккумуляции сАМР
2.4. Ионы Са2 участвуют в осгрсцепторзависимом подавлении аккумуляции сАМР
2.5. Повышения Саф достаточно для подавление аккумуляции с АМР
2.6. Повышение Са2, в зрелых бурых адипоцитах вызывает стимуляцию СаМзависимой фосфодиэстеразы.
Глава 3. Развитие сАМР и Са2систем сигнализации и их взаимодействие при
дифференцировке бурых адипоцитов в культуре
3.1. Изменения в сАМРсигнализации при развитии бурых адипоцитов
в культуре
3.2. Изменения в индуцируемой НА и Изо сАМРсигнализации
3.3. Изменения в сАМР и Са2сигнализациях, индуцируемых Изо
3.4. Различия во взаимодействии сАМР и Са2сигнализаций, индуцированных НА и Изо в культивируемых бурых адипоцитах
Глава 4. Регуляция экспрессии генов белкаразобщителя иСР1 и фактора роста
эндотелия сосудов УЕОК
4.1. Роль с АМР и Са2сигнализаций в регуляции экспрессии гена белкаразобщителя
4.2. Норадрсналин индуцирует экспрессию фактора роста эндотелия сосудов активируя тирозиновую киназу Бгс через сАМРРКАсигнальный путь
Глава 5. Взаимоотношение между сАМРсигнализацией и функциональными
ответами зрелых бурых адипоцитов, изолированных из БЖТ
5.1. Физиологическая десенсигизация зрелых бурых адипоцитов при акклимации хомяков к холоду
5.2. Анестетик халотан подавляет термогенез в бурой жировой ткани
Глава 6. Система Са2сигнализации в предшественниках бурых адипоцитов
6.1. Кинетика Са2сигнализации в клеткахпредшественниках бурых адипоцитов
6.2. В бурых преадипоцитах отсутствует мкостной вход ионов С а2
6.3. В бурых преадипоцитах Са2сигнализаиия индуцируется через 0адренорецепторы и сАМР
6.4. Использование кальциевых агонистов для исследования Са2сигнальной системы в бурых преадипоцитах
6.5. Развитие Са2сигнальной системы при дифференцировкс клеток 5 Глава 7. Исследование роли неадренергических факторов в гиперплазии бурой
жировой ткани
7.1. Регуляция нейропептидами пролиферации бурых преадипоцитов в культуре, культивация клеток в бессывороточных средах
7.2. Регуляция нейропептидами пролиферации бурых преадипоцитов
в бурой жировой ткани мышей i viv
7.3. Исследование причин происходящего в противофазе развития и инволюции бурой жировой ткани и тимуса у сусликов
Часть IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Г лава 1. рРецепторы и аккумуляция с АМР
Глава 2. Взаимодействие Са2 и сАМРсигнальных систем
Глава 3. Регуляция экспрессии генов
3.1.1
3.2. V
Глава 4. Пептиды и медленная Са2сигнальная система
4.1. Пептиды
4.2. Медленная Са2сигнализация
4.3. Колоколообразность кривых дозозависимости индукции Са2сигнализации в клеткахпредшественниках бурых адипоцитов
4.4. Пересгройка Са2сигнальной системы
ВЫВОДЫ
Список работ, опубликованных по теме диссертации
Список цитированной литературы


Р3, сопряженной со связыванием агониста с рецептором . Эксирес
сия в БЖТ всех трех подтипов iрецепторов была продемонстрирована в работе iii . Однако, если для iподтипа были найдены только следовые количества мРНК, то экспрессия подтипов Ха и i была очень высока для аюподтипа значительно выше, чем в сердце или мозге, а ДЛЯ i дрецепторов тот же уровень, что и в сердце, но выше чем в мозге. Существует мнение, что iподтип на самом деле отсутствует в БЖТ, а присутствие его мРНК обусловлено загрязнением образцов белым жиром, где этот подтип только и экспрессируется в значительном количестве . Было показано, что iрецепторы играют важную роль в развитии БЖТ, инициированной Холодовым стрессом и кафстерийной диетой. При этом растт как плотность рецепторов . РНК iii . Удивительно, но уровень и белков, через которые осуществляется сопряжение рецепторов с генерацией вторичных мессснжеров, при хладоадаптации падает v . Заметного вклада рецепторов в инициацию норадреналином дыхания и липолиза в бурых адипоцитах акклимированных к холоду крыс зарегистрировано не было i . Сами по себе iагонисты не оказывали существенного эффекта на дыхание клеток, но усиливали действие р3агонистов . Адренорецепторы. Этот тип рецептора широко представлен практически во всех тканях. Рецеиторы разделены на три подтипа согласно трм генам, которые кодируют этот тип рецептора. Все три подтипа оказывают одинаковое физиологическое действие, ингибируя активность аденилатциклазы через iбелок Рис. Л. Эта регуляция чувствительна к коклюшному токсину, который осуществляет рибозилирование iбелка, чем инактивирует его и прерывает передачу сигнала. Функционально активные а2адренорецепторы были найдены в БЖТ эмбриона и новорожденных крысятах i . Было показано наличие этих рецепторов в культивируемых бурых адипоцитах крыс, но при этом они присутствовали только в дифференцированных клетках . Стимуляция а2рецепторов вызывала подавление дыхания и липолиза в бурых жировых клетках i . БЖТ v, . Глава 3. Сигнальные пути, сопряженные с активацией адренергических рецепторов. АМРсигналъный путь. Связывание агониста с любым подтипом адренорецсптора приводит к появлению вторичного мсссенжера сАМР и активации с А М Рсигнального пути, с АМР продуцируется аденилатциклазой АС из АТР, но практически сразу начинается его гидролиз, обусловленный присутствием в клетке фосфодиэстеразы Рис. А. АС локализована в плазматической мембране и находится там в неактивном состоянии. Цепь событий начинается с того, что адренорецептор со связанным гормоном агонистом взаимодействует с гетеротримерным белком при этом , прочно связанный на заменяется на , что приводит к его диссоциации на и , последний из которых взаимодействует с аденилатциклазой и активирует е. Диссоциация комплекса , обусловленная превращением в в результате СТРазной активности , приводит к инактивации АС и остановке генерации сАМР. Холерный токсин способен рибозилировать , что вызывает потерю i активности, предотвращает диссоциацию комплекса и приводит к постоянной активации АС . Ряд нсгидролизуемых аналогов , таких как и , вызывают принципиально тот же эффект постоянной активации vii, . Далее с АМР связывается с неактивной формой. А РКА, две регуляторныедвс каталитические субъединицы и диссоциирует этот комплекс с высвобождением ферментативно активных мономеров каталитической субъединицы. РКА фосфорилируст много разных белков, как в цитоплазме, так и в ядре клетки, чем существенно изменяет их активность, что далее формируется в клеточный ответ на гормон. Величина клеточного ответа стимуляция липолиза или дыхания клеток, экспрессия физиологически важных генов и т. АМР. Это, так сказать, краткое изложение схемы сАМРсигнального пути для учебника. В реальности схема много сложнее, так как существует множество исключений из не. Согласно классическим представлениям в регуляции активности АС участвуют субъединицы двух типов бслков, и i первый обеспечивает активацию АС, инициируемую адренорецепторами, тогда как второй ингибирует активность АС после связывания гормона с агрецептором.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.208, запросов: 145