Молекулярно-генетические механизмы ранних стадий химически-индуцированного канцерогенеза у мышей

Молекулярно-генетические механизмы ранних стадий химически-индуцированного канцерогенеза у мышей

Автор: Тимофеева, Ольга Алексеевна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 2000

Место защиты: Новосибирск

Количество страниц: 132 с.

Артикул: 312093

Автор: Тимофеева, Ольга Алексеевна

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ АСПЕКТЫ ХИМИЧЕСКИИНДУЦИРОВАННОГО ГЕПАТОКАНЦЕРОГЕНЕЗА
1.1. Стадия инициации химического канцерогенеза
1.1.1. Метаболическая активация проканцерогенов
1.1.1.1. Механизм индукции генов подсемейства Сур 1а
1.1.1.2. Экспрессия генов цитохромов Р0 подсемейства 1А
1.1.1.3. Чувствительность к индукции опухолей и уровень экспрессии генов цитохромов Р0
1.1.1.4. Образование аддуктов ДНК и чувствительность к индукции опухолей
1.1.1.5. Изменение активности факторов транскрипции .
1.1.2. Мутации как причина инициации канцерогенеза
1. 1.2.1. Мутации в гене НгаБ
1.1.2.2. Роль гена НгаБ в формировании чувствительного к индукции опухолей генотипа.
1.1.3. Ген Кгаэ один из детерминирующих чувствительность к действию канцерщена в легких
1.1.3.1. Различия в структуре гена у мышей, различающихся по чувствительности к индукции опухолей легких
1.1.3.2. Частота мутаций в разных аллелях гена Кгаэ
1.1.4. Трансформация клеток связана с изменением экспрессии некоторых генов
1.1.4.1. Клеткипредшественники пренеопластических образований
1.1.4.2. Канцерогены вызывают изменение скорости пролиферации гепатоцитов
1.1.4.3. Химические канцерогены вызывают изменения в экспрессии некоторых генов
1.1.4.4. Изменения экспрессии гепаиитарных ядерных факторов .2. Предпочтительный рост инициированных клеток приводит к
РАЗВИТИЮ НЕОПЛАСТИЧЕСКИХ ОБРАЗОВАНИЙ
1.2.1. Митогенное действие
1.2.2. Ингибирование апоптоза
1.2.3. Нарушение межклеточных коммуникаций
1.3. Различия в чувствительности к индукции опухолей ПРОЯВЛЯЮТСЯ НА СТАДИИ промоции канцерогенеза
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ
2.2. МЕТОДЫ
2.2.1. Определение нуклеотидной последовательности
аллельных вариантов гена Кгаэ
2.2.1.1. Получение препаратов геномной ДНК
2.2.1.2. Амплификация ДНК
2.2.1.3. Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля
2.2.1.4. Прямое секвенирование ПЦРфрагментов
с использованием полимеразы
2.2.2. Определение частоты мутаций в кодоне гена
в опухолях печени
2.2.2.1. Аллельспсдифичная полимеразная цепная реакция
2.2.3. Определение уровня экспрессии мРНК
2.2.3.1.олучение препаратов суммарной РНК из печени
2.2.3.2. Получение кДНК
2.2.3.3. Конкурентная ПЦР
2.2.3.3.1. Получение конкурентных стандартов ДНК
2.2.3.3.2. Определение количества кДНК
методом конкурентной ПЦР
2.2.3.4. Мультиплексная ПЦР
2.2.4. Дифференциальный дисплей мРНК
2.2.4.1. Амплификация кДНК со случайными праймерами
2.2.4.2. Клонирование ПЦРфрагментов
2.2.4.2.1. Получение фрагментов ДНК с iIIадаптором
2.2.4.2.2. Приготовление вектора по липким концам
2.2.4.2.3. Лигирование фрагментов ДНК по липким концам
