Синтез и скрининг нативных белковых библиотек в бесклеточной системе трансляции на основе экстракта из зародышей пшеницы

Синтез и скрининг нативных белковых библиотек в бесклеточной системе трансляции на основе экстракта из зародышей пшеницы

Автор: Александров, Александр Николаевич

Год защиты: 2003

Место защиты: Москва

Количество страниц: 124 с. ил

Артикул: 2609773

Автор: Александров, Александр Николаевич

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Стоимость: 250 руб.



Известно, что целый ряд вирусных и некоторые клеточные мРНК некепированы, и это обстоятельство не мешает их эффективной трансляции Оказалось, что эти мРНК используют другой, кспнезависимый механизм инициации трансляции, в который вовлечены внутренние участки 5НТО мРНК, ответственные за связывание рибосомы, так называемые i i i I элементы. Эти элементы представляют собой протяженные структурированные участки 5ПТО, которые часто способны представлять инициирующий кодон сразу же в Ручаспок субчастицы рибосомы. Необходимо отметить, что механизмы инициации с участием I элементов многообразны. Влияние кепа на инициацию бесклеточнойтрансляции было исследовано сточки зрения эффективности трансляции, корректности инициации и стабильности мРНК. РНК вируса везикулярного стоматита оказались и мМ, соотвегственно. В ионных условиях, оптимальных для трансляции нативной мРНК, дскепированная мРНК транслируется с ЭЗП и 1 эффективностью. Однако, оптимизация этих условий для декепированной мРНК позволила увеличить эффективность трансляции до ЭЗП и ЛРК , . Также было показано, что трансляция кеиированной мРНК зрительного опсина быка в 2 раза эффективнее некепированного аналога, однако это снижение эффективности компенсировали увеличением концентрации декепированной мРНК в системе трансляции ЭЗП Зозуля, Щ. При исследовании ингибирования трансляции в ЭЗП и ЛРК было установлено, что аналоги кепа ингибируют трансляцию разных мРНК в разной степени i, , . Авторами был сделан вывод о том, что бтерминальный ксп может быть важен для трансляции некоторых мРНК независимо от выбранной бесклеточной системы трансляции. Однако вопрос, почему трансляция декодированных мРНК менее эффективна, оставался открытым. При исследовании причин низкой эффективности трансляции декодированных мРНК глобина и вируса мозаики люцерны выяснили, что дскенированиые мРНК в большей степени подвержены гидролизу в ЭЗП, чем кепнрованные, причем устойчивость последних к гидролизу не была связана с трансляцией целостность мРНК в ЭЗП определяли в отсутствие аминокислот, а являлась, повидимому, результатом защиты 5конца молекулы мРНК от 5экзонуклеазной деградации , . Аналогичные результаты были получены на реовирусных мРНК iiiiii, . Кроме того, было показано, что для достижения одинаковой эффективности синтеза белка с декодированных матриц требуется в 6 мРНК глобина и в мРНК вируса мозаики люцерны раз больше фактора инициации I4 в системе, чем при использовании соответствующих копированных мРНК , . Необходимо отметить, что к настоящему времени появилось большое количество данных, не подтверждающих модель , например, механизм шунтирования или механизм регуляции синтеза аминокислот у дрожжей , ii, эти данные обсуждаются ниже. Серьезной биохимической проверке в реконструированной системе трансляции и с разными матрицами а не только с мРНК глобина, имеющими простую и короткую 5лидерную последовательность, модель никогда не подвергалась. Роль пошА последовательности в трансляции. Известно, что полиаденилирование премРНК происходит в ядре посттранскрнпционно. Первым этапом полиадснилированпя является нуклеазнос расщепление первичного транскрипта, которое происходит в участке, удаленном на нуклеотидов от консервативной последовательности . Ниже участка расщепления находится менее консервативная богатая последовательность. Полагают, что и богатый 3участок первичного транскрипта в комплексе с факторами расщепления и полиаленшшрования ответст венны за регуляцию первого этапа полиадснилированпя и синтеза полиАзатравки нуклеотидов ядерной полиАсинтетазой , , . ПолиАпоследовательносги мРНК разных организмов очень гетерогенны и достигают 0 нуклеотидов у высших эукариот и около 0 нуклеотидов у низших , . После транспорта в цитоплазму длина полнАцепи уменьшается до нуклеотидов , . Повидимому, роль обсуждаемой последовательности в метаболизме РНК сводится к обеспечению транспорта РНК из ядра и, что особенно важно для трансляции, к регуляции инициации трансляции и защите матриц от Зэндонуклеаз. Функции полиАхвоста мРНК осуществляются с помощью полиАсвязывающего белка ii i, РАВР.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.247, запросов: 145