Кинетическое изучение Na,K-АТРазы

Кинетическое изучение Na,K-АТРазы

Автор: Векуа, Мзия Георгиевна

Шифр специальности: 03.00.04

Научная степень: Кандидатская

Год защиты: 1984

Место защиты: Тбилиси

Количество страниц: 126 c. ил

Артикул: 3432598

Автор: Векуа, Мзия Георгиевна

Стоимость: 250 руб.

ВВЕДЕНИЕ .
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .
ГЛАВА I. ХАРАКТЕРИСТИКА Ха.КАТРазной СИСТЕМЫ.
1.1. Локализация и распространение .
1.2. Ка.КАТРаза основа активного транспорта
ионов а и К.
1.3. Молекулярная структура а.КАТРазы
1.4. Регуляция .АТРазы II
1.5. Частные реакция Ка,КАТРазы
1.6. Участки специфического связывания
1.7. Кинетические модели Ка,КАТРазы
ГЛАВА 2. КИНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ФЕИЛЕНТНЫХ СИСТЕМ.
2.1. Уравнение стационарной скорости .
2.2. Методы анализа кинетических кривых
2.3. Определение количества центров связывания ГЛАВА 3. Э1ПЕШМЕНТАШ1АЯ ЧАСТЬ
3.1. Материалы исследования .
3.2. Методы исследования
3.2.1. Получение мембранных препаратов. Обработка дезоксихолатом.
3.2.2. Обработка микросомалвной фракции
йодистым натрием.
3.2.3. Определение концентрации белка и а,КАТРазной активности
3.3. Математическая обработка данных .
3.3.1. Методы статистической оценки
3.3.2. Оценка линейности функции
ГЛАВА. 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
4.1. Определение количества активаторных и ингибиторных катионных участков .АТРазы
4.2. Изучение зависимости скорости от отношения концентрации ионов Ка и К
4.3. Кинетическая схема рКРРазы
4.3.1. Зависимость рРазной активности
от ионов К .
4.3.2. Зависимость гидролиза от ионов Ка.
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
В Ы В О Д Ы .
ПРИЛОЖЕНИЕ
Л И Т Е Р А Т У Р А ИЗ
АТР аденозинтрифосфат АДР аденозиндийосфат с дальтон ДОХ дезоксихолат КАДН никотинамидцинуклеотид
На.КАТРаза На,Кактивируемая, 1Ас стигдулируемая аденозинтрифосфатаза К.Ф.3.6.1.3 КЭМ 1этилмалеймид рКРРаза паранитрофенилфосфатаза Р неорганический фосфат Трис трисоксиметиламинометан ТХУ трихлоруксусная кислота ЭГТА этиленгликольтетраацетат ЭДТА этилендиаминотатраацетат ШР ядерный магнитный резонанс
ВВЕДЕНИЕ


Однако этот факт не исключает существование видовых различий, а также особенностей, связанных со специфическими функциями фермента в разных тканях. Например, показано, что УаКАТРаза из мозга чувствительна к нейротрансмиттерам, тогда как На,КАТРаза из печени, почек и эритроцитов этой чувствительностью не обладает З. П.Кометиани, . Показано также, что эффект специфичен и имеет определенную функциональную значимость М. З.Джапаридзе а др. Неоднократно отмечались и видовые различия в чувствитель
ности к разным лигандам. Например, в отличие от препаратов других животных быка, собаки, ягненка Ма,КАТРаза из сердца и почек крыс мало чувствительна к уабаину А. А.Волдырев, . Гипотезу Скоу о том, что . АТРаза идентична транспортной системе натрийкалиевого насоса , можно считать в настоящее время доказанной, поскольку фермент может быть очищен ,, кристаллизован iv . Ма,Ктранспорт при скорости, достигающей физиологической , i. Молекулярная структура . За последние годы достигнуты большие успехи в изучении молекулярной структуры а,КАТРазы. Активный солюбилизованный препарат можно получить обработкой неионными детергентами любролом ЯХ i . Данные о молекулярной массе отдельных субъединиц и об их молярном соотношении варьируют в небольших пределах. Так, например, молекулярная масса большой субъединицы составляет 0 о , а молекуляреая масса меньшей субъединицы оценивается как i . В последнее время обнаружен небольшой протеолипид с молеку
лярной массой II , который обозначают как у субъединицу . Его функция в данное время неизвестна. На этой же субъединице локализован и центр связывания сердечных гликозидов , ,. Так как АТР вступает в реакцию с цитоплазматической стороны мембраны, а гликозиды действуют снаружи, субъединица, по видимому, должна проходить сквозь мембрану. Функции субъединицы хорошо не известны, однако приписывать ей лишь чисто структурную функцию заякоривания в мембране не следует, так как показано, что антитела против субъединицы вызывают ингибирование активности , ,. Разногласия существовали относительно молярного соотношения о и субъединиц в функциональном комплексе Уа,КАТРазы i , i ,. Оценки варьировали от до , однако, в настоящее время соотношение Ы i определено достаточно аккуратно в разных препаратах а,КАТРазы и установлено, что в комплекс фермента субъединицы входят в эквимолярных количествах. Есть данные, подтверждающие, что функциональный комп леке представляет собой димер, каждый протомер которого имеет структуру А. А.Бодцырев, . Первичная структура субъединиц Уа,КАТРазы пока не расшифрована, однако оценки их аминокислотного, углеводного и фосфолипидного состава имеются . X субъединица по аминокислотному составу более гидрофобна, р субъединица связывает большее количество фосфолипи
дов. Существенна разность и в углеводном составе, например, галактозамин присутствует лишь в субъединице и т. А.Л. Болдырев, . Важная роль липидного окружения в функционировании Ка,КЛТРазы не вызывает сомнения. Все активные препараты содержат липиды однако вопрос о специфичной необходимости отдельных липидов долго оставался нерешенным. Делипидизация растворителями и детергентами приводит к полной потере активности. Если восстанавливать активность таких препаратов добавлением различных липидов, можно получить определенную информацию о потребности в них. Так, например, показано, что для восстановления активности необходим фосфатидилсерин, или, по крайней мере, кислый фосфолипид i , ,, однако, когда фосфатидилсерин очищенной Уа,КАТРазы ферментативным путем переводили в фосфатидилэтаноламнн, влияния на активность это не оказало. Было сделано заключение, что абсолютной необходимости в какомлибо фосфолипиде нет, хотя активность увеличивается в присутствии фосфолипидов с отрицательно заряженными группами . Таким образом, можно считать, что функциональный комплекс а. КАТРазы содержит белковую, липидную и углеводную части. Предполагается, что белковая часть молекулы выполняет каталитическую функцию, липидная часть обеспечивает структурную организацию комплекса и его конформационную стабильность, а углеводная часть ответственна за ориентацию в мембране А.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

28.06.2016

+ 100 бесплатных диссертаций

Дорогие друзья, в раздел "Бесплатные диссертации" добавлено 100 новых диссертаций. Желаем новых научных ...

15.02.2015

Добавлено 41611 диссертаций РГБ

В каталог сайта http://new-disser.ru добавлено новые диссертации РГБ 2013-2014 года. Желаем новых научных ...


Все новости

Время генерации: 0.206, запросов: 145