Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli

Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli

Автор: Гервазиев, Юрий Викторович

Год защиты: 1999

Место защиты: Москва

Количество страниц: 98 с. ил.

Артикул: 231554

Автор: Гервазиев, Юрий Викторович

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Стоимость: 250 руб.

Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli  Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli 



ЭПР электронный парамагнитный резонанс. Генотип использованных штаммов . Одним из самых выдающихся открытий в биохимии за последнее десятилетие является установление важной роли малой молекулы 0 в регуляции многих биохимических процессов в организме. С этого времени опубликовано огромное количество работ, посвященных биохимическим, физиологическим и фармакологическим эффектам, вызываемым 0. Эндогенный оксид азота является нейротрансмиттером, вазодилятатором и цитотоксическим агентом . Избыточное образование 0 обуславливает ряд патофизиологических процессов, таких как ишемическсе повреждение мозга, гиперэлыезия, воспалительные и аутоиммунные заболевания, артриты. В ранних обзорах, посвященных 0. Интерес к 0 со стороны ученых самых разных специальностей чрезвычайно велик. Нашумевшая Виагра лишь один из первых заметных результатов работы исследователей в этом направлении . Эндогенный 0 образуется в результате окисления аргинина, осуществляемого ферментом синтззой ЕС 1 . В настоящее время известно, что ферменты этого семейства различаются как по тканевой локализации, так и по механизмам регуляции их активности . Идентифицировано шесть кофакторов , последний из которых был найден лишь в г через десять лет после открытия и описания фермента Тем не менее, до сих пор нет полной ясности в понимании механизмов ферментативного катализа образования 0. В настоящее время одним из лимитирующих факторов изучения механизмов функционирования фермента является малая доступность очищенных препаратов . Вследствие низкого уровня экспрессии синтаэы в тканях организма большую проблему представляет выделение фермента 8 активной форме в количествах, достаточных для его структурнофункциональной характеристики, изучения свойств и механизмов регуляции активности. Весьма актуальными, таким образом, становятся попытки создания эффективных систем экспрессии рекомбинантных синтаз, позволяющих преодолеть подобные затруднения. Целью данной работы являлось создание высокоэффективной системы гетерологической экспрессии активной индуцибельной изоформы синтазы оксида азота из макрофагов мыши в клетках . Разработана оригинальная схема гетерологической экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота из макрофагов мыши в клетках . Получены количественные характеристики уровня экспрессии i. Показано, что относительное количество синтезируемого бактериальными клетками фермента, а также его удельная активность не ниже, чем в аналогичных работах коллег из США, опубликованных ранее. Разработанная и успешно апробированная впервые в России эффективная система экспрессии позволяет осуществлять исследования по изучению структурнофункциональных свойств нативных и мутантных форм i. С помощью этой бактериальной системы экспрессии возможна наработка функционально активной синтазы в препаративных количествах и при небольших затратах. Обнаружен полиморфизм гена, кодирующего кальмодулин в ооцитах лягушки X vi. В процессе выполнения диссертационной работы разработана принципиально новая схема сушки белковых гелей, которая не требует ни специального оборудования, ни дорогостоящих реактивов и может быть рекомендована к использованию в тех лабораториях, где это оборудование отсутствует. Диссертационная работа состоит из введения, 7 глав обзора литературы, главы Материалы и методы исследования, 5 глав раздела Результаты исследования и их обсуждение, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 0 источников. Работа изложена на страницах машинописного текста, содержит рисунков и 3 таблицы.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.221, запросов: 145