Получение и изучение противоопухолевого потенциала антиангиогенных полипептидов и химиопрепаратов направленного действия

Получение и изучение противоопухолевого потенциала антиангиогенных полипептидов и химиопрепаратов направленного действия

Автор: Дигтярь, Антон Васильевич

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2006

Место защиты: Москва

Количество страниц: 122 с. ил.

Артикул: 2870075

Автор: Дигтярь, Антон Васильевич

Стоимость: 250 руб.

Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Ангиогенез и его роль в опухолевом росте
1.2. Эндогенные ингибиторы ангиогенеза матриксного происхождения
1.2.1. Эндостатин
1.2.2 Эндостатнноподобный фрагмент коллагена XV XV
1.2.3. Аррестен
. . i .i. . к
1.2.4. Тумстатин
1.2.5. Эндорепеллин
1.2.6. Другие ингибиторы ангиогенеза матриксного происхождения
1.3. Эндогенные ингибиторы ангиогенеза нематриксного
происхождения
1.3.1. Система плазминогена человека и е роль в профессии опухолей
1.3.2. Аигиостатин
1.3.3. Фактор пигментного эпителия
1.3.4. Другие ингибиторы ангиогенеза нематриксного происхождения
1.4. Терапевтический потенциал ингибиторов ангиогенеза
1.5. Направленный транспорт химиопрепаратов в раковые клетки
1.6 Липосомы как системы направленной доставки и
контролируемого высвобождения противоопухолевых препаратов Глава 2. Материалы и методы исследовании
2.1. Получение нативного ангиостатина человека
2.2. Получение рекомбинатного эндостатина человека
2.2.1. Конструирование экспрессионного вектора эндостатина человека
2.2.2. Выбор штаммапродуцента ii i
2.2.3. Получение эндостатина путем экспрессии его гена в штамме Е. i
2.2.4. Выделение эндостатина человека из клеток штаммапродуцента Е. i
2.3. Получение липосомных форм ангиостатина и эндостатина
2.4. Получение рекомбинантного 3го домена офетопротеина человека
v лл
2.5. Выделение эпидермального фактора роста мыши
2.6. Культивирование клеточных линий
2.7. Получение и анализ биологических свойств пептидов модифицированных аналогов рецепторсвизывающих участков ЭФР и ТФРа человека
2.7.1. Синтез пептидов
2.7.2. Исследование интернализации пептидов
2.7.3. Изучение динамики интернализации ФИТЦмеченых пептидов в опухолевые клетки
2.8. Получение конъюгатов доксорубицина ДР с векторными
пептидами I . . . .
2.9. Определение цитотоксической активности ЦТА препаратов i vi
2.9.1. Определение ЦТА ангиостатина и эндостатина в отношении эндотелиальных клеток линий АВАЕ и V
2.9.2. Определение ЦТА ангиостатина, эндостатина и конъюгатов ДР с векторными пептидами в отношении клеток линий 5, А1, 7, НТ, V4 и фибробластов человека
2.9.3. Определение выживаемости клеток
2 Оценка противоопухолевой активности препаратов i viv
. Животные и опухоли
. Дозы препаратов и схемы их введения
. Объм опухолей
. Продолжительность жизни животных
2 Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты и их обсуждение
3.1. Выделение и очистка ангиостатина
3.1.1. Выделение плазмипогеиа из плазмы крови человека
3.1.2. Выделение ангиостатина путм ограниченного протеолиза плазминогена
3.2. Получение рекомбинантного эндостатина человека
3.2.1. Конструирование экспрессионного вектора и биосинтез
рекомбинантного эндостатина человека в клетках штаммапродуцеита .i 3
3.2.2. Выделение эндостатина человека из клеток штаммапродуцента . i
3.3. Получение линосомных форм ангиостатина и эндостатпнл