2.2.4.3.4.Трансформация компетентных клеток .i,
подготовленных с использованием МпС
2.2.4.3.5. Скрининг бактериальных колоний с помощью ПЦР
2.2.4.3.6. Микровыделение плазмидной ДНК 2.2.4А Секвенирование клонов, содержащих
ПЦРные фрагменты ДНК
2.2.4.4.1. Выделение плазмиды для секвенирования
с использованием силикогеля
2.2.4.4.2. Секвенирование плазмидной ДНК фрагментом Кленова
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Мутации в кодоне гена в опухолях печени,
ИНДУЦИРОВАННЫХ У МЫШЕЙ сильными и слабыми КАНЦЕРОГЕНАМИ
3.2. Изучение корреляции между полиморфизмом нуклеотидной
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ГЕНА И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬЮ МЫШЕЙ
К ХИМИЧЕСКОЙ ИНДУКЦИИ ОПУХОЛЕЙ ЛЕГКОГО
3.2.1. Анализ аллельных вариантов гена у исследуемых
линий мышей
3.2.2. Уровень экспрессии гена у исследуемых линий мышей
3.3. ИНДУЦИБЕЛЬНОСТЬ СУР1А В ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ, РАЗЛИЧАЮЩИХСЯ ПО ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ГЕПАТОКАНЦЕРОГЕННОМУ ДЕЙСТВИЮ ОАМИНОАЗОТОЛУОЛА
3.4. Изменения в экспрессии генов в печени мышей с различной ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬЮ К ДЕЙСТВИЮ оаминоазотолуола на ранних
СРОКАХ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ КАНЦЕРОГЕНА
3.4.1. Идентификация диффернциально экспрессирующихся генов
методом дифференциального дисплея мРНК
3.4.2. Уровень экспрессии генов i и у мышей линий
и
3.4.3. Уровень экспрессии генов i и у мышей линий
, , , и
3.4.3.1. Индукция микросомальной глутатион трасферазы
3.4.3.2. Индукция ингибитора сериновых протеаз
3.5. Влияние ортоамино азотолуола на глюкокортикоидную ИНДУКЦИЮ ТИРОЗИНаминотрансферазы
3.5.1. Отмена глюкокортикоидной индукции под действием ОАТ в печени мышей инбредных линий
3.5.2. Отмена глюкокортикоидной индукции в печени крыс и мышей под действием видоспецифичных канцерогенов
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
2ААФ 2ацетиламинофлюорен
ЗМе ДАВ 3метил4диметиламиноазобензол
СУР цитохром Р
Сур 1 а , Сур1а2 цитохромы Р0 мышеи
СУР1А1, СУРА2 цитохромы Р0 крыс, человека
ОСТ углутамилтранспептидаза
С8ТР глутатион Бтрансфераза плацентарного типа
ОиБСН гу ан иди н изо гиоцианат
НОР фактор роста епатоцитов
1РТС изопропитиорВгалактозид
тОБТ микросомальная глутатион трансфсраза
Бр ингибитор сериновых протеаз
ТОР фактор роста опухолей
таг фактор некроза опухолей
Ха 5бромо4хлоро3индолилрРгалактопиранозид
АФП альфафетопротеин
БИ бензоапирен
ГЯФ гепацитарные ядерные факторы
ДМБА диметилбензаантрацсн
ден додецилсульфаг натрия
ДЭНА диэтилнитрозамип
ДЭПК диэгилпирокарбонат
МР 7метоксирезоруфин
МРОД 7МРодеэтилаза
мх метилхолантрен
НЭМ нитрозоэтилмочевина
ОАТ ортоаминоазотолуол
ПАУ полициклические ароматические углеводороды
Сх коннексин
Та тирозинаминотрансфераза
ТФА Отетрадеканоилфорболацетат
тхдд 2,3,7.8тетрохлордибензодиоксин
ФБ фенобарбитал
ЭДТА этиленами нтетраацетат
ЭМС этилметансульфонат
ЭР 7этоксирезоруфин
ЭРОД 7ЭРоде эти лаза
ВВЕДЕНИЕ


Недостаточная разработанность вопроса о начальных изменениях в функционировании нормальных клеток под действием канцерогенных соединений и причинах развития химическииндуцированных опухолей послужили основанием для изучения механизмов канцерогенеза в печени мышей и сравнительного анализа этих механизмов у мышей разных инбредных линий с различной чувствительностью к действию химических канцерогенов. Нам представляется, что, выявив изменения, специфичные для чувствительных и резистентных животных, мы сможем лучше понять механизм канцерогенеза. Возможность изучения эпигенетических изменений на ранних стадиях канцерогенеза особенно привлекательна, тем что, накапливая фактический материал об изменении экспрессии отдельных генов под влиянием химических соединений, мы получаем возможность идентифицировать первичные мишени действия канцерогенов, и устранять или модифицировать влияние канцерогена еще на ранних стадиях, блокируя экспрессию одних генов или активируя другие. Одной из наиболее перспективных экспериментальных моделей для изучения ранних эффектов действия канцерогенов является канцерогенез в печени мышей под действием аминоазокрасителей. Это обусловлено высокой видовой и органной специфичностью действия данного класса канцерогенов. Ортоаминоазотолуол ОАТ вызывает развитие опухолей исключительно в печени мышей, причем мыши разных инбредных линий . Целью данного исследования было выявление молекулярных изменений в структуре ДНК и активности отдельных генов, возникающих под влиянием канцерогенных соединений у мышей с различной чувствительностью к их действию. ДНК на развитие опухолей какие изменения в экспрессии генов могут быть связаны с появлением иницированных клеток и в дальнейшем пренеопластических очагов или обеспечивать устойчивость к действию канцерогенов. Оценить частоту мутаций в кодоне гена в опухолях печени мышей, индуцированных химическими соединениями с разным канцерогенным и мутагенным потенциалом и сопоставить проявление данных эфектов. На модели канцерогенеза легких, выяснить, наблюдается ли корреляция между чувствительностью к индукции опухолей легкого уретаном у мышей разных линий и полиморфизмом в структуре гена Кг, для которого ранее было показано участие в формировании чувствительного фенотипа, и предложить возможные механизмы влияния полиморфных аллелей. Определить, как чувствительность мышей разных линий к канцерогенному действию моаминоазотолуола связана с уровнем его метаболизма и Сур1а2. Идентифицировать гены, изменяющие свою гранскрипционную активность на ранней стадии после введения ОАТ, в печени мышей инбредных линий, различающихся по чувствительности. Оценить влияние канцерогенов на регуляцию экспрессии печеньспецифичных генов на примере отмены глюкокортикоидной индукции тирозинаминотрансферазы под действием ОЛТ у мышей разных линий. В настоящее время известен ряд соединений, канцерогенное действие которых установлено не только в эксперименте, но и в результате эпидемиологических исследований у человека. Примерами могут служить случаи возникновения рака кожи под действием угольной пыли, рака крови при действии аминокрасителсй, рака легких при курении, а также рака печени при экспозиции к афлатоксину В1 i , . Длительное время изучению свойств и действия химических канцерогенов мешало разнообразие их химической природы они представляют собой обширную группу варьирующих по структуре органических и неорганических соединений Худолей, . Только в конце семидесятых была сформулирована гипотеза об общем механизме действия всех этих соединений. Действие некоторых соединений может быть прямым, т. Несмотря на структурное разнообразие, все химические канцерогены характеризуются одним общим свойством они несут положительный заряд и, следовательно, электроактивны. ДНК и белков i. Считается, что образование аддуктов ДНК, которое может приводить к появлению мутаций в протоонкогенах или генахопухолевых супрессорах, является главной причиной трансформации клеток иод действием канцерогенных соединений. Экспериментальные исследования показали, что развитие химически индуцированного канцерогенеза многостадийный процесс, в котором можно выделить стадии инициации, промоции и профессии. Впервые модель двухстадийного канцерогенеза была предложена для образования опухолей кожи у мышей i .

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.213, запросов: 145