3.4. Получение рекомбинантного 3го домена афетопротеииа человека
3.5. Выделение и очистка эпидермального фактора роста мыши
3.6. Исследование возможности доставки модифицированных рецепторсвязывающих фрагментов ЭФР и ТФРог человека в опухолевые клетки путм рецепторопосредованного эндоцитоза
3.7. Получение конъюгатов ДР с векторными пептидами
3.8. Определение ЦТА препаратов i vi
3.8.1. Определение ЦТА ангиостатина и эндостатина в отношении эндотелиальных клеток линий V, АВАЕ и V
3.8.2. Определение ЦТА ангиостатина и эндостатина в отношении
гладко мышечных, соединительнотканных и раковых клеточных линий
3.8.3. Определение ЦТА конъюгатов, ДР с АФПзд, ЭФР, ЭФРмф и ТФРмф
3.8.4. Микроскопическое исследование динамики интернализации и внутриклеточного распределения конъюгата ТФРмфДР в раковых клетках
3.9. Исследование противоопухолевой активности полученных препаратов i viv
3.9.1. Сравнительное исследование противоопухолевой активности
. . I 1. Г II I I. IЧ.1 И I I III II I
свободных и липосомных форм ангиостатина и эндостатина на мышах с привитыми солидными опухолями
3.9.2. Исследование противоопухолевой активности конъюгатов ДР с векторными пептидами па мышах с привитыми солидными опухолями
3.9.3 Изучение противоопухолевой активности антиангиогенных
препаратов и конъюгатов ДР с векторными пептидами при их совместном применении i viv
Список литературы
.
Список сокращений
а.о. аминокислотный остаток ЛФП афстопротеин
АФПзд рекомбинантный белок 3й домен скфетопротсина человека
ДР доксорубицин
ДСН натрия додецилсульфат
ИАП ингибитор активаторов плазминогена
ИПТГ изопропилтиогалактопиранозид У .
ИФАТ ингибитор фибринолиза, активируемый тромбином
КЦкармииомицин
МКМ межклеточный матрикс
ММП матрикс пая ые метаплопротеаза ы
ОРО относительный размер опухоли
ПААГ полиакриламидный гель
РЭФР рецептор эпидермального фактора роста
СПЖ средняя продолжительность жизни экспериментальных животных ТАП тканевой активатор плазминогена ТФРатрансформирующий фактор ростаа ТФРЗ трансформирующий фактор роста
ТФРмф пептид со структурой НгЫАргФенЛсйВалГлнГлуЛспСерПроАлаСООИ УСПЖ увеличение средней продолжительности жизни экспериментальных животных ФИТЦ флуоресцеииизотиоцианат
ФСБ фосфатносолсвой буфер 0, М МаНгРО, 0, М С1, 7.
ЦТА цитотоксическая активность ЭФР эпидермальный фактор роста
ЭФРмф ПСПТИД СО структурой Н2КМстТирИлеГлуЛлаЛсйАспСерТирАлаЦисСОН
А1 линия клеток эпидермоидиой карциномы человека
АВАЕ линия эндотелиоцитов аорты быка .
аРСБ кислый фактор роста фибробластов
ВСЕ линия эндотелиоцитов капилляров быка
ЬРОБосновный фактор роста фибробластов
ЬБМС линия гладкомышечных клеток аорты быка
линия клеток карциномы предстательной железы человека
Ц 1 . . V.
ЕОМАлиния клеток гемангиоэндотелиомы мыши
киназа фокальных контактов
1гидроксибензотриазол
НТлиния клеток фибросаркомы человека
V эндотелиальные клетки пупочной вены человека
I молярная концентрация вещества, вызывающая гибель клеток
I интерлейкин ы
киназа, фосфорилирующая концевой фрагмент фактора лгочная карцинома Лыоис iГ
протеин киназы, активируемые митогенами
7 линия клеток карциномы молочной железы человека
iv рецептор ы, активируемый ые протеазами
фактор пигментного эпителия
фосфоглицераткиназа
ь. i.i
.V3 линия клеток карциномы яичника человека
V4I0 линия иммортализованных эндотел ионитов лимфатических сосудов мыши фактор некроза опухолиа
Введение
Актуальность


Г II I I. IЧ. ИПТГ изопропилтиогалактопиранозид У . ФСБ фосфатносолсвой буфер 0, М МаНгРО, 0, М С1, 7. АВАЕ линия эндотелиоцитов аорты быка . Ц 1 . Актуальность проблемы. Одной из важнейших задам, стоящих перед медициной, является разработка новых аффективных методов терапии злокачественных новообразовании. В последние десятилетия значительным достижением в этой области является доказательство необходимости процесса ангиогенеза для роста злокачественных солидных опухолей и создание концепции противоопухолевой терапии, основанной на подавлении ангиогенеза 3, , . Ангиогепез процесс роста капилляров из кровеносных сосудов, в результате которого образуются новые сосудистые сети. При этом патологический рост новых сосудов обуславливает прогрессию ряда заболеваний, прежде всего рост и метастазирование злокачественных опухолей . Подавление ангиогенеза ведт к торможению опухолевого роста и развития метастазов. Среди известных в настоящее время эндогенных ингибиторов ангиогенеза наиболее перспективными являются белки ангиостатин и эндостатин. Однако эти полипептидные ингибиторы ангиогенеза проявляют высокую терапевтическую эффективность преимущественно в больших дозах 0 мгкг массы тела и требуют продолжительного курса лечения . Щ 1 . Следует отметить, что несмотря на значительные успехи, достигнутые в последние годы при становлении и развитии антиангиогенной терапии, для полной ремиссии применение только антиангиогенных препаратов часто является недостаточным. Более эффективным подходом представляется комбинированная противоопухолевая химиотерапия, сочетающая в себе препараты с различными механизмами действия. Очевидно, что комбинированная терапия антнангиогенными агентами и препаратами направленного действия является наиболее перспективным избирательным и эффективным путм воздействия на злокачественные опухоли. Исходя из этого, актуальной целыо данного исследования являлось изучение терапевтического потенциала комбинированной противоопухолевой терапии аптиаигиогенными полипептидами и препаратами адресного воздействия па клетки злокачественных новообразований. В. Научная новизна работы. Сконструированы плазмидные векторы ii i, позволяющие эффективно осуществлять индуцированный биосинтез рекомбинантного эндостатипа человека в клетках штаммапродуцента. I к i x. ЭФР и трансформирующего фактора роста ТФРа человека. Впервые i viv продемонстрирована более высокая терапевтическая эффективность комбинированного применения антиангиогенных полипептидов и цитотокснческих химиопрепаратов направленного действия по сравнению с моиотерапией каждым из этих терапевтических агентов. Практическая значимость исследования. Обнаружение более высокого терапевтического потенциала i viv лииосомных форм ангиостатина и эндостатииа по сравнению с их свободными формами делает возможным развитие этого направления в области создания новых противоопухолевых средств. Апробация работы. Результаты исследований были доложены на XI Российском национальном конгрессе Человек и лекарство апрель г. Москва, па м конгрессе июль г. Инсбрук, Австрия, на I Международной конференции Молекулярная медицина и биобезопасность октябрь г. Москва, на I Международной научнопрактической конференции Медбнотек март г. Москва, на Международной конференции Рецепция и внутриклеточная сигнализация июнь г. Пущино, а также на научных семинарах кафедры биологической химии ММА им. И.М. Сеченова. Апробация работы состоялась на совместном заседании научнометодической конференции кафедры биологической химии ММА им. И.М. Сеченова и отдела биохимии Московского НИИ медицинской экологии сентября г. Публикации. По теме диссертации опубликовано печатных работ, оформлена 1 заявка на выдачу патента РФ на изобретение. Структура диссертации. Диссертация изложена на 2 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение, выводы, список цитированной литературы. Работа иллюстрирована рисунками и 9 таблицами.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.217, запросов: 145